杨樱
- 作品数：2 被引量：12H指数：2
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所更多>>
- 发文基金：基础研究重大项目前期研究专项更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- Geldanamycin产生菌生物合成相关基因的克隆与分析被引量：8
- 2002年
- 目的 从 geldanamycin产生菌吸水链霉菌 (S.hygroscopicus)中克隆生物合成基因 ,为阐明生物合成机制及改造其结构奠定基础。方法 以链霉菌 /大肠埃希氏菌穿梭 cosmids p KC5 0 5为载体构建了插入片段为 2 0～ 30 kb的 S.hygroscopicus总 DNA文库。以利福霉素中与 3-氨基 - 5 -羟基苯甲酸 (AHBA)合成相关基因为探针 ,经菌落杂交 ,Southern杂交筛选同源基因片段。测序结果与 Genbank进行同源性比较分析 ,并以attp- 噬菌体载体 KC5 15利用基因阻断实验对克隆的基因片段进行功能鉴定。结果 构建的基因文库含重组基因比率高、基因组覆盖率高 ,稳定性好。经同源基因探针杂交 ,从文库中筛选出 9个阳性 cosmids克隆p CGB2 0、p CGB2 6、p CGB2 8、p CGB2 9、p CGB36、p CGB45、p CGB49、p CGB6 3、p CGB75。测序分析表明 ,cosmidp CGB2 0中 Bam HI- Bam HI 8kb片段两端的不完整 ORF编码蛋白与竹桃霉素 (oleandomycin) PKS Module 5、Module 6 (一致性为 79% )和红霉内酯合成酶 ORF2 (一致性为 75 % )、ORF1(一致性为 73% )、ORF3(一致性为 70 % )高度同源 ;Bam HI- Bam HI3kb片段一端与编码类结核分枝杆菌的磷酸吡哆醛依赖的氨基转移酶家族中半胱氨酸脱硫酶的 DNA有同源性 ,该家族与 AHBA合成酶关系密切。
- 高群杰尚广东杨樱孙桂芝王以光陶佩珍娄志贤姚天爵
- 关键词：GELDANAMYCIN生物合成基因基因文库基因阻断
- 吸水链霉菌Streptomyces hygroscopicus 17997中噬菌体基因转移系统的建立及其应用被引量：5
- 2003年
- 由吸水链霉菌Streptomyceshygroscopicus 17997产生的格尔德霉素geldanamycin(GA)属安莎类抗生素 ,具有良好的抗肿瘤和抗病毒活性。本文应用链霉菌温和噬菌体C3 1衍生的KC5 15载体 ,在吸水链霉菌S .hygroscopicus17997中建立并优化了S .hygroscopicus 17997的基因转染体系。利用所建立的基因转染体系 ,以基因阻断技术从S .hygroscopicus 17997基因文库含有多组PKS基因柯斯质粒中 ,鉴定了与GAPKS生物合成相关基因的柯斯质粒 。
- 高慧英王以光高群杰尚广东孙桂芝杨樱
- 关键词：吸水链霉菌基因阻断格尔德霉素生物合成基因
