张莉莉
- 作品数：21 被引量：60H指数：5
- 供职机构：广东海洋大学更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目广东省海洋渔业科技推广专项项目国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学轻工技术与工程更多>>
- 草鱼出血病病毒的基因组与抗原蛋白研究
- 叶星邓国成田园园张莉莉江小燕白岳强劳海华白俊杰吴淑勤黄志斌全迎春李胜杰于凌云王广军马冬梅简清
- 1、采用分子生物学技术结合传统病毒学研究方法，首次分离到草鱼出血病病毒广东株(GCRV-GD108株)并证实其为广东草鱼病毒性出血病病原体；2、创新应用长片段cDNA克隆新技术结合聚乙二醇核酸沉淀法成功克隆了该株全基因组...
- 关键词：
- 关键词：草鱼出血病病毒基因工程疫苗
- 一种深共晶溶剂微乳液提取体系及提取虾青素的方法
- 本发明提供一种深共晶溶剂微乳液提取体系及提取虾青素的方法。本发明的深共晶溶剂微乳液提取体系包括以下质量比的组分：深共晶溶剂10％～50％、复合表面活性剂45％～80％、环己烷5％～40％。本发明的提取虾青素的方法，包括以...
- 高静周晓纯李婉菁张莉莉
- 文献传递
- 萃取剂及使用其提取虾青素的方法
- 本发明提供一种萃取剂及使用其提取虾青素的方法。萃取剂，以质量百分比计，包括：离子液体20％‑50％、低共熔溶剂20％‑30％和水20％‑60％。使用萃取剂提取虾青素的方法，包括：将包括所述萃取剂和虾青素来源物料在内的原料...
- 高静张莉莉严来喜
- 文献传递
- Tgf2转座系统在转RFP基因斑马鱼上的应用被引量：2
- 2014年
- 提高目的基因的转植效率与可遗传效率是转基因鱼研制的关键点之一。本研究利用近年开发的金鱼转座子系统进行转基因斑马鱼的研制,探讨其在转基因鱼上应用的可行性。通过PCR方法,改造Tgf2转座子供体质粒pTgf2-EF1α-eGFP,将肌球蛋白轻链2启动子(mylz2)与红色荧光蛋白基因(RFP)定向插入其中,构建可在肌肉组织特异性表达红色荧光蛋白的Tgf2转座子供体质粒pTgf2-Mylz2-RFP。通过显微注射,将Tgf2转座子供体质粒与Tgf2转座酶mRNA共注射于斑马鱼(Danio ririo)受精卵中,共注射受精卵972粒,出膜后存活的仔鱼803尾,其中携带外源基因的仔鱼为615尾,阳性率为76.6%。转红色荧光蛋白基因斑马鱼首代F0培育至性成熟,将其中的10尾F0斑马鱼分别与野生型斑马鱼进行配对繁殖,其中1个组合产生了体表呈现均匀红色荧光的F1个体,因此RFP在F0的整合率为10%。将红色荧光F1个体培育至性成熟并与野生型鱼配对繁殖,F2的阳性个体占69%。本研究结果说明,由Tgf2转座子介导的转基因技术,可有效提高目的基因的转植效率与整合效率,在转基因鱼构建以及相关研究中具有开发应用前景。
- 吴芳叶星邹曙明张莉莉孙成飞田园园白俊杰
- 关键词：斑马鱼转基因红色荧光蛋白
- 草鱼呼肠孤病毒GCRV-GD108株VP5蛋白的原核表达被引量：3
- 2013年
- 根据草鱼呼肠孤病毒广东株GCRV-GD108编码VP5的M5基因的cDNA序列,分别设计合成带特定酶切位点的特异引物,进行PCR扩增;通过酶切与连接,构建2种重组表达载体pET30c-M5和pColdⅡ-M5,分别转化于大肠杆菌并进行诱导表达;对培养基、诱导时间、诱导剂浓度和温度等条件进行优化,确定最适表达体系。通过SDS-PAGE和Western blot对表达产物进行鉴定。结果显示,所构建的2种VP5蛋白原核表达载体,均在大肠杆菌中成功表达了分子质量大小(约80ku)与预期相符的重组蛋白,表达产物主要存在于包涵体中。诱导表达后的菌体经离心、洗涤与超声破碎,离心收集包涵体。包涵体通过变性、透析与复性,获得纯化的重组蛋白,其中pET30c-M5/BL21(DE3)工程菌的目的蛋白占全菌蛋白的22.5%,纯化后获得了高纯度的重组蛋白(>95%)。比较2种表达载体的表达结果,pET30c-M5具有诱导表达耗时少、获得重组蛋白量大的优势,可为下一步的研究提供足量的蛋白。
- 王杭军叶星田园园张莉莉瞿兰张蕊
- 关键词：免疫印迹原核表达纯化
- 大口黑鲈溃疡综合征病毒TaqMan-MGB探针荧光定量PCR检测方法的建立被引量：8
- 2011年
- 根据大口黑鲈溃疡综合征病毒（Largemouth bass ulcerative syndrome virus,LBUSV）的甲基转移酶（MTase）基因核苷酸序列设计引物及TaqMan-MGB探针,优化荧光定量PCR反应条件和反应体系,建立了LBUSV的TaqMan-MGB探针荧光定量PCR检测方法.用含有MTase基因的质粒pDNA-MT系列稀释作为标准品模板,在荧光定量PCR仪上进行PCR反应,绘制标准曲线,斜率为-3.24,R2=0.999,呈现很好的线性关系,扩增效率1.04.灵敏度检测结果表明,PCR反应24个循环时可以检测到的质粒最小浓度是102拷贝数/μL.选用107、106、105、104拷贝数/μL 4个浓度梯度质粒做模板,变异系数在1.1%-3.4%范围内,说明该方法具有良好的重复性和稳定性.利用该方法可以准确地检测出感染LBUSV的病鱼,特异性强.
- 马冬梅白俊杰邓国成李胜杰张莉莉
- 关键词：TAQMAN-MGB探针定量PCR病毒检测
- 大口黑鲈溃疡综合症病毒TaqMan-MGB探针荧光定量PCR检测方法的建立
- 根据大口黑鲈溃疡综合症病毒(Largemouth bass ulcerative synclrome virus，LUBSV)的甲基转移酶(MTase)基因核苷酸序列设计引物及TaqMan-MGB探针，优化荧光定量PCR...
- 马冬梅白俊杰邓国成李胜杰张莉莉
- 关键词：大口黑鲈TAQMAN-MGB探针
- 罗非鱼3种C型溶菌酶重组蛋白的制备及与几种鱼虾溶菌酶溶菌谱的比较被引量：7
- 2012年
- 应用基因工程技术制备了3种奥利亚罗非鱼C型溶菌酶的重组蛋白,并应用比浊法比较了它们与草鱼C型溶菌酶、G型溶菌酶和斑节对虾C型溶菌酶重组蛋白对无乳链球菌、嗜水气单胞菌等8种细菌的溶菌作用。研究发现,6种重组溶菌酶对这8种菌均具有溶菌活性,但是溶菌活力强弱不一。其中罗非鱼C3溶菌酶对革兰氏阳性菌无乳链球菌的溶菌作用最强,草鱼C型与G型溶菌酶次之;所有重组溶菌酶对革兰氏阴性菌铜绿假单胞菌均具较强的溶菌活性。与斑节对虾C型溶菌酶、草鱼C型与G型溶菌酶相比,罗非鱼的C型溶菌酶对嗜水气单胞菌具有较强的溶菌作用,且以C1的溶菌活性最强。本研究结果可为选择具较强溶菌活力的溶菌酶应用于养殖生产提供依据,并可为应用转基因技术培育抗病品种提供靶基因。
- 瞿兰叶星田园园张莉莉高风英卢迈新张蕊
- 关键词：罗非鱼草鱼斑节对虾溶菌酶
- 草鱼IgM的纯化、标记及检测方法的建立被引量：2
- 2013年
- 通过ProteinA亲和层析法分离纯化草鱼血清中的免疫球蛋白IgM,SDS-PAGE检测产物的纯度及分子量,用纯化产物免疫兔制备多克隆抗体,并用辣根过氧化物酶标记此免抗草鱼IgM抗体,用于检测经草鱼出血病病毒广东株(GCRV-GD108)衣壳蛋白VP4及VP5免疫草鱼后产生的抗体水平。结果表明,纯化后的草鱼IgM轻链及重链分子量分别在25 kD和75 kD左右,所制备的草鱼标记抗体可应用于草鱼血清IgM水平的快速检测。建立了标记抗体检测草鱼抗血清的方法,为进一步研究病原体入侵感染机制、草鱼的免疫防御机理和疫苗效果评价等提供便捷的血清学检测方法。
- 田园园叶星张莉莉
- 关键词：免疫球蛋白多克隆抗体ELISA辣根过氧化物酶
- 转红色荧光蛋白基因唐鱼的构建、生物学特性和生态安全性研究
- 白俊杰简清叶星姜鹏樊佳佳胡隐昌夏仕玲王海英陈敏刘超郁二蒙吴晗劳海华刘海涌李胜杰罗建仁马冬梅杨叶欣于凌云张莉莉
- “转红色荧光蛋白基因唐鱼的构建、生物学特性和生态安全性研究”项目由中国水产科学研究院珠江水产研究所完成。该项目采用显微注射技术成功培育出可稳定遗传的转红色荧光蛋白基因唐鱼品系(红金丝)，已繁殖至F13代；通过经典遗传学和...
- 关键词：
- 关键词：观赏鱼基因工程
