纪贤文
- 作品数：17 被引量：58H指数：3
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人凝血因子Ⅸ基因直接注射入小鼠骨骼肌内表达的进一步研究
- 1997年
- 目的：观察人凝血因子ⅨｃＤＮＡ直接注入小鼠骨骼肌后的存在和表达部位。方法：采用免疫组化和核酸杂交技术检测人Ⅸ因子ｃＤＮＡ注入小鼠肌肉后的存在和表达情况。结果：免疫组化和斑点杂交显示肌注４周时有Ⅸ因子的蛋白质和ｍＲＮＡ表达。原位杂交显示肌注４周时局部肌细胞内仍有Ⅸ因子ｃＤＮＡ存在。
- 郭华阳刘昕王传松王燕纪贤文许平庆吕银慧王仁鹏谭骏汪江华
- 关键词：基因治疗骨骼肌直接注射
- 人凝血因子Ⅸ基因（pKG_5－Ⅸ）直接注入小鼠骨骼肌中瞬间表达的研究
- 1994年
- 我们将带凝血Ⅸ因子基因ｃＤＮＡ的ｐＫＧ_５－Ⅸ裸ＤＮＡ直接注入小鼠骨骼肌内，注射后第１４天取小鼠血分离血清进行研究。结果显示：十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）分析中能清晰地看到一与凝血因子ⅨｃＤＮＡ表达相关的特定蛋白带，进一步的实验ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ、ＥＬＩＳＡ及一期法有力地证实了ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结果，人ＦⅨ基因转移小鼠出现５５ｋＤ特异带与人ＦⅨ相符，即证明它确系人ＦⅨ。
- 谭骏王燕纪贤文刘昕朱锡华薛京伦邱信芳
- 关键词：基因表达血友病B
- 人X染色体单拷贝序列的分离及鉴定的研究被引量：1
- 1993年
- 本研究以人/鼠(CHO-K1)细胞总DNA为探针对人X染色体DNA文库进行了3轮筛选,单拷贝顺序的检出率为1.45％。其中DXFD52,71,73,75分别与一组含人X染色体及不含人X染色体的人/鼠杂种细胞DNA进行Southern杂交分析,确定DXFD52,71,73,75含人X染色体专性DNA顺序。采用染色体原位杂交的方法,将DXFD52精确定位于Xq12-q13。并对其进行了部分DNA顺序分析,结果证实DXFD52是人基因组中至今未被分离到的一个单拷贝DNA片段。继而对DXFD52进行限制性酶切图谱分析,并以其为探针在中国重庆地区正常人群中(随机个体38例、3个正常家系成员11例)进行了RFLP研究,发现该探针具有识别Hind Ⅲ,Bgl Ⅱ,Hinf Ⅰ的RFLP。
- 谭骏朱锡华纪贤文梁红陈小义王燕邱信芳薛京伦秦世真张冬梅
- 关键词：DNAX染色体
- 人胚小分子物质对^(60)Co-γ射线照射小鼠所致骨髓抑制的恢复作用被引量：5
- 1992年
- 本文简述了我室提取的人胚小分子物质对^(60)Co-γ射线照射后小鼠血象及骨髓恢复作用的初步报告。 1 材料与方法 1.1 动物分组 动物来自本校动物所BALB/c小鼠94只,体重10～18g,雌雄各半,随机分成3组:A组为实验组30只;B组:为实验对照组34只;C组:为空白对照组30只。 1.2
- 谭骏王燕纪贤文朱锡华孟小明杨宗才
- 关键词：骨髓病
- 人促红细胞生成素cDNA逆转录病毒载体的构建及在NIH3T3和CHO细胞中的表达
- 1997年
- 贫血是慢性肾衰病人常见的症状,其发生的主要原因之一是由于肾脏表达促红细胞生成素(EPO)的量减少。输入基因工程重组的人EPO可以有效地改善病人的症状。由于在体内只有完全糖基化的EPO才有生理活性,所以目前临床所用EPO均来自工程化的哺乳动物细胞,价格昂贵。随着基因治疗研究的进展,人们设想可以采用基因治疗的方法,在体内表达一些有治疗作用的蛋白质。
- 刘昕毛琼国章波郭华阳纪贤文
- 关键词：人促红细胞生成素重组逆转录病毒载体CHO细胞NIH3T3细胞CDNA
- 人白细胞介素3突变体的构建及其在大肠杆菌中表达的研究
- 1997年
- 人白细胞介素3(IL-3)是与造血有关的细胞因子,可直接诱导人骨髓和外周血干细胞的集落形成和增殖。IL-3可通过高亲合力的结合位点对成熟骨髓效应细胞(巨噬细胞、嗜酸性细胞、嗜碱性细胞)发挥作用,可促进巨噬细胞、嗜酸性细胞和嗜碱性细胞的活力,延长存活期并抑制其死亡。rhIL-3还可提高巨噬细胞和嗜酸性细胞的细胞毒、杀菌以及杀癌细胞的能力。IL-3以非融合型蛋白难于在大肠杆菌中高效表达。本室应用遗传工程技术构建了pBV220
- 王燕刘昕万瑛易绍萱纪贤文梁红毛琼国朱锡华
- 关键词：大肠杆菌中表达突变体嗜酸性细胞分子生物起始密码子
- 促红细胞生成素在酿酒酵母中的表达
- 1997年
- 促红细胞生成素(EPO)是一种特异刺激红系祖细胞向功能成熟的红细胞增殖分化的造血生长因子。重组人EPO(rhEPO)应用于临床治疗多种红细胞减少症取得了确切疗效。 酿酒酵母是迄今研究最为深入的真核生物之一,其遗传背景清楚,由此衍生的各种载体宿主菌表达系统较大肠杆菌载体宿主表达系统有更完备的基因表达调控机制和对表达产物的加工修饰及分泌能力;
- 易绍萱吴军刘昕王燕纪贤文梁红
- 关键词：酿酒酵母生成素分子生物细胞增殖分化
- hIL-3突变体在大肠杆菌中的表达及纯化被引量：1
- 2000年
- 目的 :将天然型hIL 3蛋白经定点突变为hIL 3突变体蛋白 ,并在大肠杆菌中表达及纯化。方法 :超声破碎细菌得到包涵体 ,经DEAEFastFlow,SephaecrylS 200HR等层析步骤纯化。结果 :经以上一系列纯化 ,得到的人IL 3突变体蛋白纯度达90 % ,比活性为7.3×104 U/ml ,总回收率为100 %。结论 :突变体hIL 3在大肠杆菌中得到高效表达 ,并获得高纯度、高活性的hIL 3蛋白。
- 王燕毛琼国万瑛纪贤文刘昕
- 关键词：大肠杆菌纯化
- 复发尖锐湿疣中人乳头瘤病毒相关序列的检测
- 1995年
- 用聚合酶链反应及其产物斑点杂交技术，对２９例复发尖锐湿疣中人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）相关序列进行检测和分型，结果显示复发尖锐湿疣中：ＨＰＶ６：６５．５％，ＨＰＶ１１：２４．１％，ＨＰＶ１６：３１．０％，ＨＰＶ６／１１：１３．８％，ＨＰＶ６／１６：１０．４％，ＨＰＶ１８未检测出来，所用探针以外的型别：３．４％。
- 郭华阳谭骏纪贤文钟白玉叶庆佾
- 关键词：尖锐湿疣复发人乳头瘤病毒聚合酶链反应斑点杂交
- 逆转录病毒介导GM-CSF在造血祖细胞中的基因转移被引量：2
- 1997年
- 为了探索GM-CSF基因治疗的可行性,采用逆转录病毒载体介导的基因转移方法将小鼠GM-CSF cDNA逆转录病毒pLXSN/GM转染病毒包装细胞PA317,然后感染富含造血干、祖细胞群体,经含G418的体外半固体造血祖细胞培养,表现出较多的G418抗性CFU-GM生成,用PCR和Southem Blot方法分别检测出转化细胞基因组中整合有Neo^R基因和GM-CSF cDNA,原位杂交显示转化细胞有较强的GM-CSF mRNA表达,在Dexter培养中,GM-CSF修饰组的成熟非粘附细胞计数明显高于对照组(P<0.05).上述结果表明GM-CSF重组逆转录病毒成功地转入造血祖细胞并获得了表达,为下一步体内基因治疗奠定基础.
- 王庆余杜楠刘昕章波纪贤文
- 关键词：逆转录病毒载体基因转移造血祖细胞血液系统
