李知新
- 作品数：20 被引量：55H指数：6
- 供职机构：甘肃农业大学动物医学院更多>>
- 发文基金：甘肃省自然科学基金国家高技术研究发展计划国家科技基础条件平台建设计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 长角血蜱卵cDNA文库的构建
- 长角血蜱(Haemaphysalis longicornis)是我国流行最广泛和最重要的蜱种,主要叮咬牛、羊以及多种脊椎动物,是瑟氏泰勒虫、边缘边虫、卵形巴贝氏虫、中华泰勒虫和羊巴贝斯虫的传播媒介,主要影响家畜的生产性能...
- 李知新田占成谢俊仁刘光远
- 关键词：长角血蜱CDNA文库
- 文献传递
- 实验室条件下长角血蜱甘肃株孤雌生殖种群的生物学特性被引量：14
- 2007年
- 在实验室条件下，对我国北方长角血蜱甘肃株孤雌生殖种群的生活史进行了首次观察。研究发现，行孤雌生殖的长角血蜱为三宿主蜱；在兔体完成1个世代共需106～154d，饥饿期的幼蜱、若蜱与两性生殖的饥饿幼蜱、若蜱体重的差异不显著（P〉0．05），而饱血体重与两性生殖的长角血蜱种群饱血体重差异极显著（P〈0．01）；雌蜱饱血体重可达吸血前的108．46±19．72倍，与两性生殖的种群饱血体重差异亦极显著（P〈0．01）。雌蜱产卵量与饱食体重之间呈极显著正相关r=0．8970（P〈0．01）；生殖效率指数REI=6．76，生殖适合度指数RFI=6．29；蜱发育时间在不同季节无明显变化。
- 李知新刘光远田占成谢俊仁王路龚真莉柴慧萍孙晓林
- 关键词：长角血蜱孤雌生殖生物学特性
- 宁夏禽流感流行病学调查及病毒HA基因遗传进化分析
- 禽流感(avian Influenza,AI)是由禽流感病毒(Avian influenza viruse,AIV)引起的一种禽类疾病综合征。该病毒属于正黏病毒科(Orthomyxoviridae)甲型流感病毒属(Inf...
- 李知新
- 关键词：禽流感流行病学调查TAQMAN探针荧光RT-PCR
- 文献传递
- 禽流感诊断技术研究进展
- 2006年
- 禽流感是严重危害畜牧业和人类健康的一种传染性疾病,多年来在世界上许多国家和地区都发生过此病,危害巨大。世界各国对其进行了大量研究。文章就目前国内外对禽流感病毒血清学和分子生物学诊断技术的研究进展做一综述。
- 李知新张志强辛小庚刘光远
- 关键词：禽流感血清学分子生物学
- 长角血蜱雌蜱唾液腺cDNA表达文库的构建被引量：7
- 2007年
- 为了克隆和研究具有免疫原性的长角血蜱基因。应用建库试剂盒成功构建了长角血蜱雌蜱唾液腺cDNA表达文库．在无Rnase污染的环境下摘取半饱血长角血蜱雌蜱唾液腺。并从中提取RNA，进而纯化mRNA。利用oligo（dT）引物反转录合成双链cDNA，并在其两端加EcoRⅠ／HindⅢ定向接头并酶切，过柱分级分离后。将cDNA分子定向连接到具有EcoRⅠ／HindⅢ粘性末端的λSCREEN载体中．经体外包装转染E．coliERl647宿主菌，进行文库容量测定和扩增．以扩增文库的DNA为模板。利用载体通用引物检测cDNA文库中插入片断的大小和质量．经检测。所构建长角血蜱cDNA文库的基础库容量约为4．2×10^6pfu／mL，插入片段主要集中在300～2000bp之间．说明文库质量高、代表性强。
- 谢俊仁刘光远田占成李知新贾宁
- 关键词：长角血蜱CDNA表达文库
- 长角血蜱卵cDNA表达文库的构建被引量：6
- 2008年
- 【目的】以长角血蜱卵为材料构建高质量的长角血蜱卵cDNA表达文库,为进一步筛选克隆目的基因奠定基础。【方法】在无RNA酶污染的环境下从长角血蜱卵中提取RNA,进而纯化mRNA,采取oligo(dT)引物合成双链cDNA,定向克隆到λSCREEN载体。用PhageMaker extract对其进行体外包装以形成完整的噬菌体,转染大肠杆菌ER1647,测定库容量。并用构建的cDNA文库克隆已知的长角血蜱促卵泡激素基因。【结果】所构建长角血蜱卵cDNA表达文库的基础库容量约为1.38×106PFU,重组率为100%,扩增后文库的滴度为2×109PFU·ml-1。获得了目的基因,其序列与GenBank中的长角血蜱促卵泡激素(DQ248886)的核苷酸序列的同源性为97.8%。【结论】成功构建了长角血蜱卵cDNA表达文库。
- 刘光远田占成才学鹏李知新谢俊仁王路张林龚真莉
- 关键词：长角血蜱CDNA表达文库
- 长角血蜱甘肃株肌钙蛋白基因P27/30的克隆和序列分析被引量：3
- 2007年
- 参照GenBank中长角血蜱致病性Okayama株肌钙蛋白P27/30基因的核苷酸序列,设计合成一对引物,从本实验室保藏的干净长角血蜱卵中快速提取总RNA,通过RT-PCR扩增出607 bp的肌钙蛋白基因,将其克隆于PGEM-T-Easy载体,对其进行序列分析,并推导出氨基酸序列,将这一序列与国内外已发表的长角血蜱肌钙蛋白基因进行比较分析。结果表明本实验室保藏的长角血蜱甘肃株与上述已发表的Okayama株核苷酸序列同源性为92.1%,氨基酸同源性为86%。长角血蜱甘肃株与Okayama株、四川孤雌生殖株的发育有一定差异。经RT-PCR分析表明,该基因在长角血蜱的卵、幼蜱、若蜱和饥饿成蜱这几个阶段均有表达。
- 田占成刘光远李知新谢俊仁王路张林
- 关键词：长角血蜱克隆
- 一致性检验比较牛口蹄疫病毒抗体LBE检测试剂盒
- 2017年
- 用660份牛血清比较牛口蹄疫病毒O型、A型抗体液相阻断ELISA检测试剂盒检测结果的一致性,并用u检验排除抽样误差的影响。结果表明:待检血清最终稀释度数为1∶64时O型试剂盒联合检出523份口蹄疫抗体阳性和102份阴性,符合率为94.70%,结果一致性为极强(Kappa值=0.82);待检血清最终稀释度数为1∶128时O型试剂盒联合检出476份口蹄疫抗体阳性和125份阴性,符合率91.06%,结果为高度一致(Kappa值=0.75);血清最终稀释度数为164时A型试剂盒联合检出498份口蹄疫抗体阳性和120份阴性,符合率为93.64%,结果一致性为极强(Kappa值=0.81),血清最终稀释度数为1∶28时A型试剂盒联合检出354份口蹄疫抗体阳性和233份阴性,符合率为88.94%,结果为高度一致(Kappa值=0.77)。在不同包被方式下,LBE试剂盒检测待检血清牛口蹄疫病毒抗体结果一致性较好。兽医实验室可应用一致性检验,结合本单位人力、财力和物力等条件,选择适宜的牛口蹄疫病毒抗体检测试剂盒。
- 李知新吴润张成莲周海宁艾文杨佳冰吴亚文王晓亮张和平
- 关键词：牛口蹄疫抗体水平液相阻断ELISAU检验
- 基于18S rRNA基因测序基础上的锥虫分子分类学被引量：5
- 2009年
- 利用18S rRNA基因序列分析方法，对我国湖北、广西、新疆和浙江4省的伊氏锥虫及1株布氏锥虫进行分子分类学研究。用分离的锥虫感染实验动物，自感染小鼠的红细胞或全血中提取基因组DNA，根据GenBank中已发表的锥虫18S rRNA序列设计1对锥虫通用引物，通过PCR扩增目的基因片段，将扩增产物连接到pGEM—T载体中，经酶切、PCR确定．进行序列测定。结果显示，7个锥虫分离株的18S rRNA基因大小为2188bp。利用DNAStar对试验所获得的这7株堆虫和GenBank中部分锥虫的18S rRNA基因进行比较分析，建立2个进化系统发生树。核苷酸同源性比较及系统发生树显示：自我国上述4省分离的伊氏锥虫来源于同一株系，布氏锥虫和广西分离的伊氏锥虫株的18S rRNA核苷酸与其他锥虫分离株仅有较小差异，与国外的6株锥虫的同源性为99％～100％。与另外7株的同源性为62％。
- 刘光远田占成龚真莉谢俊仁李知新
- 关键词：锥虫RRNA基因
- 驽巴贝虫病间接ELISA检测方法的建立被引量：9
- 2010年
- 目的克隆表达驽巴贝虫诊断抗原基因BC48,建立间接ELISA诊断方法。方法从感染驽巴贝虫的毛驴血液中提取虫体基因组DNA,利用PCR技术扩增BC48基因,将其克隆入表达载体pET-28a,转化大肠埃希菌感受态细胞,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达,用镍柱亲和层析法纯化蛋白。以该蛋白作为诊断抗原建立间接ELISA诊断方法 ,对反应条件进行优化,并对该方法的特异性和敏感性进行评价。结果扩增获得1272bp的BC48基因片段。重组表达质粒pET-28a-BC48诱导后获得大小约为Mr46000的可溶性融合蛋白,纯化后蛋白浓度为12.98mg/ml。间接ELISA方法条件优化的结果显示,最佳抗原包被浓度为65μg/ml,最适血清稀释度为1∶80,该融合蛋白可特异性地与驽巴贝虫感染血清结合,而不与马泰勒虫感染血清及阴性血清反应。使用该方法与镜检法检测17份散养毛驴血清样品,阳性检出率分别为3/17和2/17。结论以BC48重组蛋白为抗原建立的间接ELISA方法可用于马属动物驽巴贝虫病的检测。
- 龚真莉刘光远谢俊仁柴慧萍张丽艳李知新田占成王路刘建刚
- 关键词：纯化ELISA
