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朱文勇: 作品数：26 被引量：45H指数：4; 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国际科技合作与交流专项项目云南省科技计划项目更多>>; 相关领域：医药卫生生物学理学化学工程更多>>

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无针皮内免疫接种Sabin IPV疫苗的安全性及免疫原性研究被引量：3: 2020年; 全球消灭脊髓灰质炎野病毒后,必须全面使用脊髓灰质炎灭活疫苗(Inactivated poliovirus vaccine,IPV)才能维持无脊灰状态,然而IPV成本较高,难以满足全球需要。皮内免疫途径能够降低Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(Vero细胞)(Inactivated poliovirus vaccine derived from Sabin strains,sIPV)的抗原量,本研究将评估无针皮内免疫sIPV的安全性及免疫原性。本研究采用中国医学科学院医学生物学研究所生产的sIPV进行1/5(0.1 ml)剂量无针皮内免疫接种Wistar大鼠,并设计全剂量肌肉免疫对照组以及无针皮内免疫阴性对照组,按0月、1月、2月基础免疫程序,于免疫前及每剂免疫后第30 d采血,检测血清中和抗体水平,评价免疫原性,并通过观察大鼠的皮肤刺激反应及豚鼠的全身过敏反应,评价安全性。Wistar大鼠3剂免疫后,1/5剂量皮内免疫组与全剂量肌肉免疫组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型抗体阳转率均达到100%,各型别中和抗体几何平均滴度(Geometric mean titer,GMT)均远高于1∶8保护水平。大白鼠接种疫苗后体重增加,皮肤刺激试验及全身过敏反应试验结果表明无针皮内免疫sIPV具有良好的安全性。本研究结果表明sIPV疫苗无针皮内注射免疫安全、有效,并可降低sIPV的抗原量,可为全球消灭脊髓灰质炎提供可负担得起的疫苗。; 朱文勇蔡玮王东宝杨伟孙溢胡文著宋绍辉李卫东廖国阳陈洪波马磊; 关键词：安全性免疫原性

Triton X-114萃取法纯化b型流感嗜血杆菌荚膜多糖的应用被引量：6: 2016年; 采用Triton X-114替代高腐蚀性的苯酚,以探索b型流感嗜血杆菌(Haemophilusinfluenzaetype b,Hib)荚膜多糖的纯化新方法。将Hib粗制荚膜多糖溶于不同浓度的Triton X-114溶液中,加入(NH_4)_2SO_4,搅拌后,离心分层后,取下层溶液。重复多次,最后用100 k D膜进行超滤。结果,加入Triton X-114的质量分数为15%,(NH_4)_2SO_4的质量分数为30%,抽提次数为3次时,对蛋白杂质的去除效果较好。采用Triton X-114萃取法连续纯化3批Hib荚膜精制多糖,其各项检测指标均符合《中国药典》2015版(三部)规定。研究表明Triton X-114萃取法可应用于Hib粗制荚膜多糖的纯化,且纯化效果良好。; 韦鹏翀魏茂琪常亚军靳伟华岳俊杨建波郑勇赵宏欧阳圣洁朱文勇廖国阳; 关键词：B型流感嗜血杆菌荚膜多糖 TRITON 纯化

SARS-CoV-2 S蛋白单克隆抗体的制备及其双抗体夹心ELISA检测方法的建立被引量：1: 2022年; 目的制备严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2型(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)棘突蛋白(spike protein,S)单克隆抗体(简称单抗),建立S蛋白抗原含量双抗体夹心ELISA检测方法,并进行验证。方法通过杂交瘤细胞融合技术制备单克隆抗体,并对单抗进行鉴定。用该单抗作为包被抗体,HRP标记的兔抗S蛋白多克隆抗体作为酶标抗体,建立双抗体夹心ELISA方法,检测SARS-CoV-2 S蛋白抗原含量。对方法的包被抗体浓度(10、5、2.5、1.25μg/mL)、酶标抗体浓度(4、2、1μg/mL)以及封闭液种类(未封闭、PBS稀释的1%BSA、2%BSA、1%BSA+1%蔗糖、2%BSA+2%蔗糖)进行优化,并对方法的线性范围及灵敏度、特异性和准确性进行验证。用建立的方法对10份疫苗生产工艺不同阶段已知S蛋白抗原含量的样本进行检测,计算该方法与中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所新冠疫苗定量方法检测结果的符合率。结果筛选出18株S蛋白特异性单克隆抗体,7B10A2细胞株制备的腹水抗体纯化后浓度为4.487 mg/mL,纯度大于90%,可特异性结合新冠病毒S蛋白上S1亚基;抗体亚型为IgG2b型,抗体效价为1︰128 000,效应浓度为0.137μg/mL。建立的双抗体夹心ELISA方法最适包被抗体和酶标抗体浓度分别为5和4μg/m L,最适封闭液为2%BSA+2%蔗糖;在2.5~160 U范围内,相关系数(R2)大于0.99,检测灵敏度为1.25 U;该方法特异性良好,与核衣壳蛋白(nucleocapsid protein,N)、BSA、PBS及流感病毒等不发生反应;准确性验证的回收率在92.10%~111.58%之间。用建立的方法检测已知含量样本符合率在94.2%~109%之间。结论制备了SARS-CoV-2 S蛋白特异性单抗,并建立了适用于SARS-CoV-2 S蛋白抗原含量检测的双抗体夹心ELISA方法,可用于疫苗产品及其工艺阶段样品和其他样本中S蛋白含量的检测。; 李妮龙柏霖朱文勇钏鸿云宋绍辉刘婧吴雅楠廖国阳; 关键词：单克隆抗体双抗体夹心ELISA

核磁共振波谱法测定b型流感嗜血杆菌荚膜多糖中的核糖含量被引量：3: 2014年; 目的建立核磁共振波谱（nuclear magnetic resonance,NMR）法测定b型流感嗜血杆菌（Haemophilus influenzae type b,Hib）荚膜多糖中核糖含量的方法。方法利用NMR技术中的氢核磁共振波谱（1H-NMR）的定量功能,对不同浓度的D-核糖进行定量分析,验证该方法的精密度及准确度,并与传统化学方法进行比较。结果NMR法定量结果相对标准偏差（RSD）均小于1.0%,相对误差除最低浓度20 mmol/L为7.4%外,其余浓度均在1%-3%之间,不同浓度的样品回收率在97.2%-107%之间;化学法定量结果RSD在0.6%-7.9%之间,相对误差在3%-6.5%之间,不同浓度样品回收率在93.5%-105.3%之间;两种方法检测的3批Hib荚膜多糖中核糖含量无明显差别,均在《中国药典》三部（2010版）规定的320～410 mg/g之间。结论1H-NMR定量方法取样少,可直接定量,该方法精密度高、准确度高、重现性好,且不破坏多糖结构,可应用于细菌荚膜多糖质量控制的核糖定量。; 普元倩朱文勇寸怡娜代小虎张新文钟汉斌宋绍辉吴亚楠赵娜娜王明清廖国阳李卫东

新工艺制备Hib结合疫苗原液长期稳定性试验被引量：3: 2020年; 目的在前期开发的b型流感嗜血杆菌(haemophilus influenzae type b,Hib)荚膜多糖提取新工艺及利用1-氰基-4-二甲基氨基吡啶·四氟化硼(1-cyano-4-dimethylaminopyridinium tetrafluoroborate,CDAP)活化的疫苗制备新方法的基础上,评价利用新方法生产的Hib结合疫苗原液的稳定性。方法将疫苗原液在2~8℃条件下放置36个月,根据实验设计,不同时间取样并按照《中国药典》中相应的检测指标、检测方法进行评价。结果新工艺制备的Hib结合疫苗原液在2~8℃储存条件下,大部分指标保持相对稳定,只有分子量大小、高分子结合物含量及效力结果下降,但保存30个月仍符合2010年《中国药典》的相关要求。结论新方法与传统方法生产的Hib结合疫苗原液稳定性基本相同,证明了利用新方法制备Hib结合疫苗的新工艺可以用于扩大生产规模。; 朱文勇王明清宋绍辉李双丽胡文著廖国阳; 关键词：HIB 原液稳定性

b型流感嗜血杆菌多糖间接竞争ELISA检测方法的建立被引量：2: 2015年; 目的建立b型流感嗜血杆菌（Haemophilus influenzae type b,Hib）多糖间接竞争ELISA检测方法,并进行验证及初步应用。方法以Hib多糖—酪胺结合物（PRP-Ty）作为包被抗原,待测PRP作为竞争抗原,与Hib抗血清反应,建立间接竞争ELISA检测方法。采用棋盘法确定最佳包被多糖抗原浓度及Hib抗血清稀释倍数,绘制标准曲线,并确定最低检测限;对建立的方法进行批内和批间精密性验证;取Hib发酵液,在培养温度、接种量等因素相同的情况下,分别将培养液初始p H调至6.0±0.02、7.0±0.02和8.0±0.02,培养不同时间取样,采用建立的方法检测培养液内PRP含量。结果 PRP-Ty的最佳包被浓度为1.25μg/ml,Hib抗血清的最佳稀释倍数为300倍。该方法检测的线性范围为6.25~200 ng/ml,最低检测限为6.25 ng/ml,回归方程为y=-23.12 x＋99.62,R2=0.996。采用该方法分别重复检测3次高浓度（200 ng/ml）和低浓度（20 ng/ml）PRP多糖的变异系数（CV）分别为1.608%和3.344%;采用该方法及传统化学检测法分别检测6次同一批Hib成品分装疫苗的多糖,该方法检测结果的CV值为5.75%,传统化学法检测结果的CV值为1.98%,均符合要求;该方法检测不同初始p H培养液培养的Hib发酵液,培养时间为8 h左右时,PRP产量最高;当初始p H为8.0±0.02时,培养液内PRP含量增长最快,所达到的浓度最高。结论建立了Hib多糖间接竞争ELISA检测方法,该方法灵敏度较高,精密性良好,可应用于Hib多糖含量的定量检测。; 王明清管娇琼龙艺朱文勇廖国阳; 关键词：B型流感嗜血杆菌多糖间接竞争ELISA

肺炎支原体检测技术研究进展被引量：4: 2020年; 由于与病毒或细菌引起的呼吸道感染症状极为相似,对肺炎支原体感染易误诊进而失去最佳治疗时间,并且由于出现大范围的大环内酯类药物的耐药现象,因此开发快速、灵敏、高效的诊断方法极为重要。本文对目前肺炎支原体的检测诊断方法的相关文献进行综述,为诊断肺炎支原体感染提供参考。; 贺凌煜朱文勇杨丽源廖国阳; 关键词：肺炎支原体血清学分子生物学

重组人禽流感H7N9疫苗株在Vero细胞上的适应性和传代稳定性研究: 2020年; 本文主要研究重组人感染高致病性禽流感H7N9株作为主工作种子批在Vero细胞连续传代中的高产特性和传代稳定性,为疫苗开发提供前期研究。将重组获得的H7N9流感病毒Vero细胞适应株(A/Anhui/1/2013Va)按照病毒感染复数(MOI)0.01的病毒量接种于Vero细胞,并连续传15代。血凝试验检测每代病毒血凝效价,并绘制病毒在Vero细胞上的生长曲线;每代病毒用MDCK细胞检测病毒的感染性滴度;通过单向免疫扩散试验对重组病毒H7N9的第1及第16代进行型别鉴定;取第1、5及16代病毒,用鸡胚半数感染量及致死量检测病毒在传代过程中毒力变化;分别提取第1和16代H7N9流感病毒的RNA,反转录及克隆后测序,对比病毒在连续传代过程中血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因的变化。试验结果表明:在连续传代过程中,病毒效价越来越趋于稳定,血凝效价稳定维持在384~448;病毒感染性滴度维持在7 Log10TCID50/mL左右;病毒在传代过程中毒力未发生显著变化;HA和NA在连续传代过程中并未出现因基因变异导致的编码氨基酸改变的状况。H7N9安徽株病毒在Vero细胞传代过程中不仅产量稳定,其毒力和基因也很稳定,可以将其作为H7N9流感疫苗候选株。; 崔兆海赵卫忠马磊高菁霞朱文勇李卫东廖国阳; 关键词：病毒滴度

人肺炎支原体的分离培养及鉴定被引量：5: 2018年; 目的分离培养人肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,MP)菌株,并进行鉴定。方法通过配制添加抗生素的培养基或采用滤膜过滤等几种预处理方法去除大部分真菌和细菌,再对富集培养时间进行摸索,从住院儿童咽拭子及痰样本中分离培养人MP菌株,通过PCR、基因分型、培养特性、生化特性及血清学特性几方面对分离菌株进行鉴定。结果通过依次添加抗生素、滤膜过滤等几种预处理方法传代能去除大部分真菌和细菌,对咽拭子接种6~8 h、痰样本接种18~24 h后进行传代,最终从978株儿童咽拭子及痰样本中分离到42株人MP菌株,所分离菌株从PCR特性、培养特性、生化特性及血清学特性几方面均鉴定为MP,其中39株为P1-Ⅰ型,3株为P1-Ⅱ型。结论建立了从临床标本中分离培养MP菌株的方法,并成功分离到42株MP菌株,对MP的研究和诊断及MP疫苗研发具有重要的应用价值。; 李双丽朱文勇冯磊柴玲张俊李雷陈枫杨丽源管新龙陈静宜李杰芬师廷明张继华李卫东廖国阳; 关键词：肺炎支原体基因分型

一种b型流感嗜血杆菌荚膜多糖的制备工艺: 本发明涉及一种b型流感嗜血杆菌荚膜多糖的制备工艺，属于革兰氏阴性细菌荚膜多糖技术领域。本发明方法将发酵液仅需通过离心、浓缩、除杂、超滤4步，并且无需柱层析即可得到b型流感嗜血杆菌荚膜多糖的精糖溶液。该制备工艺避免了苯酚、...; 廖国阳朱文勇欧阳圣洁宋绍辉代小虎李卫东马磊高菁霞寸怡娜钟汉斌胡文著陈枫李双丽非成瑞李宗霖张冰洁贺凌煜; 文献传递

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