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熊建军: 作品数：29 被引量：24H指数：3; 供职机构：九江学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金江西省教育厅科学技术研究项目江西省自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>

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IPO8基因启动子区rs35100176位点变异对基因表达的影响: 2014年; 目的:研究人importin 8(IPO8)基因启动子区rs35100176多态性位点CCT插入/缺失对基因表达的影响。方法:PCR扩增IPO8基因启动子区包含rs35100176多态位点的342 bp序列,通过测序获得了49例DNA样本的基因多态性分布。以CCT/CCT插入纯合子或-/-缺失纯合子DNA样本为模板,扩增含有不同插入/缺失序列的IPO8基因启动子片段,插入萤光素酶报告质粒pGL3-Basic,构建pGL3-3N Insertion和pGL3-3N Deletion重组表达载体。重组质粒经Fugene 6.0转染入细胞,采用双萤光素酶报告系统,检测携带不同多态性序列的重组质粒中报告基因的表达活性;real-time PCR检测各不同基因型细胞中IPO8 mRNA表达。结果:通过测序发现rs35100176多态位点存在CCT/CCT、CCT/-和-/-3种表型,其基因分布频率分别为18.37%、55.10%和26.53%。成功构建pGL3-3N Insertion和pGL3-3N Deletion重组表达载体。双萤光素酶报告基因活性检测结果显示,pGL3-3N Insertion启动下游报告基因表达的相对活性与pGL3-3N Deletion相比显著减弱,两者存在显著差异(P<0.05);real-time PCR结果显示,CCT纯合插入的HEK293细胞中IPO8 mRNA的表达显著低于CCT纯合缺失的Saos-2细胞。结论:IPO8基因启动子区rs35100176位点的CCT碱基插入变异能显著抑制启动子活性,从而影响IPO8基因的转录。; 熊建军江和许晓源周小鸥王庭李卫东; 关键词：IMPORTIN 基因多态性基因表达

逆转录病毒介导ARLTS1基因表达抑制肝癌细胞HepG2的增殖: 2010年; 目的构建高表达ARLTS1基因的逆转录病毒载体(PLEGFP-IRES-ARLTS1),探讨外源性ARLTS1基因对人肝癌细胞HepG2增殖的影响。方法 RT-PCR扩增ARLTS1 cDNA,克隆至重组逆转录病毒载体PLEGFP-IRES。重组质粒转染病毒包装细胞PT67,产生病毒后感染HepG2细胞,荧光显微镜检测绿色荧光蛋白表达,Western Blot检测细胞内ARLTS1蛋白表达,并对感染后细胞的增殖状况进行分析。结果酶切及基因测序证实重组质粒PLEGFP-IRES-ARLTS1构建成功;荧光显微镜观察到70%左右靶细胞内有绿色荧光蛋白表达;Western Blot证实,ARLTS1蛋白在HepG2-ARLTS1内表达显著升高;MTT实验显示,HepG-2-ARLTS1细胞组体外增殖率较各对照组明显降低(P<0.05)。结论获得了稳定表达外源性ARLTS1蛋白的HepG2细胞株,外源性ARLTS1抑制HepG2细胞增殖,为后续研究ARLTS1抗肿瘤机制奠定了基础。; 熊建军干丽君吴周环吴萍王亦东李卫东; 关键词：逆转录病毒载体肝癌细胞

粟米草三帖皂甙对抑制血管平滑肌细胞迁移和线粒体转录因子1mRNA表达的影响: 2013年; 目的观察粟米草三帖皂甙（MPTS）对大鼠主动脉平滑肌细胞（RASMCs）迁移和线粒体转录因子1表达的影响。方法采用细胞刮片法观察RASMCs的迁移，比色法观察羟脯氨酸含量及RT—PCR观察线粒体转录因子1（mtTF1）mRNA的表达。结果MPTS以浓度依赖方式抑制RASMCs迁移和基质合成，同时能降低mtTF1 mRNA的表达。结论MPTS具有抗RASMCs迁移和基质合成的作用，其抗增殖作用与抑制mtTF1 mRNA表达有关。; 干丽君龚帧熊建军李雪芹; 关键词：血管平滑肌细胞迁移

ATAC-Seq技术在间充质干细胞成脂分化早期研究中的应用: 2021年; 目的利用ATAC-Seq技术研究人骨髓间充质干细胞(hMSCs)成脂分化过程中染色质开放性的动态变化。方法第6代人源hMSCs经成脂诱导剂分别刺激0 d、3 d、5 d和7 d。收集各组细胞,转座酶Tn5捕获DNA序列并测序,生物信息学分析各组间染色质开放区域数量分布、转录因子结合序列(motif)、邻近基因功能(GO)及相关信号通路(Pathway)。结果在h MSCs成脂分化早期的不同时间点,细胞染色质开放区域数量发生显著动态变化;各组功能性区域Peak分布主要富集在转录起始点(TSS)附近;Motif分析显示各组细胞间参与转录调控的活化DNA序列发生改变;Peak邻近基因功能的GO分析结果显示,新增的染色质开放区域的生物过程主要集中在各种细胞黏附、血管生成以及细胞外基质生成等;而差异基因显著性富集通路主要集中在Rap1信号通路,PPAR信号通路等。结论hMSCs成脂分化早期染色质开放区域出现显著动态变化,为进一步了解成脂分化的调控机制及寻找有效靶基因提供了新的思路。; 刘建云江和张杰马百成吴萍熊建军; 关键词：间充质干细胞

USP22基因在人早孕期母-胎界面的表达及意义: 2015年; 目的:检测早孕期绒毛及蜕膜组织中泛素特异性水解酶22(USP22)基因和蛋白水平表达,以探讨USP22在母-胎界面的生理性调节作用。方法:分别采用免疫组织化学方法、荧光实时定量PCR法、Western blot检测20例早孕期正常妊娠妇女及15例不明原因复发性流产患者绒毛、蜕膜组织中USP22的定位、mRNA及蛋白表达水平。结果:USP22在早孕期绒毛和蜕膜组织中均呈阳性表达。在蜕膜基质细胞,USP22主要定位于胞质,少部分定位于胞核;在绒毛滋养细胞,USP22主要表达于绒毛细胞滋养细胞的胞质和胞膜。实时荧光定量PCR及Western blot检测显示绒毛及蜕膜组织中均可见USP22mRNA及蛋白的表达;与正常妊娠组比较,复发性流产组绒毛USP22mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.05),蜕膜组织中USP22mRNA及蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论:USP22在人早孕期母-胎界面表达,并参与了正常早孕期绒毛滋养细胞侵袭的调控和正常妊娠的维持。母-胎界面USP22表达下降可能是导致自然流产发生的原因之一。; 王雅琴熊建军杨菁徐望明; 关键词：母胎界面蜕膜早孕流产

人GNAS1基因克隆、真核表达载体的构建及瞬时转染Hela细胞: 2014年; 目的:克隆人GNAS1基因编码区序列、构建真核表达载体并瞬时转染Hela细胞。方法:通过RT-PCR克隆GNAS1基因编码序列,亚克隆至pMD19载体,测序鉴定正确后,通过酶切连接至真核表达载体pEGFP-N1,通过菌液PCR和酶切鉴定获得pEGFP-GNAS1重组质粒;表达载体以Lipofectamine2000介导转染Hela细胞,并用实时定量PCR检测外源基因在Hela细胞中的表达。结果:克隆到GNAS1基因并获得了pEGFP-GNAS1表达载体,在Hela细胞中获得了GNAS1的过量表达。结论:成功克隆了GNAS1基因编码序列,并构建其真核表达载体,瞬时转染至Hela细胞,为进一步深入研究Gsα蛋白生物学作用奠定基础。; 李兴暖王庭汪涛刘建云熊建军李卫东; 关键词：基因克隆真核表达载体

泛素水解酶22调控丝裂原活化蛋白激酶激酶6基因的转录活性被引量：1: 2019年; 目的:克隆丝裂原活化蛋白激酶激酶6(mitogen-activated protein kinase kinase 6,MKK6)基因启动子,研究泛素水解酶22(ubiquitin specific peptidase 22,USP22)对MKK6转录活性的调控作用。方法:采用PCR扩增MKK6基因启动子片段,并以该片段为模板对USP22结合位点进行定点突变,将野生型与突变型启动子片段定向插入荧光素酶表达载体pGL3-Basic;用重组载体与内参质粒pRL-TK共转染HeLa细胞,行双荧光素酶活性检测以确定其转录活性;利用染色质免疫共沉淀(chromatin immunoprecipitation,ChIP)实验观察USP22蛋白与MKK6启动子是否存在直接的结合;下调USP22表达后,检测MKK6转录活性的变化。结果:成功扩增MKK6启动子及其突变体并构建荧光素酶表达载体;USP22结合位点的突变导致该启动子活性在HeLa细胞中明显降低(P<0.05);USP22与MKK6启动子在细胞中存在直接结合;抑制USP22的表达导致MKK6转录水平明显下降(P<0.05)。结论:在HeLa细胞中,USP22有效地调控MKK6基因的转录。; 刘建云谢鑫吴萍熊建军; 关键词：启动子转录

精准医学背景下提升医学遗传学临床适用能力的教学探索: 2022年; 精准医疗模式需要临床医生掌握基因测序、数据分析等能力。文章以医学遗传学课程为切入点,通过调整部分课堂教学内容、增加遗传数据库查询实践、讲授基因测序报告解读方法、提高教师教学能力、建立与基因测序公司交流与合作等方式,在临床医学本科生教学中逐步引入精准医学的内容,不但提高临床医学本科生对精准医学知识的认识、运用和掌握,也增加学生的课堂学习兴趣,以期培养出更适应于精准医学要求的新时代医学本科生。; 江和牛力熊建军; 关键词：医学遗传学教学改革

逆转录病毒Pmscv/Hyg介导的RNA干扰表达载体的构建与鉴定被引量：1: 2009年; 目的构建逆转录病毒Pmscv/Hyg介导的RNA干扰表达载体,并在HEK293细胞株中观察其基因沉默效果。方法PCR方法扩增人U6启动子,下游引入核酸内切酶位点BamHI、SalI,反向插入质粒Pmscv/Hyg的3′端LTR上游。扩增EGFP基因,插入载体Pmscv/Hyg的多克隆位点。合成干扰P53基因表达的寡核苷酸序列,退火复性后插入U6启动子下游BamHI、SalI酶切位点间。重组质粒经酶切、测序鉴定正确后转染病毒包装细胞PT67,产生具有一次感染能力的病毒颗粒。病毒上清感染靶细胞HEK293,经潮霉素筛选,RT-PCR和western blot检测靶基因P53表达情况。结果质粒酶切及DNA测序表明成功构建重组病毒载体,并在PT67细胞中包装成具有一次感染能力的逆转录病毒。经Hygromycin筛选,HEK293细胞中P53蛋白和mRNA表达显著下调。结论成功构建以Pmscv/Hyg为基础的RNA干扰表达载体,重组载体包装出的逆转录病毒可有效介导基因沉默。; 熊建军李雪芹龚帧; 关键词：逆转录病毒 RNA干扰 P53

转录因子RUNX2对IPO8基因启动子的调节作用: 2014年; 目的研究转录因子RUNX2对IPO8基因启动子的调控作用。方法基于PCR技术,分别突变和剔除IPO8基因启动子片段P-732/+134上RUNX2结合位点(-497^-502 bp),改造后的启动子片段定向插入荧光素酶表达载体PGL-3 Basic。重组质粒分别转染Saos-2与He La细胞,检测报告基因荧光素酶活性。应用染色质免疫共沉淀(Ch IP)证实RUNX2与IPO8启动子在Saos-2细胞内结合。慢病毒介导RUNX2在Saos-2细胞的靶向沉默,定量PCR检测相应组别中IPO8 m RNA的表达。结果成功突变和剔除IPO8启动子上RUNX2结合位点,破坏RUNX2结合位点导致IPO8启动子活性在Saos-2细胞中显著下降(P<0.05)。转录因子RUNX2在Saos-2细胞与IPO8启动子有效结合,下调RUNX2的表达导致IPO8转录水平下降(P<0.05)。结论转录因子RUNX2正性调控IPO8基因的转录。; 熊建军龚帧周小鸥王庭刘建云李卫东; 关键词：RUNX2 启动子荧光素酶

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