林毅刚
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
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- α-N-乙酰半乳糖胺酶突变文库的建立及筛选
- α-N-乙酰半乳糖胺酶是血型转换的工具酶,可以降解A型红细胞表面抗原、消除其抗原抗体反应,在输血治疗中,可以避免血型配型带来的不便。本实验室从报道的α-N-乙酰半乳糖胺酶中选取活性最好的酶,构建α-N-乙酰半乳糖胺酶的原...
- 林毅刚
- 关键词：定点突变高通量筛选
- 文献传递
- α-N-乙酰半乳糖胺酶的表达及活性检测
- 2012年
- 为了建立新型α-N-乙酰半乳糖胺酶的筛选、检测方法,实验中提取脑膜金黄杆菌的基因组DNA,以此为模板PCR扩增出α-N-乙酰半乳糖胺酶(A4).将A4克隆至pET-24a载体,转化Bl21表达菌株进行蛋白表达.使用亲和层析方法纯化His-A4酶,选择显色底物验证酶活性.同时,改进了传统的ELISA方法,直接将红细胞膜包被于ELISA检测平板中,以红细胞膜表面抗原作为直接底物,用ELISA方法检测酶活性.此研究建立了新型ELISA实验方法,以此方法验证了A4酶的活性,证明了此酶能够有效降低红细胞表面抗原抗体反应,且具有浓度和时间依赖性.
- 林毅刚夏钢
- 关键词：重组蛋白蛋白纯化ELISA方法
