张鹤晓
- 作品数：101 被引量：457H指数：10
- 供职机构：北京出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：质检公益性行业科研专项项目国家质检总局科技计划项目国家科技基础性工作专项更多>>
- 相关领域：农业科学轻工技术与工程生物学医药卫生更多>>
- 尿素-聚丙烯酰胺凝胶电泳法在禽流感病诊断中的应用被引量：11
- 1998年
- 用鸭源Ａ型流感病毒Ａ／Ｄｕｃｋ／Ｎａｎｊｉｎｇ／９Ｓ（Ｈ９Ｎ？），人工感染１８只２５日龄ＳＰＦ鸡，发病率为１００％，病死率为７２％。然后建立了尿素～聚丙烯酰胺凝胶电泳法，分别应用鸭源ＡＩＶ及其攻毒发病鸡脏器匀浆上清作为诊断材料，分析了３株鸭源ＡＩＶ及其对应攻毒鸡源流感病毒。结果显示出特征性的Ａ型流感病毒核酸图谱，而且各株病毒核酸条带的迁移率基本一致。所以，在关于禽流感的口岸检疫工作中，尿素－聚丙烯酰胺凝胶电泳法，因其特有的敏感、准确性，完全可以作为现行琼脂扩散方法的补充或辅助诊断手段。
- 赵增连林祥梅崔向东王彩兰马贵平张鹤晓张鹤晓唐艉英陈溥言
- 关键词：禽流感PAGE检疫流行性感冒
- 动物RNA病毒检测关键试剂—反转录酶(M-MLV RTase)的制备
- 2016年
- 反转录酶是动物RNA病毒分子诊断用到的关键试剂之一。为获得纯度高、活性高、制备简单经济的M-MLV RTase,本试验将M-MLV RTase的基因序列进行密码子优化,合成并构建表达载体。将表达载体转化到大肠杆菌E.coli Rosetta宿主菌种,经IPTG诱导后实现M-MLV RTase的可溶性表达。利用Ni2+柱亲和层析纯化载有6x His标记的重组MMLV RTase,对重组酶进行Western Blotting试验,鉴定为M-MLV RTase。通过对动物流感病毒RNA的普通RT-PCR和荧光RT-PCR检测来评价重组酶的活性并估测其活性单位。将活性单位相当的重组酶和商品酶进行比较,结果显示,制备的重组酶活性高,对不同浓度病毒RNA的检测结果与商品酶相当。研制的M-MLV RTase可以用于动物RNA病毒的分子诊断。
- 牛建蕊高志强蒲静张伟刘环刘文晓张鹤晓
- 关键词：纯化RT-PCR
- 猪传染性胃肠炎病毒S基因A、D抗原共表达的复制缺陷型重组腺病毒构建及鉴定
- 本研究通过RT-PCR技术和重叠PCR技术扩增出含有猪传染性胃肠炎病毒S基因的A抗原表位和D抗原表位，构建复制缺陷型腺病毒穿梭质粒。穿梭质粒与腺病毒骨架质粒经PacI线性化之后，共同转染AD-293细胞，获得共表达A、D...
- 刘文晓高志强蒲静张伟刘环牛建蕊张鹤晓
- 关键词：猪传染性胃肠炎复制缺陷型腺病毒疫苗
- 2009大流行H1N1流感病毒与经典H1N1猪流感病毒核酸扩增检测标准物质研究
- 根据已发表的A/California/04/2009(H1N1)基因序列,通过基因合成获得该毒株的完整M、HA和NA的基因序列,并克隆于pET32a.从经典猪流感病毒A/swine/2003(H1N1)提取的RNA中扩增...
- 高志强张鹤晓乔彩霞蒲静张利峰刘环汪琳谷强张伟
- 关键词：计量学H1N1流感病毒核酸扩增标准物质
- 文献传递
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒TaqMan荧光RT-PCR检测方法的建立
- 根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的保守基因序列设计合成引物和TaqMan荧光探针,并对其进行了优化筛选;对荧光RT-PCR的反应条件进行优化,建立了PRRSV荧光RT-PCR检测方法。将PRRSV细胞培养物系列稀...
- 蒲静谷强段向英高志强赖平安张鹤晓柏亚铎汪琳吴丹乔彩霞张伟
- 关键词：PRRSV繁殖与呼吸综合征病毒RT-PCR检测
- 文献传递
- 直接涂片镜检法和沉淀法检验出口猕猴溶组织阿米巴的比较被引量：1
- 1995年
- 在对出口到法国的62只猕猴进行的溶组织阿米巴的检验中，对直接涂片镜检法和沉淀法进行了比较。直接法检溶组织阿米巴包囊的检出率为6．45％，沉淀法的检出率为30．65％，t检验结果表明，沉淀法与直接法的检出率差异极显著（P＜0．001），沉淀法的检出率显著高于直接法。
- 于文军李楠张鹤晓熊盛荣李凤良
- 关键词：猕猴镜检法沉淀法检疫
- 猪传染性胃肠炎病毒S基因A、D抗原共表达的复制缺陷型重组腺病毒构建及鉴定被引量：2
- 2016年
- 通过RT-PCR技术和重叠PCR技术扩增出含有猪传染性胃肠炎病毒S基因的A抗原表位和D抗原表位,构建复制缺陷型腺病毒穿梭质粒。穿梭质粒与腺病毒骨架质粒经PacI线性化之后,共同转染AD-293细胞,获得共表达A、D抗原表位的复制缺陷型重组腺病毒。经Western Blotting检测,该重组腺病毒能够正确表达目的蛋白基因,而且目的蛋白能够与猪传染性胃肠炎阳性血清反应。本研究结果为猪传染性胃肠炎重组疫苗研发奠定基础。
- 刘文晓高志强蒲静张伟刘环牛建蕊张鹤晓
- 关键词：猪传染性胃肠炎复制缺陷型腺病毒疫苗
- 荧光RT-PCR检测鱼类鲤春病毒血症病毒的研究被引量：21
- 2005年
- 本研究根据鲤春病毒血症病毒的核酸保守区序列,开发、设计多条引物和探针序列,从中筛选敏感、特异的引物、探针,在循环参数、病毒核酸提取方法及逆转录条件优化的基础上,建立了快速的检测鲤春病病毒的荧光RT-PCR检测技术。同时,又将该方法与一步法RT-PCR方法和细胞查毒方法进行了互相验证和对比研究,结果表明,荧光RT-PCR方法检测病毒悬液的灵敏度最高,病毒悬液10-6稀释仍然可以检出,而细胞分离病毒方法测得的TCID50为10-4。本文还对北京地区出口渔场送检样品、人工实验感染该病毒鱼的病料进行了组织脏器中病毒分布和病毒含量的研究。结果显示,北京地区出口渔场送检样品未见细胞病变,所有检测样品均为阴性;病毒致死鱼的肠道病毒含量最高,肠组织研磨稀释10-4倍仍然可以检出;其次是肾和鳃组织,检出极限为稀释10-3倍组织悬液;肉和脑组织中病毒含量较低,肉最高能检出10-2倍组织悬液,而脑组织只能检出10-1倍组织稀释液。
- 张利峰张鹤晓乔卫虹吴丹高小博杨伟王莉夏春
- 关键词：鲤春病毒血症鲤春病毒血症病毒荧光RT-PCR检测鱼类TCID50病毒含量
- 实时荧光RT-PCR和鸡胚分离对高致病性禽流感病毒H5人工感染鸭组织脏器的病毒检测被引量：2
- 2006年
- 赖平安张鹤晓刘环刘月焕宋维平汪明
- 关键词：高致病性禽流感病毒病毒检测鸭产品高致病性禽流感疫情脏器
- 禽流感病毒通用和H5亚型特异性核酸检测用标准物质的研制
- 基因克隆和体外转录技术，将禽流感病毒M基因和H5亚型HA基因分别转录合成cRNA，经初步定值，稀释分装后作为禽流感病毒通用和H5亚型特异性核酸标准物质候选物。采用荧光定量RT-PCR方法对标准物质候选物进行检测，确定其均...
- 乔彩霞马贵平张鹤晓高志强蒲静
- 文献传递
