蔡莹
- 作品数：1 被引量：6H指数：1
- 供职机构：中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所更多>>
- 发文基金：中国科学院知识创新工程重要方向项目国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 腺相关病毒携带hTERT启动子调控的TRAIL基因特异性杀伤肿瘤细胞被引量：6
- 2008年
- 背景与目的:腺相关病毒(adeno-associated virus)作为载体已被广泛用于肿瘤的基因治疗研究。肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factorrelated apoptosis-inducing ligand,TRAIL)基因可迅速诱导多种肿瘤细胞的凋亡,是一个安全有效的肿瘤杀伤基因。本研究旨在构建能在肿瘤细胞内特异性表达TRAIL基因的靶向腺相关病毒,并探讨其体外抗肿瘤效应的可能机制。方法:利用肿瘤特异性启动子端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)构建特异性杀伤肿瘤细胞的腺相关病毒载体pAAV-hTERT-TRAIL。通过与pAAV-RC、pHelper共转染HEK293细胞包装出病毒AAV-hTERT-TRAIL。将该病毒体外转染人结肠癌SW620细胞、人肝癌HepG2细胞、人肺癌A549细胞和正常细胞NHLF、MRC5后,检测TRAIL基因的肿瘤特异性表达。MTT法检测其对细胞增殖的影响,ELISA、Westernblot法以及流式细胞仪检测细胞的凋亡,并分析其体外抗肿瘤效应的可能机制。结果:成功包装出病毒AAV-hTERT-TRAIL。RT-PCR、Western blot和免疫组化法均证实AAV-hTERT-TRAIL能介导TRAIL基因在肿瘤细胞内特异性表达,但在正常细胞内不表达。以100 MOI AAV-hTERT-TRAIL感染细胞96h后,SW620、A549和HepG2细胞的增殖率分别是41.55%、44.29%、49.95%,NHLF和MRC5细胞的增殖率分别是84.59%和87.22%。Westernblot检测发现AAV-hTERT-TRAIL可激活Caspase通路,流式细胞仪和ELISA方法检测证实AAV-hTERT-TRAIL可诱导细胞凋亡。结论:hTERT的存在增强了腺相关病毒所携带TRAIL基因表达的肿瘤靶向性和对正常细胞的安全性,由它调控的杀伤基因可介导肿瘤细胞特异性的细胞毒效应。
- 齐荣蔡莹李兵华林志新顾锦法
- 关键词：SW620细胞腺相关病毒TRAILHTERT启动子
