郭显坡
- 作品数：21 被引量：50H指数：4
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- 一例肾型鸡传染性支气管炎的诊断被引量：5
- 2008年
- 2007年9月,郑州某鸡场发生一起疑似肾型鸡传染性支气管炎。将分离毒株接种20日龄肉鸡,于接种后第4 d出现精神不振、拉稀,第6 d出现死亡。分离病毒可致死部分鸡胚及产生卷曲胚,但不能凝集鸡红细胞,经1%胰酶处理后能凝集鸡红细胞。经过实验室检查结果结合流行病学调查、临床症状和剖检变化,初步诊断为肾型鸡传染性支气管炎。
- 陈红英李新生段廷云贾艳艳郭显坡崔保安
- 关键词：传染性支气管炎肾型
- 猪细小病毒与猪伪狂犬病毒二重SYBR Green I实时荧光PCR检测引物及方法
- 本发明公开了猪细小病毒与猪伪狂犬病毒二重SYBR Green I实时荧光PCR检测引物及方法，设计与合成引物，利用引物检测猪细小病毒与猪伪狂犬病毒的二重SYBR Green I实时荧光PCR检测方法，包括提取样品的DNA...
- 魏战勇陈红英胡慧李明凤崔保安郭显坡
- 文献传递
- 猪伪狂犬病毒与猪圆环病毒2型二重SYBR Green I实时荧光PCR检测引物及方法
- 本发明公开了猪伪狂犬病毒与猪圆环病毒2型二重SYBR Green I实时荧光PCR检测引物及方法，设计与合成出引物，利用引物检测猪伪狂犬病毒与猪圆环病毒2型的二重SYBRGreen I实时荧光PCR检测方法，包括提取样品...
- 魏战勇胡慧陈红英崔保安李明凤郭显坡贾艳艳
- 文献传递
- 鸡α干扰素基因的克隆、原核表达及抗病毒活性测定被引量：19
- 2009年
- 通过PCR技术从罗曼鸡肝脏基因组中扩增鸡α干扰素(ChIFN-α)全基因,并克隆和测序。序列分析表明,ChIFN-α基因全长为582 bp,亚克隆其成熟蛋白编码基因489 bp,利用基因重组技术构建了重组质粒,使ChIFN-α置于原核表达载体pQE30的T5启动子下并同6×His(多聚组氨酸标签)-Tag融合。经酶切和PCR鉴定,DNA测序证实重组质粒pQEChIFN-α构建正确;将pQEChIFN-α转化大肠杆菌M15感受态细胞,用IPTG诱导表达。SDS-PAGE和Westernblot证实表达出分子质量为19.80 kDa的融合蛋白。表达的蛋白以包涵体形式存在,经变性、复性处理后,在Vero细胞上抗水泡性口炎病毒的活性为1.16×103U/mg。本研究成功表达了ChIFN-α,表达的重组蛋白具有一定的生物活性。
- 陈红英宋凌云崔保安胡功政贾艳艳郭显坡
- 关键词：Α干扰素克隆原核表达抗病毒活性
- 猪伪狂犬病毒与猪圆环病毒2型二重SYBR GreenⅠ实时荧光PCR检测方法的建立被引量：4
- 2014年
- 参照GenBank登录的相关基因序列,设计了2对引物分别用于扩增伪狂犬病毒(PRV)gH基因与猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2基因的部分片段。将测序正确的PRV gH基因与PCV2ORF2基因片段克隆入pGEM-T Easy载体,转化大肠杆菌DH5α,经测序鉴定后得到阳性重组质粒,作为标准品模板建立SYBR GreenⅠ荧光定量PCR标准曲线和熔解曲线,并对其灵敏性、特异性和重复性进行验证。结果显示,PCV2与PRV荧光定量PCR的标准曲线的Tm值分别为80.8℃和86.7℃,熔解曲线特异,灵敏度分别可达215拷贝/μL和180拷贝/μL,是普通PCR检测方法的100倍。结果表明,建立的PCV2与PRV荧光定量PCR检测方法实现了2种病毒的同时检测,能够对PRV、PCV2混合感染的临床病料进行快速诊断。
- 郑兰兰张君涛李明凤郭显坡陈红英崔保安魏战勇
- 关键词：猪圆环病毒2型猪伪狂犬病毒SYBRI
- 猪圆环病毒2型SYBR-Green 1实时荧光定量PCR检测方法的建立被引量：5
- 2009年
- 【目的】建立一种能够快速、灵敏地检测猪圆环病毒2型(PCV2)的SYBR-Green 1实时荧光定量PCR方法。【方法】根据已报道的PCV2ORF2基因组序列,设计并合成1对引物。通过常规PCR扩增PCV2ORF2基因,将鉴定正确的ORF2基因片段克隆入pTG19-T载体中,转化大肠杆菌JM109,经PCR及测序鉴定后得到阳性重组质粒,作为标准品模板建立SYBR-Green 1荧光定量PCR标准曲线和溶解曲线,并做灵敏性、特异性和重复性试验。【结果】PCV2荧光定量PCR标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,溶解曲线特异,相关系数为0.9988,最低检测的拷贝数为1拷贝/25μL,特异性和重复性较好。【结论】建立了检测PCV2的SYBR-Green 1荧光定量PCR方法,为该病的早期诊断及定量分析PCV2感染程度奠定了基础。
- 贾艳艳李明凤王东方崔保安陈红英魏战勇吕晓丽郭显坡
- 关键词：SYBR实时定量PCRPCR检测方法
- 猪伪狂犬病毒SYBR-GreenⅠ实时定量PCR检测方法的建立被引量：9
- 2009年
- 利用PCR技术扩增出猪伪狂犬病毒gH基因中187 bp的片段,并克隆到pGEMT载体上,纯化的质粒作为PCR检测的标准模板,以10倍梯度稀释质粒为标准模板,进行SYBR GreenⅠ荧光定量PCR扩增并制作标准曲线,建立了猪伪狂犬病毒的荧光定量PCR检测方法.该方法检测灵敏度可达1.26×102拷贝.μL-1,与猪圆环病毒,猪细小病毒,猪繁殖与呼吸综合征病毒,猪瘟病毒不发生交叉反应,具有良好的特异性和重复性;对15份疑似病料进行了检测,发现均为荧光定量PCR阳性,而常规PCR只能检测出6份阳性.结果表明,建立的实时荧光定量PCR具有特异、敏感、快速、定量、重复性好等优点,可用于临床PRV感染的检测.
- 李明凤魏战勇郭显坡贾艳艳陈红英王学兵崔保安
- 关键词：猪伪狂犬病毒实时荧光定量PCR
- 猪细小病毒与猪圆环病毒2型二重SYBR Green I实时荧光PCR检测引物及方法
- 本发明公开了一种猪细小病毒与猪圆环病毒2型二重SYBR Green I实时荧光PCR检测引物及方法，设计与合成引物，利用引物检测猪细小病毒与猪圆环病毒2型的二重SYBR Green I实时荧光PCR检测方法，包括提取样品...
- 崔保安魏战勇陈红英李明凤党玉丽郭显坡
- 文献传递
- 贵宾犬α-干扰素基因的扩增、克隆与序列分析被引量：1
- 2010年
- 参照基因库中收录的犬α-干扰素基因序列设计1对引物,应用PCR技术直接从贵宾犬肝组织基因组DNA中扩增IFN-α基因,将回收得到的特异性片段克隆于pGEM-T Easy载体中,转化感受态细胞DH5α,经蓝白斑筛选,质粒PCR鉴定及酶切鉴定筛选阳性重组质粒,测定其核苷酸序列。测序结果表明,贵宾犬α-干扰素基因全长为564 bp,包含一个完整的开放阅读框,编码187个氨基酸的多肽,推导氨基酸序列有3个潜在的N-糖基化位点,有10个与二硫键形成有关的半胱氨酸。用DNAStar软件将所得序列与人和其他种动物的IFN-α基因进行核苷酸及氨基酸同源性比较,并通过绘制系统进化树可知,IFN-α基因存在种属的差异性,亲缘关系越近,同源性越高。
- 宋亚鹏陈红英崔保安贾艳艳郭显坡张蕾
- 关键词：IFN-Α扩增基因克隆
- 猪繁殖与呼吸综合征的RT-PCR诊断与防制
- 2007年7月，周口市某猪场发生了一种以初产猪流产、死产为特征的疾病。根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲株VR-2332ORF7基因序列设计1对特异性引物，提取流产胎儿的肺、肝等组织中的RNA，经RT—PCR扩...
- 郭显坡吕晓丽崔保安陈红英魏战勇贾艳艳王东方
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒基因序列防制措施
- 文献传递
