蒋才富
- 作品数：10 被引量：20H指数：3
- 供职机构：华中师范大学生命科学学院昆虫研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 昆虫离体细胞总膜蛋白的提取及双向电泳分析
- 2004年
- 探讨适用于双向电泳的昆虫离体细胞总膜蛋白提取技术及适于双向电泳染色的高灵敏度蛋白质银染技术。以粉纹夜蛾细胞系BT1-TN - 5B1- 4为材料 ,比较了传统的Kwa法和Sigma公司的ProteoPropTM MEMBRANEEXTRACTIONKIT提取BT1-TN - 5B1离体细胞总膜蛋白 ,SDS -PAGE及双向电泳结果表明Sigma公司试剂盒提取的总膜蛋白效果较好 ,并且适用于双向电泳分析 ;比较了两种蛋白银染方法 ,确定并优化了一种灵敏度较高适于双向电泳的银染方法 ,得到了理想的膜蛋白 2 -DE图谱。
- 蒋才富刘凯余洪华珠彭蓉郑进彭建新
- 关键词：膜蛋白双向电泳银染技术昆虫离体细胞
- 抗苏云金杆菌毒素Cry1Ac粉纹夜蛾细胞系的特性研究被引量：3
- 2004年
- 为了从离体细胞水平探讨昆虫对苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白的部分抗性机制,本文采用活化的Cry1Ac 毒素对粉纹夜蛾BTI-TN-581-4细胞连续筛选86代,获得了高水平抗性细胞,研究了其某些特性。它对Cry1c 产生了低水平的交互抗性,对低渗溶液的耐受性显著增强,双向电泳图谱表明抗性细胞膜蛋白组分发生了明显的变化。膜蛋白组分的变化可能导致了筛选细胞的耐低渗透压和抗Cry1C。
- 刘凯于杨红蒋才富彭建新洪华珠
- 关键词：交互抗性膜蛋白苏云金芽孢杆菌
- RAPD技术用于昆虫离体细胞鉴定的初步探讨被引量：2
- 2004年
- 探讨利用RAPD技术对昆虫离体培养进行快速鉴定的可能性。实验中所选用的细胞材料是美国棉铃虫 (HeliothisZea)细胞株Hz—AM3 (简称Hz)、粉纹夜蛾 (Trichoplusiani)细胞株BTI—TN5B1- 4 (简称 5B1)、斜纹夜蛾 (Spodopteralitura)卵巢细胞株SL1,利用RAPD技术找出三种细胞的差异条带 。
- 邱彤李婷吴刚杜曼丽蒋才富刘凯于余泽华
- 关键词：RAPD纯度
- 对Cry1 Ac毒素敏感性不同的三种BT1-Tn-5B1细胞品系基因组DNA的RAPD及SSR分析
- 2003年
- 用Operon公司W系列和F系的 40个随机引物列对BT1 Tn 5B1Cry1Ac敏感细胞、抗性细胞和抗性衰退细胞的基因组DNA进行PCR扩增。经琼脂糖凝胶电泳和EB显色总共扩增出了 2 5 9条清晰带 ,其中有 2 5 0条带为三种细胞所共有 ,有 9条为特异性扩增带。其中 3条特异性带为敏感细胞和抗性衰退细胞样品共有 ,3条特异性带为抗性细胞和抗性衰退细胞样品所特有 ,1条特异性带为抗性衰退细胞样品特有 ,2条特异性带为抗性细胞和敏感细胞样品共有 ,另外某些带在三种细胞之间还存在明显的强弱和宽窄差异。用三个微卫星引物序列分别对三种细胞的总DNA进行扩增 ,得到了 14条清晰的扩增带 ,发现它们在带形上并无太大差异 ,但有 1条带存在明显的强弱差异。这表明BT1 Tn 5B1细胞对Cry1Ac抗性的产生和衰退与基因组DNA的多态性有关。
- 蒋才富刘凯于洪华珠彭建新余泽华
- 关键词：敏感性基因组DNARAPDSSR分析粉纹夜蛾
- 粉纹夜蛾离体细胞对Bt Cry1Ac毒素抗性分子机理初探
- 以对Bt Cry1Ac毒素十分敏感的BT1-TN-5B1细胞和经过Cry1Ac筛选了83代的同源抗性细胞为实验材料，采用双向电泳和mRNA差异显示技术分别从蛋白质水平和转录水平较系统的揭示了两者之间的差异，另外还通过设计...
- 蒋才富
- 关键词：粉纹夜蛾离体细胞抗性机理
- 粉纹夜蛾类Cry1Ac受体氨肽酶NcDNA片段的克隆与分析被引量：1
- 2004年
- 设计简并引物 ,采用RT PCR方法对粉纹夜蛾Trichoplusiani(H櫣ｂｎｅｒ)细胞系BTI TN 5B1 4的氨肽酶N(aminopeptidaseN ,APN)基因cDNA片段进行了克隆和序列分析 ,通过两对引物扩增出了两种氨肽酶N基因的cDNA片段 ,大小分别为 188bp和5 6 4bp ,分别命名为AS188(GenBank登录号 :CD80 932 4 )和AS5 6 4 (GenBank登录号 :CD80 932 6 )。对这两个片段推导的氨基酸序列进行同源性分析 。
- 蒋才富刘凯于彭蓉彭建新洪华珠
- 关键词：粉纹夜蛾离体细胞氨肽酶N
- 粉纹夜蛾离体细胞对Bt Cry1Ac毒素的抗性发展及其交互抗性被引量：8
- 2003年
- 以Cry1Ac活性毒素逐代筛选抗性粉纹夜蛾离体细胞BTI-TN-581,抗性发展速度呈S形曲线,经56代选择后,抗性比上升至1280倍。在去除选择压力后,抗性比逐渐下降。低水平抗性细胞抗性衰退较快,而高水平抗性细胞抗性衰退较缓慢。抗性比衰退至1.5倍的细胞在复筛后抗性比恢复较快。抗性细胞对苏云金杆菌工程茵GC-91(Bt GC-91)、苏云金杆菌鲇泽亚种(B.t.awazai)和苏云金杆菌库斯塔克亚种(B.t.kurstaki)的复合毒素晶体的活性毒素都具有较高的交互抗性,但对农药无交互抗性,对杆状病毒的敏感性也没发生变化。
- 刘凯于郑丙莲蒋才富洪华珠彭建新
- 关键词：粉纹夜蛾离体细胞抗性交互抗性
- 粉纹夜蛾细胞中Bt Cry1Ac选择抗性的研究及离体品系与毒素结合的比较被引量：5
- 2003年
- 采用BtCry1Ac活性毒素对粉纹夜蛾BTI Tn 5B1细胞进行 5 6代筛选后获得了抗性比为 1 2 80倍的抗性细胞。ELISA检测表明抗性细胞总蛋白和膜蛋白结合的Cry1Ac数量都少于敏感细胞。配体结合Western杂交实验显示 :抗性细胞和敏感细胞的膜蛋白与总蛋白都有 5条电泳迁移率相同的毒素结合多肽带 ,其分子量分别为 2 0 7,1 5 8 5 ,1 1 8 8,72 ,3 8 5kD ;抗性细胞的 1 1 8 8和 72kD的阳性带比敏感细胞的略弱 。
- 刘凯于蒋才富洪华珠彭建新余泽华
- 关键词：粉纹夜蛾细胞抗性机制苏云金芽孢杆菌
- Bt Cry1Ac抗性粉纹夜蛾离体细胞与敏感细胞mRNA的差异显示被引量：1
- 2004年
- 为了研究昆虫对Bt的抗性机制 ,以苏云金芽孢杆菌Cry1Ac活性毒素对粉纹夜蛾离体细胞连续筛选 80代 ,获得了高抗性细胞。采用DDRT PCR技术比较了该抗性细胞与非选择敏感细胞mRNA的差异 ,经反向RNA斑点印迹杂交确证了 5个片段为两种细胞的显著差异表达序列标签(ESTs)。序列分析结果表明 ,敏感细胞特有的三种ESTs都位于cDNA的非编码区 ,两种ESTs(GenBank注册号 :S1 ,CF32 2 4 1 5 ;S3,CF32 2 4 1 7)与数据库中EST没有显著同源性 ,另一种S2(GenBank注册号 :CF32 2 4 1 6)与已登录的某些昆虫的ESTs具有一定的同源性。从抗性细胞特有的R1 (GenBank注册号 :CF32 2 4 1 3)推导出的氨基酸序列与磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶有 60 %～63%的同源性 ,从抗性细胞特有的R2 (GenBank注册号 :CF32 2 4 1 4)推导出的氨基酸序列与黏蛋白类有约 30 %的同源性。这些差异表达基因可能与抗性的形成相关。
- 刘凯于蒋才富洪华珠彭建新余泽华
- 关键词：抗性MRNA差异显示抗性基因离体细胞敏感细胞
- Bt Cry1Ac毒素筛选的粉纹夜蛾离体抗性细胞与敏感细胞蛋白质组的差异分析被引量：3
- 2004年
- 采用双向电泳技术和肽质量指纹图谱技术分析了BtCry1Ac毒素筛选的粉纹夜蛾Trichoplusiani抗性BTI_Tn_5B1_4细胞与同源敏感细胞的蛋白质组的差异。用MelanieViewerⅡ软件在抗性细胞的双向电泳图谱上检测到的平均蛋白质点数为 70 7± 2 5个 (n =3) ,在敏感细胞的双向电泳图谱上检测到的平均蛋白质点数为 6 37± 19个 (n =3) ,其中分辨率高、重复性良好的显著差异点有 10余个。对其中的一个敏感细胞特有的显著差异斑点进行了肽质量指纹图谱分析 ,经数据库查询表明该蛋白质与胞质外周蛋白具有同源性。
- 蒋才富刘凯于彭蓉郑进彭建新洪华珠
- 关键词：CRYLAC双向电泳
