- 三种小鼠外周血淋巴细胞亚群正常值比较被引量：2
- 2007年
- 目的测定健康正常Balb/C、C3H/HeJ和C3H/SW小鼠外周血淋巴细胞亚群含量,比较3种小鼠的差异性。方法用流式细胞仪测定Balb/C、C3H/HeJ和C3H/SW小鼠外周血淋巴细胞亚群含量。结果各20例3种小鼠、5种外周血淋巴细胞亚群含量呈正态分布,95%可信区间可以被认可;Balb/C与C3H/SW小鼠除B细胞外其他4种淋巴细胞亚群(T细胞、Ts细胞、Th细胞、NK细胞)含量差异性不大(P>0.05);而C3H/HeJ小鼠5种淋巴细胞亚群(T细胞、B细胞、Ts细胞、Th细胞、NK细胞)含量均比C3H/HeJ、C3H/SW小鼠低,并具有统计学意义(P<0.05)。结论建立了健康正常Balb/C、C3H/HeJ和C3H/SW小鼠5种外周血淋巴细胞亚群含量正常参考值;C3H/HeJ小鼠细胞免疫功能比Balb/C、C3H/SW小鼠低,易受细菌等侵染。
- 张洋朱宝芹阎国辉苏玉虹巴彩凤李会
- 关键词：流式细胞术淋巴细胞亚群正常参考范围
- 人防御素-5基因原核表达载体pRSET-A的构建被引量：1
- 2008年
- 目的利用分子生物学技术和方法将pRSET-A质粒改建为带有人α-防御素5(HD-5α)基因的新型表达载体pRSET-HD-5α。为大量生产和提纯具有生物活性人防御素5抗菌肽的研究提供实验基础。方法PCR技术,以设计的引物P1/P2从cDNA文库中扩增人α-防御素5基因片段,并将扩增出来的目的基因和pRSET-A质粒用BamHⅠ和EcoRI双酶切后连接构成重组质粒,然后转化大肠杆菌DH-5α,筛选阳性克隆。最后对PCR及酶切鉴定含有目的基因的克隆进行测序和电泳。结果获得α-防御素-5基因片断大小正确,经测序证明其碱基序列为编码目的基因的正确序列;电泳结果证明已将此片段克隆到pRSET-A内。结论成功构建了HD-5α基因的新型表达载体pRSET-A/HD-5α。
- 吴学敏李会单颖卢颖佟伟董颖
- 关键词：克隆
- 重组铜绿假单胞菌外毒素A在大肠杆菌中的表达被引量：2
- 2008年
- 目的实现铜绿假单胞菌外毒素A(PEA)全基因的原核载体构建及融合性表达。方法用基因重组技术构建PET-32a-PEA重组体,并在大肠杆菌BL21中进行表达。结果酶切鉴定及测序结果表明PET32a载体上成功地插入了PEA全基因。用IPTG诱导目的基因表达,沸水浴变性后进行SDS-PAGE电泳,在分子量78kD处有一条明显的新生蛋白带。表达的融合蛋白量约占细菌总蛋白的35%。结论成功地对PEA全基因进行了原核载体构建及表达,获得了稳定表达的工程菌,为进一步研出有效的基因工程疫苗和用于免疫导向治疗的重组毒素奠定了基础。
- 佟伟李宏伟李会
- 关键词：铜绿假单胞菌外毒素A重组质粒基因表达
- pGAPZαA/HD5酵母表达载体的构建被引量：4
- 2009年
- 目的利用分子生物学技术和方法将pGAPZαA质粒改建为带有人防御素5(HD5)基因的新型表达载体pGAPZαA/HD5,为大量生产和提纯具有生物活性人防御素5抗菌肽的研究提供实验基础。方法PCR技术,以设计的引物P1/P2从克隆载体pMD18-T/HD5中扩增人防御素5基因片段,并将扩增出来的目的基因和pGAPZαA质粒用EcoRI和XbaI双酶切后连接构成重组质粒,然后转化至E.coliTop10感受态细胞,筛选阳性克隆。最后对PCR及酶切鉴定含有目的基因的克隆进行测序和电泳。结果获得HD5基因片断大小正确,经测序证明其碱基序列为编码目的基因的正确序列;电泳结果证明已将此片段克隆到pGAPZαA内。结论成功构建了HD5基因的新型表达载体pGAPZαA/HD5。
- 吴学敏单颖李华卢颖佟伟张轶博李会
- 关键词：克隆毕赤酵母
- 铜绿假单胞菌外毒素A原核表达载体的构建及鉴定被引量：2
- 2008年
- [目的]对铜绿假单胞菌外毒素A(PEA)全基因进行基因克隆,构建原核表达质粒并加以鉴定。[方法]从铜绿假单胞菌中提取基因组DNA,设计PCR引物扩增出带信号肽的PEA目的基因,经HindⅢ和EcoRⅠ消化后,与PET-32a载体进行连接重组。[结果]PET-32a-PEA原核表达质粒构建完成后,用限制性内切酶消化、PCR及DNA测序等多种方法进行鉴定,证实其构建成功。[结论]PET-32a-PEA原核表达质粒的成功构建,为进一步研究出有效的基因工程疫苗和用于免疫导向治疗的重组毒素奠定了基础。
- 佟伟吴囡李会
- 关键词：外毒素A重组质粒
- 高血脂小鼠Th1/Th2细胞因子的检测及相关性分析被引量：9
- 2007年
- 目的建立高血脂动物模型,探讨高血脂相关免疫损伤和炎症反应机制。方法将40只BALB/C小鼠随机分成高脂组和对照组,观察脂质代谢变化,同时采用流式细胞微球芯片捕获技术检测Th1/Th2细胞因子变化。结果高脂组血清中白细胞介素2、白细胞介素4、白细胞介素5、肿瘤坏死因子α和干扰素γ水平分别为3.75±0.07、6.16±0.55、18.70±4.61、57.97±6.57及6.17±0.76ng/L。与对照组比较,高脂组总胆固醇、甘油三酯、白细胞介素5和肿瘤坏死因子α水平明显升高(P<0.01),而干扰素γ、白细胞介素2和白细胞介素4两组差异无统计学意义(P>0.05);白细胞介素5与肿瘤坏死因子α呈正相关(r=0.79,P<0.05)。结论免疫损伤、炎症反应机制在高血脂动脉硬化发病机制中具有重要作用,并和高血脂协同致病。
- 阎国辉张洋智光苏玉虹李会佟伟潘兴瑜
- 关键词：内科学高脂血症TH1/TH2细胞因子白细胞介素肿瘤坏死因子Α干扰素Γ
- 三种小鼠血清中Th1/Th2类细胞因子正常值比较被引量：2
- 2007年
- 目的建立健康正常BALB/c、C3H/HeJ和C3H/SW小鼠Th1/Th2中5种细胞因子正常水平,比较三种小鼠的差异性。方法用流式细胞仪及CBA试剂盒测定BALB/c、C3H/HeJ和C3H/SW小鼠血清中5种细胞因子水平。结果三种小鼠5种Th1/Th2细胞因子呈正态分布,95%可信区间可以被认可;三种小鼠IL-4I、L-5水平差异性不大(P>0.05),INF-γ、TNF-αI、L-2差异性较大,其中BALB/c小鼠Th1细胞因子水平均比两种C3H小鼠高,其中INF-γ和TNF-α具有显著性意义(P<0.05)。结论本实验建立了健康正常BALB/c、C3H/HeJ和C3H/SW小鼠Th1/Th2中5种细胞因子的正常参考值;BALB/c小鼠比C3H/HeJ、C3H/SW小鼠处于高免疫反应状态。
- 张洋阎国辉苏玉虹朱宝琴李会佟伟智光
- 关键词：TH1/TH2细胞因子正常参考范围
- 犬黑皮质素受体4真核表达载体的构建及在COS-7细胞中的表达被引量：2
- 2007年
- [目的]构建犬黑皮质素受体4真核表达载体并在COS-7细胞中进行瞬间表达。[方法]以犬MC4R线性DNA为模板,进行引物设计,PCR特异性扩增,扩增产物连接到pMD18-T载体上,酶切鉴定后测序。将该片段亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)。重组体pcD-NA3.1(+)-MC4R经过酶切和测序鉴定。采用FuGENE HD介导转染技术将pcDNA3.1(+)-MC4R导入COS-7细胞,提取细胞内总RNA,RT-PCR扩增犬MC4R基因的全长cDNA编码序列。[结果]克隆犬MC4R基因的全长cDNA序列,并以pcDNA3.1(+)表达载体为骨架,构建真核表达载体,测序的扩增片段与GenBank公布的模板序列经Blast比对相似性为99%。采用G418筛选,获得带有pcDNA3.1(+)-MC4R的COS-7细胞。[结论]成功构建犬真核表达载体pcDNA3.1(+)-MC4R,重组体能在真核细胞中表达。
- 聂茹巴彩凤李会张轶博佟伟苏荣健
- 关键词：真核表达载体COS-7细胞
- 铜绿假单胞菌外毒素A原核表达载体的构建及表达被引量：1
- 2008年
- 目的对铜绿假单胞菌外毒素A(PEA)全基因进行基因克隆,构建原核表达质粒并进行表达。方法从铜绿假单胞菌中提取基因组DNA,设计PCR引物扩增出带信号肽的PEA目的基因,经HindⅢ和EcoRⅠ消化后,与PET-32a载体进行连接重组。用限制性内切酶消化、PCR及DNA测序等方法鉴定构建成功后,IPTG诱导目的基因表达。结果SDS-PAGE电泳结果显示,在分子量78kD处有一条明显的新生蛋白带。表达的融合蛋白量约占细菌总蛋白的35%。结论PET-32a-PEA原核表达质粒的成功构建及表达,为进一步研究有效的基因工程疫苗和免疫导向治疗的基因重组毒素奠定了基础。
- 佟伟董颖李会
- 关键词：外毒素A重组质粒基因表达
