王玢瑸
- 作品数：6 被引量：9H指数：2
- 供职机构：中国农业科学院上海兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划浙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 兔岩藻糖基转移酶基因的克隆与原核表达被引量：7
- 2012年
- 【目的】克隆兔岩藻糖基转移酶(FUT2)基因,并进行原核表达,为进一步研究RHDV的感染过程和致病机理奠定物质基础。【方法】从兔肌肉组织中抽提基因组DNA作为模板,PCR扩增出FUT2基因,然后将该基因亚克隆入原核表达载体pET30a中,获得重组原核表达质粒pET30a-FUT2。将该重组原核表达质粒转化E.coliBL21(DE3)感受态细胞,用IPTG进行诱导表达,分别用SDS-PAGE和Western-blot方法对表达产物进行鉴定。【结果】成功克隆了FUT2基因,该基因长度为1 044bp。成功构建了原核重组表达质粒pET30a-FUT2,其诱导表达产物分子质量约为45ku;表达的重组FUT2蛋白可与His标签抗体发生抗原抗体反应。【结论】成功克隆了兔岩藻糖基转移酶基因,获得了分子质量约为45ku的FUT2蛋白。
- 哲名家张淼涛云涛王玢瑸刘光清
- 关键词：兔病毒性出血症病毒岩藻糖基转移酶原核表达
- 密码子优化型鹅细小病毒病毒样颗粒的表达与鉴定
- 2012年
- 根据昆虫细胞密码子的偏嗜性,对鹅细小病毒(Goose parvovirus,GPV)VP2基因的密码子进行优化,利用Bac-to-Bac表达系统构建了表达优化VP2基因的重组杆状病毒,通过感染昆虫细胞(Sf9)获得病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)。SDS-PAGE分析显示Sf9细胞中出现了65 kDa的蛋白条带,间接免疫荧光(indirect immunofluorescent assay,IFA)和Western blot结果均证实表达产物能与鼠抗GPV VP2抗体发生特异性反应,说明其具有良好的免疫反应性。同时,试验结果还证明,密码子优化后的GPV VP2基因在昆虫细胞中表达量得到了提高,明显高于野生型VP2基因。透射电镜观察纯化后的昆虫细胞表达产物,可见直径约30 nm的VLPs,表明密码子的优化并不影响VP2蛋白的组装。本研究为进一步研制诊断抗原以及新型GPV疫苗等奠定了基础。
- 陈宗艳李传峰高景鹏朱英奇王玢瑸杨宗伟刘光清
- 关键词：鹅细小病毒VP2密码子优化杆状病毒表达系统病毒样颗粒
- 表达萤火虫荧光素酶报告基因的兔出血症病毒复制子的构建与应用
- 【目的】兔病毒性出血症是发生于兔的一种急性、热性和致死性传染病，它对世界养兔业构成了严重威胁。加强对该病病原的基础和应用研究，可以为该病的综合防治提供理论依据和技术支撑。由于兔出血症病毒(Rabbit hemorrhag...
- 王玢瑸
- 关键词：兔出血症病毒VPG复制子萤火虫荧光素酶
- 文献传递
- INewcastle disease virus infection induces activation of the NLRP3 inflammasome
- <正>Inflammatory responses are important aspects of the innate immune system during virus infection.We found th...
- 王玢瑸JieZhuDandanLiYangWangYuanZhanLeiTanXushcngQiuYingjie SunCuipingSongChunchunMengLiaoYingMaoXiangGuangxunMeng丁铲
- 文献传递
- 兔出血症病毒VP60抗原优势区和Th细胞表位融合蛋白的原核表达及免疫效力测定被引量：2
- 2014年
- 为检测兔出血症病毒(RHDV)衣壳蛋白VP60两个抗原优势区串联通用Th细胞表位的融合蛋白AB-Th的免疫效力,本研究采用融合PCR的方法以pBL-RHDV为模板扩增AB-Th基因并亚克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,大量表达AB-Th融合蛋白。结果显示,融合蛋白以包涵体形式表达,并且具有良好的免疫原性。使用纯化后的融合蛋白免疫实验兔,并分别利用ELISA方法和MTS法检测兔免疫后的抗体水平和淋巴细胞增殖能力。结果表明该融合蛋白能够使兔产生针对RHDV VP60蛋白的特异性抗体和导致高水平的淋巴细胞增殖,并能够为实验兔提供100%的保护。
- 孟春春程英杰李传峰王玢瑸缪秋红陈宗艳吴润刘光清
- 关键词：原核表达
- 兔出血症病毒VPg蛋白的原核表达及抗体制备
- 2013年
- 【目的】构建重组兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)VPg(Viral Protein Ge-nome-Linked,VPg)蛋白基因的原核表达质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达和纯化VPg蛋白,制备多克隆抗体,并检测抗体的基本特性。【方法】用PCR方法扩增RHDVVPg基因,将其克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,用IPTG诱导,使之重组表达VPg蛋白,并用镍柱亲和层析法纯化重组蛋白。PCR扩增获得了345bp的VPg基因,用纯化的重组VPg蛋白免疫试验兔,制备抗VPg的多克隆抗体,用Western blot检测其特异性。【结果】构建了pET-30a/VPg原核表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株后,成功表达了VPg蛋白。用该蛋白免疫试验兔后,制备的多克隆抗体能与VPg蛋白特异性反应。【结论】成功表达了RHDV VPg蛋白,并制备了特异性良好的多克隆抗体。
- 王玢瑸哲名家刘光清张淼涛
- 关键词：VPG原核表达多克隆抗体
