公共文化服务平台

共 12 条记录，以下是 1-7

全选清除导出

排序方式：

巨大芽孢杆菌青霉素酰化酶在枯草杆菌中的表达及其分离纯化被引量：14: 1999年; 青霉素酰化酶（ＰＧＡ）在医药工业起着重要的作用，它能够水解青霉素Ｇ产生６－氨基青霉烷酸（６－ＡＰＡ）和苯乙酸，６－ＡＰＡ是半合成青霉素的关键中间体．该酶广泛存在于各种微生物中如真菌和细菌中．国际上对Ｅ．ｃｏｌｉ、Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒｖｉｓｃｏｓｕ...; 黄艳红袁中一王应睐; 关键词：青霉素酰化酶枯草杆菌纯化

利用金属离子(Fe^(3+))配体层析亲和筛选蛋白激酶识别的底物序列: 1997年; 将cAMP依赖的蛋白激酶(cAPK)识别的特征底物序列与噬菌体外膜蛋白g^3p融合,展示于线状噬菌体fd的表面,构建了cAPK底物(PKS)噬菌体.噬菌体体外磷酸化标记结果表明,PKS噬菌体上分子量约为60ku的蛋白可被明显磷酸化标记,与PKS-g^3p融合蛋白的分子量一致.利用金属离子(Fe^(3+))配体树脂亲和筛选经cAPK磷酸化标记的Phage display随机15肽库,4轮筛选后挑取单克隆进行DNA序列测定,确定展示于噬菌体表面的多肽序列.结果表明,在所挑选的14个克隆中有5个克隆具有典型的cAPK磷酸化序列特征(R)RXS/T.对这些噬菌体的体外磷酸化标记实验结果显示,其中有(R)RXS/T序列特征的噬菌体可在分子量约60ku处被特征性磷酸化标记,与PKS噬菌体的磷酸化标记特征一致;其他有一些不具备(R)RXS/T序列特征的噬菌体也可被特征性磷酸化.; 陈长征夏其昌李伯良王应睐; 关键词：蛋白激酶

利用重组噬菌体诱导表达的大肠杆菌表达系统: 1996年; 将编码噬菌体T7RNA聚合酶的基因克隆至噬菌体M13mp18RF DNA中,置于lac启动子的控制之下,得到了可表达T7RNA聚合酶的重组噬菌体M13HEP。利用该噬菌体感染含T7启动子表达质粒的宿主菌以提供T7RNA聚合酶,可以诱导T7启动子控制下的外源基因的表达。该噬菌体诱导表达系统已成功地表达了多种外源基因,特别是一些表达产物对宿主菌有毒性的基因。同时,通过细菌接合将F＇因子从大肠杆菌XL1-blue转至大肠杆菌HMS174,构建了新的大肠杆菌菌株HMS174F＇,使得T7表达质粒构建、表达及单链制备可以在同一菌株中完成,得到了一个完整的T7表达系统。; 陈长征黄华杨新颖夏其昌李伯良王应睐; 关键词：噬菌体 T7启动子大肠杆菌

生物化学与分子生物学研究的发展: ＜正＞生命科学是从现象到本质来研究生命的学科,它的核心是生物学。生物学在19世纪有几个突破性的发现,他们是达尔文的进化论、孟德尔—德符里斯的遗传定律和魏尔肖的细胞学说等。在这些基础上,要更深入地揭示生命的共性和本质,就...; 王应睐; 文献传递

用3′末端氧化的精氨酸tRNA亲和标记大肠杆菌精氨酰tRNA合成酶: 1990年; 用3′末端氧化的精氨酰tRNA共价修饰大肠杆菌精氨酰tRNA合成酶,酶的ATP-PPi交换活力和氨酰化活力完全丧失。用SDS-PAGE分析酶与tRNA(?)形成的共价复合物发现:伴随着酶的失活,形成了两种形式明显不同的ArgRS-tRNA(?)复合物,它们对应于凝胶上两条迁移率不同的大分子条带。这一结果与其它合成酶亲和标记的结果不同。ArgRS-tRNA(?)经RNase处理后,ATP-PPi交换活力和氨酰化活力均有部分恢复(小于15％)。在整个标记过程中,酶的两个活力是紧密相关联的。; 程晓东林胜祥施建平王应睐; 关键词：精氨酸大肠杆菌 TRNA

大肠杆菌亮氨酰tRNA合成酶巯基的修饰及标记肽的顺序测定: 1990年; E. coli LeuRS分别被DTNB,NEM,IAA修饰后,丧失氨基酸活化和氨酰化活性,这两种活性基本上平行地下降,DTNB,NEM和IAA的二级反应常数分别为1700,150和0.46mol/L^(-1)min^(-1),化学计量显示LeuRS的一个巯基是活性必需的,底物Leu和Leu-AMP对该巯基的修饰有明显的保护作用,表明这一活性巯基处于LeuRS的氨基酸活化区域,经过[^(14)C]NEM标记LeuRS巯基,胰蛋白酶完全酶解,HPLC分离标记肽段及顺序测定,表明[^(14)C]NEM主要的标记位点是^(179)Cys~*-Asp-Thr-Lys^(182),这一结果提供了氮基酸活化区域位于LeuRS N瑞区的证据。; 缪枫施建平王应睐; 关键词：巯基修饰

小鼠cAMP依赖的蛋白激酶催化亚基α的重组表达研究被引量：3: 1996年; 将小鼠ｃＡＭＰ依赖的蛋白激酶（ｃＡＰＫ）催化亚基α（ｍＣα）分别以成熟、麦芽糖结合蛋白（ＭＢＰ）融合以及Ｎ端连续六个组氨酸（Ｈｉｓ_６）融合的形式在大肠杆菌中得到了高效表达，且成熟及融合的重组ｍＣα均有明显的蛋白激酶活性，表明蛋白激酶催化核心结构具有相对的独立性。其中Ｈｉｓ_６－ｍＣα可利用金属离子（Ｎｉ￣（２＋））配体亲和层析（Ⅰ－ＭＡＣ）一步纯化，所得融合蛋白可通过Ｈｉｓ_６亲合手臂（Ｔａｇ）固相化于金属离子（Ｎｉ￣（２＋））配体亲和树脂上，为进一步利用ＰｈａｇｅＤｉｓｐｌａｙ多肽库筛选ｃＡＰＫ识别的底物序列和专一性抑制剂打下了基础。; 陈长征范均许正平夏其昌李伯良王应睐; 关键词：蛋白激酶环腺苷酸

全选清除导出

共1页<1>

王应睐