董颖
- 作品数：5 被引量：11H指数：2
- 供职机构：辽宁医学院更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人防御素-5基因原核表达载体pRSET-A的构建被引量：1
- 2008年
- 目的利用分子生物学技术和方法将pRSET-A质粒改建为带有人α-防御素5(HD-5α)基因的新型表达载体pRSET-HD-5α。为大量生产和提纯具有生物活性人防御素5抗菌肽的研究提供实验基础。方法PCR技术,以设计的引物P1/P2从cDNA文库中扩增人α-防御素5基因片段,并将扩增出来的目的基因和pRSET-A质粒用BamHⅠ和EcoRI双酶切后连接构成重组质粒,然后转化大肠杆菌DH-5α,筛选阳性克隆。最后对PCR及酶切鉴定含有目的基因的克隆进行测序和电泳。结果获得α-防御素-5基因片断大小正确,经测序证明其碱基序列为编码目的基因的正确序列;电泳结果证明已将此片段克隆到pRSET-A内。结论成功构建了HD-5α基因的新型表达载体pRSET-A/HD-5α。
- 吴学敏李会单颖卢颖佟伟董颖
- 关键词：克隆
- 铜绿假单胞菌外毒素A原核表达载体的构建及表达被引量：1
- 2008年
- 目的对铜绿假单胞菌外毒素A(PEA)全基因进行基因克隆,构建原核表达质粒并进行表达。方法从铜绿假单胞菌中提取基因组DNA,设计PCR引物扩增出带信号肽的PEA目的基因,经HindⅢ和EcoRⅠ消化后,与PET-32a载体进行连接重组。用限制性内切酶消化、PCR及DNA测序等方法鉴定构建成功后,IPTG诱导目的基因表达。结果SDS-PAGE电泳结果显示,在分子量78kD处有一条明显的新生蛋白带。表达的融合蛋白量约占细菌总蛋白的35%。结论PET-32a-PEA原核表达质粒的成功构建及表达,为进一步研究有效的基因工程疫苗和免疫导向治疗的基因重组毒素奠定了基础。
- 佟伟董颖李会
- 关键词：外毒素A重组质粒基因表达
