贠喆
- 作品数：11 被引量：42H指数：4
- 供职机构：第四军医大学唐都医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金济南军区总医院院长基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 雌二醇通过与雌激素受体β结合抑制骨关节炎滑膜细胞的NF-κB通路发挥抗炎作用被引量：13
- 2016年
- 目的探讨雌二醇在骨关节炎病程中对滑膜细胞产生抗炎作用的机制。方法分离并鉴定滑膜细胞,利用免疫荧光染色观察滑膜细胞表达雌激素受体β(ERβ)的情况;而后对滑膜细胞进行分组:空白对照组,10 ng/m L白细胞介素1β(IL-1β)处理组、雌二醇处理组(用10 ng/m L IL-1β预处理同时,添加10-7mol/L的雌二醇培养)、雌二醇联合雌激素受体阻断剂四氢大麻酚(THC)处理组(用10 ng/m L IL-1β预处理同时,添加10-7mol/L雌二醇和10-5mol/L THC),各组处理36 h。实时定量PCR检测滑膜细胞中核因子κB抑制蛋白α(IκBα)和IL-6的mRNA水平,Western blot法检测滑膜细胞中IκBα和IL-6的蛋白水平。结果骨关节炎滑膜细胞中有ERβ表达;IL-1β组IL-6的mRNA和蛋白水平表达均增高;IκBα蛋白水平降低,而mRNA水平升高,同时磷酸化IκBα蛋白水平升高;与IL-1β组相比,IL-1β联合雌二醇组,IL-6、IκBα、p-IκBα蛋白及mRNA水平下降。用IL-1β、雌二醇、雌激素受体阻断剂三者联合组,则可见IL-6、IκBα、p-IκBα蛋白及mRNA水平较IL-1β处理组无明显变化。结论雌二醇通过结合ERβ抑制NF-κB通路激活从而发挥抗炎作用。
- 张恩尉张弘韬刘峰舟董川姚云贠喆简伟明马保安
- 关键词：雌二醇
- 沉默p53和p21基因延缓髓核细胞衰老退变实验研究被引量：11
- 2012年
- 目的髓核细胞衰老凋亡是椎间盘退行性变的病理基础,探讨髓核细胞表型分子及延缓髓核细胞衰老退变的机制。方法原代培养8～10周龄雄性SD大鼠髓核细胞,免疫细胞化学染色鉴定髓核细胞表型分子低氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor 1α,HIF-1α)、HIF-1β、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)及Ⅱ型胶原表达。小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)瞬时转染髓核细胞沉默p53、p21后行RT-PCR及Western blot检测沉默效率,siRNA转染前后细胞衰老相关β半乳糖苷酶(senescence associated-β-galactosidase,SA-β-gal)染色检测髓核细胞衰老变化,流式细胞仪检测髓核细胞周期变化,MTT法生长曲线分析髓核细胞增殖变化。结果免疫细胞化学染色显示髓核细胞表达HIF-1α、HIF-1β、MMP-2及Ⅱ型胶原。第35代髓核细胞转染p53、p21 siRNA后RT-PCR及Western blot检测示p53、p21表达明显受到抑制。第35代髓核细胞SA-β-gal染色阳性率明显高于第1代髓核细胞(P<0.001);正常第35代髓核细胞经p53 siRNA(p53转染组)和p21 siRNA(p21转染组)转染后,SA-β-gal阳性率明显低于正常第35代髓核细胞(正常组)和加入脂质体LipofectaminTM2000而无siRNA的第35代髓核细胞(阴性对照组),差异有统计学意义(P<0.001)。细胞周期分析显示,p53转染组及p21转染组G1期百分比均明显低于正常组和阴性对照组(P<0.05),S期百分比明显高于正常组和阴性对照组(P<0.05)。MTT生长曲线显示转染p53、p21 siRNA后可促进髓核细胞增殖。结论沉默p53、p21基因可通过调节细胞周期而抑制髓核细胞衰老退变,改善椎间盘退变过程;沉默p53、p21基因可能是潜在的治疗椎间盘退行性变的方法。
- 张涛钱济先姬振伟马云雷贠喆蔡承魁裘秀春马保安
- 关键词：髓核细胞低氧诱导因子1基质金属蛋白酶2小干扰椎间盘退行性变
- hERG shRNA表达载体构建及其稳定转染骨肉瘤细胞系MG-63、SOSP-9607的建立
- 2012年
- 目的:构建hERG钾离子通道蛋白(human ether-a-go-go-related gene potassium channel)shRNA表达载体质粒,获得稳定转染干扰质粒的人骨肉瘤细胞系MG-63、SOSP-9607。方法:将4对合成的寡核苷酸链退火形成双链,连接入pGPU6/GFP/Neo表达载体,并测序鉴定。使用脂质体法将重组的质粒转染至MG-63、SOSP-9607,通过G418筛选建立稳定转染的两种细胞系,采用免疫印迹(Western blot)技术检测hERG蛋白的表达。结果:测序结果证实shRNA与载体连接正确,免疫印迹实验证实hERG蛋白表达显著降低。结论:成功构建了hERG shRNA真核表达载体,获得了稳定表达hERG shRNA的人骨肉瘤细胞系MG-63和SOSP-9607。
- 贠喆马云雷张涛蔡承魁韩康杨彤涛庞炜周勇
- 关键词：HERG钾离子通道骨肉瘤SHRNA
- 人源抗HER2单链抗体／鱼精蛋白截短体融合蛋白的表达、纯化及鉴定
- 2012年
- 在人类乳腺癌组织中人类表皮生长因子受体2（HER2）和受体趋化因子4（CXCR4）的表达成正相关，由于HER2与CXCR4／CXCL-12轴在乳腺癌骨转移中的重要作用，使其成为可供选择的肿瘤治疗靶点。本研究将HER2单链抗体（ScFv）与鱼精蛋白截短体（tP）融合，以期获得同时具有抗原与核酸结合活性的ScFv-tP融合蛋白，核酸与该融合蛋白结合后，有望实现小分子干扰RNA（siRNA）的靶向递送，对HER2与CXCR4／CXCL-12轴进行RNA干扰（RNAi），为新型抗肿瘤药物应用于临床提供资料。
- 姜扩陈锐阎博蔡承魁贠喆王芳杨安钢裘秀春
- 关键词：融合蛋白鱼精蛋白单链抗体人类表皮生长因子受体CXCR4RNA干扰
- YM155对骨肉瘤细胞系F5M2增殖和凋亡的影响被引量：1
- 2017年
- 目的:探讨YM155对人骨肉瘤细胞系F5M2的作用及其机制。方法:体外培养人骨肉瘤细胞系F5M2,不同浓度YM155处理人骨肉瘤细胞系F5M2,用MTT法检测其对细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞凋亡率;实时荧光定量PCR检测survivin mRNA的表达;蛋白免疫印迹法检测survivin、caspase-3蛋白的表达。结果:YM155可抑制人骨肉瘤细胞F5M2的增殖,且呈剂量依赖性。随着YM155浓度的升高,人骨肉瘤细胞F5M2凋亡率明显增加,同时能够降低survivin在mRNA水平和蛋白水平的表达,以及激活caspase-3。结论:YM155能够有效抑制人骨肉瘤细胞F5M2增殖,并诱导其凋亡,其可能机制为下调骨肉瘤细胞系F5M2survivin的表达,继而激活caspase凋亡信号通路。
- 陈洁彭诗元贠喆马琼文艳华裘秀春周勇
- 关键词：骨肉瘤SURVIVIN增殖凋亡
- 丁丙诺啡透皮贴剂控制肩周炎患者疼痛的效果观察被引量：5
- 2017年
- 目的:探讨丁丙诺啡透皮贴剂治疗肩关节周围炎的患者对于疼痛的缓解效果和肩关节活动功能的改善作用。方法:搜集本院近5年来门诊就诊及住院治疗的肩周炎患者152例,全部患者均规范化按照VAS评分使用镇痛药物。其中,78例患者在达到中度及以上疼痛水平时,额外加用丁丙诺啡透皮贴剂。每隔3月通过电话随访量化患者疼痛评分变化情况,门诊随访检查患者肩关节活动功能,并使用Constant-Murley肩关节功能评分量表进行数字化评估。结果:152例肩周炎患者在治疗观察期间,疼痛及肩关节活动功能均有一定程度的缓解和改善,在观察期末,平均Constant-Murley肩关节功能评分保持于80分水平。在治疗观察期内,外用丁丙诺啡透皮贴的患者在6-18月期间时,Constant-Murley肩关节功能评分上升速度明显高于对照组(P<0.05)。结论:丁丙诺啡透皮贴剂可以加快肩周炎患者的康复速度,提升肩周炎患者在治疗期间的生活质量。
- 蔡承魁田丽颖马琼贠喆丁勇韩康马保安
- 关键词：肩周炎丁丙诺啡
- miR-15a和miR-16-1模拟物对人骨肉瘤细胞系SOSP-9607凋亡和增殖的影响被引量：1
- 2011年
- 目的:探讨miR-15a和miR-16-1模拟物对于人骨肉瘤细胞系SOSP-9607凋亡和增殖的影响。方法:将SOSP-9607细胞分为实验组和对照组。实验组分为miR-15a组、miR-16-1组、miR-15a+miR-16-1组。以miR-15a组为例,采用miR-15a模拟物(hsa-miR-15a mimics)上调SOSP-9607细胞内的miR-15a表达量。对照组分为阴性对照组和空白对照组。采用流式细胞仪测定细胞凋亡率,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖,并计算细胞增殖效率。结果:通过统计学分析,实验组凋亡率与阴性对照组凋亡率相比明显增高(P<0.05);实验组的细胞增殖率明显低于对照组(P<0.05)。结论:上调SOSP-9607细胞内miR-15a和miR-16-1的表达量可促进SOSP-9607细胞的凋亡并抑制其增殖。
- 蔡承魁贠喆张涛姜扩高杰裘秀春马保安
- 关键词：骨肉瘤细胞凋亡细胞增殖
- 大鼠髓核细胞原代培养及表型鉴定被引量：2
- 2012年
- 目的:探讨Ⅱ型胶原酶联合透明质酸酶消化分离培养髓核细胞及免疫细胞化学表型鉴定的可行性。方法:无菌条件下分离SD大鼠凝胶状髓核,采用Ⅱ型胶原酶联合透明质酸酶消化分离髓核细胞并连续培养,倒置相差显微镜下观察,随后进行免疫细胞化学染色检测不同代次髓核细胞HIF-1、Ⅰ、Ⅱ型胶原、MMP2及蛋白聚糖的表达情况,并给予MTT法测定髓核细胞生长曲线。结果:Ⅱ型胶原酶联合透明质酸酶分离培养原代髓核细胞需要12 d左右贴壁,达95%融合需要34 d,而传代髓核细胞贴壁速率明显增快至10 h,且其倍增时间约为2.5 d;免疫细胞化学显示髓核细胞均表达HIF-1、Ⅰ、Ⅱ型胶原、MMP2和蛋白聚糖,且随着髓核细胞传代其HIF-1α、HIF-1β、Ⅰ型胶原及MMP2表达均增加,但Ⅱ型胶原表达降低,而蛋白聚糖表达无明显差异;MTT法显示随着髓核细胞传代其增殖有所减缓。结论:Ⅱ型胶原酶联合透明质酸酶可成功分离髓核细胞,提高培养效率,且HIF-1α、HIF-1β、Ⅰ、Ⅱ型胶原及MMP2可作为髓核细胞表型分子用于髓核细胞的鉴定。
- 张涛贠喆蔡承魁马云雷姬振伟裘秀春范清宇钱济先
- 关键词：髓核细胞原代培养HIF-1ΑMMP2
- miR-15a-5p和miR-16-5p在骨肉瘤组织中的表达分析被引量：4
- 2017年
- 目的:使用microRNAs基因芯片及实时定量PCR法测定骨肉瘤组织中miR-15a-5p和miR-16-5p的相对表达含量,并与瘤旁组织对比,分析骨肉瘤细胞内miR-15a-5p和miR-16-5p的表达变化。方法:选取34例骨肉瘤组织蜡块样本,使用microRNAs基因芯片观察miR-15a-5p和miR-16-5p在骨肉瘤和瘤旁组织内的表达差异;实时定量PCR法测定骨肉瘤组织和瘤旁组织中miR-15a-5p和miR-16-5p的相对表达含量,并将两种结果对比分析。结果:microRNAs基因芯片结果显示,在骨肉瘤组织中,miR-15a-5p在肿瘤中的表达较瘤旁组织低1.79倍,miR-16-5p较瘤旁组织低1.62倍。实时定量PCR实验结果表明,miR-15a-5p和miR-16-5p表达较瘤旁组织降低,差异有统计学意义(P<0.05)。经过统计学计算,miR-15a-5p在肿瘤中的表达较瘤旁组织低3.14倍,miR-16-5p较瘤旁组织低5.65倍。结论:在骨肉瘤中,miR-15a-5p和miR-16-5p表达含量降低,提示这两种microRNAs在骨肉瘤中可能做为抑癌因子存在。
- 蔡承魁田丽颖韩康贠喆马保安
- 关键词：骨肉瘤
- 人正常及骨关节炎软骨细胞体外培养的对照研究被引量：3
- 2013年
- 目的:研究人正常软骨细胞及骨关节炎软骨细胞的体外分离、培养及鉴定方法,对其生物学特性进行对照并评价其生物学活性。方法:取人创伤性截肢与骨关节炎全膝置换的无菌膝关节软骨,采用两步酶消化法分离培养人关节软骨细胞,并进行传代培养。通过倒置相差显微镜下观察细胞形态,绘制生长曲线,测细胞增殖,甲苯胺蓝染色及II型胶原免疫组织化学染色对细胞进行对照研究。结果:骨关节炎软骨细胞形态似成纤维细胞,生长速度明显较正常软骨细胞慢。MTT测细胞增殖显示,第2、4、6代骨关节炎软骨细胞在相同时间点大都比同代正常软骨细胞增殖速度慢(P<0.05)。甲苯胺蓝及II型胶原免疫组化染色显示,骨关节炎软骨细胞染色较正常软骨细胞浅,经多次传代后基本无着色。结论:正常软骨细胞5代以内细胞生长良好,生物学特性明显,5代以后出现去分化现象。骨关节炎软骨细胞增殖慢,生物学特征退变早,符合软骨细胞退变的表现。这为骨关节炎在软骨细胞水平的研究提供了实验基础。
- 童迅贠喆张栋赵新文曾照辉于洋马保安
- 关键词：人软骨细胞骨关节炎细胞学
