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徐丽华: 作品数：12 被引量：124H指数：5; 供职机构：上海海洋大学水产与生命学院更多>>; 发文基金：国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目更多>>; 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>

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营养条件对转生长激素基因鲤生长和性腺发育的影响: 2011年; 运用形态学和组织学方法对转生长激素基因鲤在不同营养条件下的生长、饲料占有情况和性腺发育进程进行了研究。结果表明:正常投饲营养充分的池塘中转基因鲤与对照鲤的体重增长率分别是99.6%和68.2%;而在半饥饿饲料短缺池塘中的转基因鲤和对照鲤体重增长率分别为51.3%和49.8%。说明正常投喂饲料条件下转基因鲤的生长速度明显快于对照鲤;半饥饿饲料短缺条件下转基因鲤的体重增长速度与对照鲤无显著性差异。在7、8、9月份,对不同时期性腺发育状况检验结果表明,饲养在不同营养条件下的两种鱼的雌、雄性腺发育速度不同,但差异均不显著(p>0.05)。; 刘春雷徐丽华常玉梅梁利群刘金亮池炳杰吴学工; 关键词：营养条件性腺发育

鲤脑组织低温差异表达候选基因的筛选、cDNA全长克隆及功能预测: 为从基因表达水平上研究鱼类耐低温机制,选取东北地区具有耐低温性状的黑龙江鲤/(Cyprinus carpio/)为实验材料,采用双标准曲线相对实时荧光定量PCR法进行基因表达量差异检测。鉴于在温度发生变化的过程中,脑部是...; 徐丽华; 关键词：鲤鱼耐低温蛋白质功能预测; 文献传递

饥饿对转基因鲤与野生鲤生长竞争和性腺发育的影响: 2010年; 为研究转大麻哈鱼(Oncorhynchus keta)生长激素基因鲤(转基因鲤)在不同食物含量条件下的生长竞争(主要是生长、生殖),实验设定两个实验组,分别为正常投饲组和半饥饿实验组,每组的饲养池大小相同、混养的转基因鲤和对照鲤初始总体重相等。连续3个月定期采样后,处理数据并拟合体重体长方程,从形态学和组织学入手对转基因鲤和对照鲤(Cyprinus carpio)的生长状况、饲料占有情况和性腺发育状况开展研究。结果表明,正常投饲组的转基因鲤和对照鲤体重相对增长率分别为127.9%和70.6%,而半饥饿实验组的转基因鲤、对照鲤的体重相对增长率分别是72.3%和52.2%,表明无论在饱食还是在饲料短缺情况下,转基因鲤显示出快速生长的优势;通过比较两组转基因鲤和对照鲤的肠道充塞度,发现正常投饲组的转基因鲤和对照鲤的肠道食物充塞度差异不显著(P>0.05),半饥饿组中的两种鱼的肠道食物充塞度差异不显著(P>0.05),但是转基因鲤的肠长/体长比大于对照鲤,差异显著(P<0.05),表明转基因鲤可能对饲料具有较强的消化、吸收能力;总体来看,两组实验鱼的性腺发育进程无明显差异(P>0.05),但在部分月份转基因鲤和对照雌、雄鲤的相对性腺重差异显著(P<0.05),无论在饱食还是在半饥饿情况下,转基因鲤的性腺发育情况略好于对照鲤。; 刘春雷常玉梅梁利群徐丽华刘金亮闫学春; 关键词：性腺发育

AFLP技术的优化及在三倍体银鲫DNA指纹图谱中的应用被引量：3: 2010年; 扩增片段长度多态性(Amplified Fragment Length Polymorphism,AFLP)技术具有多态性丰富,所需DNA量少,灵敏度高等优点,但流程繁琐,花费时间长。本文根据AFLP技术的特点,在酶切-连接和聚丙烯酰胺凝胶的制备,这两方面做了很大改进。采用优化的AFLP技术分析三倍体银鲫的DNA指纹图谱,不仅缩短了实验所需时间,而且获得了稳定清晰的扩增带型。; 韩启霞高国强刘春雷徐丽华池炳杰梁利群; 关键词：AFLP标记聚丙烯酰胺凝胶电泳银鲫

鲤脑组织低温差异表达候选基因的筛选被引量：12: 2011年; 采用双标准曲线相对实时荧光定量PCR法,分别以23℃常温对照组和6℃低温待测组的黑龙江鲤脑组织cDNA为模板,以18S rRNA为内参基因,检测26个候选基因的相对表达量。实验数据经显著性分析发现,有5个候选基因在低温条件下表达量显著上升(P<0.01),与对照组相比它们的表达量分别上升了2.11倍、13.9倍、2.52倍、7.38倍和1.83倍,基因功能比对结果表明其编码蛋白产物分别是脂肪酸链延伸蛋白、酰基辅酶A脱氢酶、转录起始因子IIB、肌醇-1-磷酸合成酶、血脑屏障HT7抗原;有7个候选基因在低温下表达量分别下降了21.8%、25.9%、16.6%、23.7%、15.8%、16.3%、42.5%,但对照组和待测组差异不显著(P>0.05),基因功能比对发现它们主要参与抑制糖酵解,促进细胞凋亡和干扰神经系统的重塑活动。上述低温下表达量显著上升的5个冷诱导候选基因的获得为今后进行不耐低温鱼类的基因工程育种提供了基因元件。; 徐丽华常玉梅刘春雷梁利群刘金亮池炳杰; 关键词：候选基因实时荧光定量PCR

鲤EST标记与耐低温性状的相关性分析及定位被引量：5: 2010年; 利用GLM模型对12个表达序列标签(expressed sequence tag,EST)标记的基因型与鲤耐低温性状进行相关性分析,然后使用OneMap软件将这些EST标记进行连锁定位研究,并通过Blast x搜索引擎对这些候选EST进行注释。结果显示,EST标记CC009(P<0.05)和CC115(P<0.01)与鲤鱼耐低温性状显著相关;12个EST标记中有8个标记分别连锁定位到6个连锁群中,其中与耐低温相关的CC009和CC115分别定位到鲤连锁图谱的第38号连锁群和第2号连锁群;蛋白质数据库同源性比对发现,CC009与斑马鱼(Danio rerio)尿嘧啶激酶1(uridine-cytidine kinaseI)的同源性高达94%;而CC115为原绿球藻(Prochlorococcus marinus str)的假定糖基转移酶(putative glycosyl transferase)的同源性为56%。; 常玉梅高国强徐丽华刘金亮刘春雷梁利群; 关键词：鲤鱼表达序列标签耐低温

鲤脑组织低温差异表达候选基因的筛选: 淡水鱼类的低温耐受性问题一直是鱼类遗传和育种学家潜心研究的难题，至今对鱼类耐低温的机理了解得还不清楚。本研究以具有耐低温性状的黑龙江鲤Cyprinus carpio及不具有耐低温性状的斑马鱼Danio rerio为实验对...; 徐丽华常玉梅刘春雷梁利群刘金亮; 关键词：淡水鱼类候选基因实时荧光定量PCR; 文献传递

鲤耐低温候选基因CcSCD全长cDNA的克隆及功能预测被引量：5: 2012年; 硬酯酰辅酶A脱氢酶(Stearoyl-CoA Desaturase,SCD)是参与脂肪酸脱氢反应的限速酶和关键酶,此酶编码基因SCD对增加膜磷脂的不饱和脂肪酸成分,提高细胞膜在低温下的流动性发挥重要作用,可能是抗寒过程中的关键基因成员。本研究采用cDNA末端快速扩增技术(Rapid Amplifications of cDNAEnds,RACE)克隆了鲤(Cyprinus carpio)脑组织CcSCD基因的全长cDNA序列,采用实时荧光定量PCR技术检测该基因在低温(6℃)和常温(23℃)条件下的转录表达差异,对其蛋白编码序列的结构和功能进行了预测分析。结果显示,CcSCD基因cDNA全长2618bp,包含一个由324个氨基酸残基组成的长度为975bp的阅读框(ORF);蛋白分子进化树显示鲤的SCD和草鱼(Ctenopharyngodon idella)的SCD蛋白同源性最高,相似性达88%;实时荧光定量结果表明,低温刺激下(6℃),CcSCD基因表达水平是常温条件下(23℃)的13.9倍,差异非常显著(P<0.01)。本研究旨在为今后构建表达载体,通过遗传操作等研究手段鉴定其抗寒功能奠定基础。; 常玉梅徐丽华李世国唐然梁利群; 关键词：荧光定量PCR

双标准曲线相对定量PCR试验原理与方法被引量：67: 2011年; 实时荧光定量PCR(FQ-PCR)是一种准确有效的核酸定量分析技术,具有易操作、高通量、高敏感性、高特异性、高度自动化和低污染等优点,并随新定量PCR仪及新操作方法的发展而得到广泛应用,但是,定量PCR的高敏感性特点使得实验操作严格而繁琐。阐述了一种改进的相对定量方法——双标准曲线法的试验原理和特点,描述了定量PCR体系的优化方式,探讨了试验误差分析方法及试验操作技巧,并就试验数据的处理方法进行讨论。试验证明,双标准曲线法是一种经济、简单而准确的定量方法。; 徐丽华刘春雷常玉梅梁利群刘金亮高国强韩启霞

东北雅罗鱼微卫星分子标记的筛选及特征分析被引量：17: 2011年; 通过磁珠富集法筛选东北雅罗鱼的微卫星分子标记。采用限制性内切酶Sau 3AI对东北雅罗鱼基因组DNA进行酶切,选取400～900 bp的片段进行PCR全基因组扩增,并利用生物素标记的(CAG)8、(TGA)8、(AGAT)6、(GATT)6 4个探针进行微卫星片段的富集。将得到的片段与T载体连接后转入DH5α大肠杆菌中,然后以SaulA为引物对长出的菌落进行PCR扩增,挑取扩增后片段大小符合条件的菌落送生物公司测序。结果表明:1 416个阳性克隆中有1 047个克隆含有重复次数大于5次的微卫星序列,完美型占67.99%,非完美型为15.31%;混合性标记占16.70%。从中选出160个微卫星序列设计105对引物并合成,经过筛选,56对引物可扩增出清晰条带,其中23对具有多态性。选取18对多态性引物对达里湖东北雅罗鱼群体进行扩增,结果显示等位基因数为3～11,多态信息含量(PIC)为0.207 7～0.882 0,67%(12对/18对)的位点处于高度多态水平(PIC>0.5)。; 刘金亮常玉梅徐丽华刘春雷梁利群韩国苍高玉奎柳玉海; 关键词：东北雅罗鱼微卫星磁珠富集

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