王龙刚
- 作品数：14 被引量：117H指数：8
- 供职机构：江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：工业生物技术教育部重点实验室基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程化学工程理学生物学更多>>
- 胆固醇氧化酶转化蛋黄胆固醇工艺的优化被引量：22
- 2001年
- 研究了用响应面分析法 (RSM )优化酶法转化蛋黄胆固醇的工艺 ,发现胆固醇氧化酶(COD)添加量及蛋黄粉的稀释率是影响蛋黄胆固醇转化率最重要的因素 .在模拟优化的条件下 :反应时间为 14.15h ,蛋黄粉稀释率为 3.5 4 ,COD为 5 .39U /g时 ,胆固醇转化率达 85 6 1% .对氧化产物进行分析发现 :仅有单一产物胆甾烯酮 ,该产物具有降血脂、减肥等功效 .
- 吕陈峰王龙刚杨胜利王武
- 关键词：胆固醇氧化酶蛋黄胆固醇响应面分析法食品蛋黄粉
- 胆固醇氧化酶基因的克隆及在E.coli中的表达被引量：12
- 2006年
- 根据NCBI中报道的BrevibacteriumsterolicumATCC21387胆固醇氧化酶基因序列,采用PCR方法以Brevibacteriumsp.DGCDC-82的基因组为模板,扩增得到了编码胆固醇氧化酶的基因,该基因与来源于BrevibacteriumsterolicumATCC21387的胆固醇氧化酶基因(choB)同源性为98%。将得到的基因定向克隆到pET28a载体中,转化至含有编码argU和proL基因的大肠杆菌BL21-CodonPlus(DE3)-RP中表达。经过IPTG诱导后,经SDS-PAGE检测在约55kD处有一蛋白表达条带,目的蛋白表达量约占总蛋白的16%,经测定酶活为340U/L。
- 王龙刚邬敏辰王武
- 关键词：BREVIBACTERIUM胆固醇氧化酶克隆原核表达
- 生物反应过程在线检测系统的研制被引量：9
- 2003年
- 计算机控制的微型生物传感器分析系统可以实现生物反应过程中多参数的在线检测 .系统包含在线微量取样、级联稀释、微型生物传感器、生化工程数据处理和分析软件与计算机 .系统实现的指标为取样 10～ 10 0 0 μL/min ,稀释倍数 10 10 .5 4,相对误差小于 2 .5 % ;在线测量酵母发酵的葡萄糖质量浓度 ,最大误差率为 3.88% .
- 杨海麟吕霞付王龙刚杨胜利王武
- 关键词：在线检测系统
- 胆固醇氧化酶分批发酵动力学模型的建立被引量：3
- 2006年
- 基于7 L的发酵罐分批发酵实验数据,建立了发酵过程菌体生长、产物生成及基质消耗随时间变化的数学模型.Logistic方程、Luedeking-Piret方程能够很好地分别描述甾短杆菌菌体生长和发酵产酶过程.此外,还建立了基质消耗动力学模型,并将3个动力学模型的预测值和实验值进行了比较.所建立的分批发酵动力学模型能较好地反映胆固醇氧化酶分批发酵过程.
- 王龙刚王武
- 关键词：胆固醇氧化酶分批发酵动力学模型
- 从乳化体系中分离纯化短杆菌产胆固醇氧化酶被引量：2
- 2004年
- 添加剂W对酶的分离纯化造成很大困难,用异丙醇沉淀发酵液的同时加入(NH4)2SO4能够有效地破除乳化体系,去除添加剂W,酶收率达到90%.在pH值为8.0的条件下用SepharoseDEAEFastFlow离子交换透析酶液,比酶活从3.21U/mg提高到29.21U/mg,酶收率达70.1%.
- 王龙刚梁爽杨海麟汪建军王武
- 关键词：胆固醇氧化酶破乳化分离纯化
- 乙醇浓度在线测量超声波传感器的研制被引量：8
- 2003年
- 根据超声波检测原理,自行设计能在线检测的超声波传感器探头,研究了在线乙醇浓度超声波传感器,发现温度是影响传感器灵敏度的重要因素之一,为此选择了换能器材料P和安装了测温铂电极,有效地降低了温度对超声波信号的影响,提高了检测的灵敏度,乙醇浓度超声波传感器有效检测浓度范围在93％-100％(V/V),检测灵敏度为0.1％(V/V),可在线测量无水酒精或燃料酒精产品的乙醇浓度。
- 杨海麟吕霞付王龙刚杨胜利王武
- 关键词：乙醇浓度超声波传感器无水酒精燃料酒精
- 发酵过程在线检测系统在谷氨酸发酵中的应用研究被引量：10
- 2003年
- 发酵过程在线检测系统包含原位微量取样、级联稀释和微型生物传感器。选择标准葡萄糖溶液作为系统的校正液,符合测试方便、检测线性范围宽、对系统无污染的要求:葡萄糖酶传感器在谷氨酸发酵周期28小时内测定次数15次,平均误差率为1.686%,酶传感器测定抗干扰性强,稳定性较高。
- 杨海麟吕霞付王龙刚王武
- 关键词：在线检测谷氨酸发酵
- 超声波处理对红曲色素产量的影响被引量：17
- 2003年
- 采用低强度的超声波 ,选取作用时间为变化参数 ,对红曲细胞进行处理 ,其频率为 2 0kHz ,功率为 2 0 0W .结果表明 ,每间隔 8h照射
- 杨胜利王金宇杨海麟王龙刚王武
- 关键词：超声波处理红曲色素发酵
- 胆固醇氧化酶高产菌株的复合诱变选育被引量：21
- 2006年
- 为进一步提高产酶水平,本实验采用超声波联合亚硝基胍的复合诱变方法处理胆固醇氧化酶产生菌(甾短杆菌),通过1mg/mL亚硝基胍和超声(200W,50kHz,35min)同时处理细胞悬液,获得一株红色突变株,其产酶活力从0.5U/mL提高到1.21U/mL,酶活提高了140%。证明该联合诱变手段对甾短杆菌产胆固醇氧化酶具有良好的诱变效果。
- 桑吉王龙刚李忠琴王武
- 关键词：胆固醇氧化酶复合诱变亚硝基胍超声波
- 三相分离甾短杆菌胆固醇氧化酶及其性质被引量：9
- 2007年
- 三相分离（TPP）是将硫酸铵与叔丁醇混合后形成有机相、中间沉淀相和水相。在20°C,调节发酵上清液的pH至6.0,加入硫酸铵使终浓度为400 g/L,溶解后加入与上清液等体积的叔丁醇,静置1 h分相,胆固醇氧化酶在有机相和水相之间形成蛋白沉淀,12 000 r/min离心10 min收集中间蛋白相,用pH 7.5,10 mmol/L的磷酸缓冲液溶解。结果表明：利用三相分离技术从乳化体系中分离纯化胆固醇氧化酶,比酶活提高了3.49倍,收率达93%。回收的酶液进一步经过DEAE-Sepharose Fast Flow纯化,比酶活从3.56 U/mg提高到30.15 U/mg。该酶最适反应温度为60°C,最适反应pH为7.5,酶的等电点为8.5,该酶在37°C,pH 6.0~8.0较为稳定。Hg2＋和Ag＋离子完全抑制胆固醇氧化酶的活性。
- 王龙刚梁爽王武
- 关键词：胆固醇氧化酶分离纯化三相分离酶学性质
