张立新
- 作品数：8 被引量：26H指数：4
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院基础医学院基础医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中国医学科学院基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 反义6A8cDNA转染肿瘤细胞生物学行为的研究被引量：3
- 1999年
- 目的探讨反义６Ａ８对肿瘤细胞恶性行为的影响。方法选用来自人鼻咽癌细胞系ＣＮＥ２Ｚ的高转移克隆ＣＮＥ２Ｌ２细胞，分别用ｐＲＣ／ＣＭＶ反义６Ａ８ｃＮＤＡ表达载体及空质粒转染并检测了反义６Ａ８ｃＤＮＡ转染、空载体转染及未转染细胞自身及与基质的粘附性、运动性和水解酶活性、体外侵袭性及体内生长转移能力。结果反义６Ａ８ｃＤＮＡ转染ＣＮＥ２Ｌ２细胞与基质的粘附性下降，其运动性和水解能力及体外侵袭及体内生长及转移能力也均下降。结论反义６Ａ８ｃＤＮＡ转染可明显降低肿瘤的恶性行为。
- 刘玉琴张立新顾蓓马凤蓉赵雪梅薛克勋高进朱立平
- 关键词：反义CDNA转染肿瘤细胞生物学行为恶性行为
- 从人活化B细胞株3D5细胞λgtll cDNA文库筛选到的1529bp cDNA的核苷酸序列分析
- 1996年
- 对用单抗５Ｃ５和单抗５Ｃ５－Ｇ１的混合物从３Ｄ５细胞λｇｔｌｌｃＤＮＡ文库筛选到的７个阳性ｃＤＮＡ克隆中的１个（３Ｄ５－５）进行了核苷酸序列分析。由于３Ｄ５－５ｃＤＮＡ长１．６ｋｂ左右，不能直接测序，故先依测序用质粒ｐＢＳｃｒｉｐｔ－ＫＳ多克隆位点中的内切酶点行单酶切，经电泳分析画出测序用的物理图谱，再用相应内切酶行单酶酶切。藉低熔点琼脂糖回收各个片段。带质粒ｐＢＳｃｒｉｐｔ－Ｋ５的大片段经直接自身环化，小片段与质粒载体ｐＢＳｃｒｉｐｔ－ＫＳ重组，构建测序用的亚克隆。用双链双脱氧末端终止法测各亚克隆的核苷酸序列，再拚接出全长为１５２９ｂｐ的３Ｄ５－５ｃＤＮＡ全长序列。与国际基因库资料比较，未见有相同的序列。此ｃＤＮＡ中有一个长４６５ｂｐ（从５４０ｂｐ－１００４ｂｐ）的ＯＲＦ，编码１５４个氨基酸的蛋白质。此蛋白质中有二个疏水区（第１～３４位氨基酸及第７９～１０９位氨基酸），提示它可能属Ⅰ类穿膜蛋白。
- 石伟朱立平崔莲仙张立新张淑珍王汛李国燕
- 关键词：CDNADNAB细胞
- 6A8 cDNA编码一种α-甘露糖苷酶被引量：7
- 1999年
- 目的 探讨6A8cDNA编码的蛋白质的性质。方法 依据ConA的配体是甘露糖,而α-甘露糖苷酶的作用是修剪细胞糖蛋白聚糖中甘露糖的原理,采用细胞免疫荧光染色法以及激光共聚焦显微镜观察经转染6A8cDNA正义或反义重组表达载体后,细胞结合ConA的强弱,验证6A8cDNA编码的蛋白质是否为一种α-甘露糖苷酶。结果 COS-7细胞和人鼻咽癌细胞株CNE-2L2转染pRc/CMV-正义6A8cDNA后与ConA结合减弱,而与单抗6A8染色增强;CNE-2L2细胞转染pRc/CMV-反义6A8cDNA后,与ConA结合增强,而与单抗6A8染色减弱。结论 6A8cDNA编码的蛋白质可能为一种α-甘露糖苷酶,它可被单抗6A8识别。
- 史耕先马凤蓉朱立平张立新赵方萄刘音王讯
- 单抗5C5-G1识别的分化抗原表达于活化B细胞胞膜被引量：4
- 1998年
- 目的鉴于５Ｃ５ｃＤＮＡ（６１３ｂｐ）的２～４５０ｂｐ与ＨＳＭＲＰ１７ｍＲＮＡ（１００８ｂｐ）的５６０～１００８ｂｐ的同源性高达９５％，且后者编码的蛋白质（ＭＲＰＬ１２）也在细胞活化后表达，本研究旨在探究两者是否属同一物。方法多个人Ｂ细胞株用单抗５Ｃ５－Ｇ１作间接免疫荧光染色，激光扫描共聚焦显微镜观察。结果５Ｃ５－Ｇ１单抗识别分子表达于膜下近膜胞浆处、也可能在膜表面，但非单纯在膜上，而ＭＥＰＬ１２只表达于线粒体。另外，前Ｂ细胞Ｎａｌｍ－６与单抗５Ｃ５－Ｇ１反应阴性，活化前期Ｂ细胞Ｄａｕｄｉ和３Ｄ５的反应强阳性，分化晚期Ｂ细胞ＳＫＷ６为弱阳性。结论５Ｃ５ｃＤＮＡ与ＨＳＭＲＰ１７ｍＲＮＡ不属同一基因；
- 马凤蓉朱立平朱立平张立新张淑珍王汛张淑珍赵方萄王汛
- 关键词：B细胞胞膜显微镜检
- 一个与编码大鼠ERα-甘露糖苷酶同源的人cDNA分子克隆被引量：12
- 1997年
- 用抗人Ｂ细胞和Ｔ细胞共同分化抗原６Ａ８单克隆抗体从人扁桃体细胞λｇｔ１１ｃＤＮＡ文库克隆到１个长１３５８ｂｐ的ｃＤＮＡ。此ｃＤＮＡ内有一个长１２７８ｂｐ（２６～１３０３ｂｐ）的开放阅读框架，编码４２５个氨基酸的蛋白质。此蛋白质氨基酸序列中第１５７位到２２３位为疏水跨膜区。蛋白质的氨基酸序列与大鼠ＥＲα－甘露糖苷酶（１０４０个氨基酸）的６３２～１０３８位氨基酸序列间的相同性和相似性高达８２．０４５％和８８％。它与酵母Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｖｉｓｉａｅα－甘露糖苷酶（１０８３个氨基酸）的６５９～１０８３位氨基酸序列间的相同性和相似性也有３２．５％和５１．７５％。前者１６３～２７７位间与后者８３２～９４６位间１１５个氨基酸序列间的相同性和相似性达到５７％和７４％。由于６Ａ８ｃＤＮＡ核苷酸顺序未见于国外基因库资料，故已为ＮＩＨＧｅｎＢａｎｋ接受登记，接受号为Ｕ３７２４８。
- 张立新朱立平朱立平石伟祝庆麟马凤蓉王汛李国燕
- 关键词：分化抗原甘露糖苷酶CDNA分子克隆
- 转染反义6A8cDNA对人鼻咽癌细胞肺转移的抑制被引量：2
- 1999年
- 人鼻咽癌高肺转移克隆株CNE 2L2转染编码人α 甘露糖苷酶的cDNA( 6A8cDNA ,GenBank接受号为U3 72 48)的重组反义表达载体 ( pRc/CMV 反义6A8cDNA)后 ,与转染空载质粒pRc/CMV及未作任何转染的细胞相比 ,其生长受一定程度抑制 .接种于无胸腺鼠皮下 2个月 ,野型CNE 2L2细胞组有肺转移的小鼠数为 9/10 ( 90 % ) ,其中Ⅲ级 8只 ,Ⅱ级 1只 ;转染空载质粒pRc/CMV ,有肺转移者为6/8( 75 % ) ,其中Ⅲ级 1只 ,Ⅱ级 2只 ,Ⅰ级 3只 ;转染pRc/CMV 反义 6A8cDNA ,有肺转移者为 3 /10 ( 3 0 % ) ,全部为Ⅰ级 .
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- 关键词：CDNA转染鼻咽癌细胞株肺转移
- 分化抗原6A8在B淋巴细胞膜和胞浆中的表达
- 1998年
- 采用间接免疫荧光染色、流式细胞仪、激光扫描共聚焦显微镜、Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析研究分化抗原６Ａ８在人淋巴细胞的表达。流式细胞仪分析显示，单抗６Ａ８与所检测的Ｂ细胞株３Ｄ５、ＣＥＳＳ和Ｄａｕｄｉ有反应，与人组织细胞瘤细胞株Ｕ９３７也有反应，与慢性髓性白血病细胞株Ｋ５６２及所检测的Ｔ细胞株Ｊｕｒｋａｔ和Ｐｅｅｒ不反应。Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ检测支持上述现象，３Ｄ５和Ｕ９３７细胞ｍＲＮＡ转录较丰富，ＣＥＳＳ细胞次之，而Ｊｕｒｋａｔ与Ｐｅｅｒ细胞的ｍＲＮＡ转录很少。激光扫描共聚焦显微镜观察显示，单抗６Ａ８识别的分化抗原见于３Ｄ５细胞浆和胞膜。可见在人Ｂ细胞株３Ｄ５，分化抗原６Ａ８不仅表达于胞膜，也表达于胞浆。
- 张立新朱立平朱立平马凤蓉石伟张淑珍石伟李国燕张淑珍
- 关键词：分化抗原B细胞单克隆抗体
- 编码与大鼠ERα-甘露糖苷酶同源的人6A8cDNA在真核细胞的表达被引量：7
- 1998年
- 目的观察６Ａ８ｃＤＮＡ（１３５８ｂｐ）在真核细胞的表达。方法Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ，构建６Ａ８ｃＤＮＡ表达载体ｐＲｃ／ＣＭＶ－６Ａ８ｃＤＮＡ，转染ＣＯＳ－７细胞，及基因免疫小鼠。结果６Ａ８ｃＤＮＡ有４．３ｋｂ和３．５ｋｂ两种ｍＲＮＡ转录形式。４．３ｋｂｍＲＮＡ以外周血白细胞最丰富，其次为淋巴结、脾脏和骨髓，胸腺组织表达较少，胎肝则缺如。３．５ｋｂ者也以外周血白细胞最丰富，其次为肝脏、淋巴结和骨髓，胸腺和脾脏表达量最少。ｐＲｃ／ＣＭＶ－６Ａ８ｃＤＮＡ在ＣＯＳ－７细胞表达了分子量４５０００左右的蛋白质，与单抗６Ａ８有反应。ｐＲｃ／ＣＭＶ－６Ａ８ｃＤＮＡ基因免疫小鼠，６／１０只小鼠血清与人活化Ｂ细胞株３Ｄ５细胞膜有反应，５／５只对照小鼠血清呈阴性反应。结论６Ａ８ｃＤＮＡ（１３５８ｂｐ）在真核细胞获得表达，但此ｃＤＮＡ非为全长。
- 张立新马凤蓉朱立平李波石伟张淑珍李国燕王汛赵方萄
- 关键词：RNA信使甘露糖苷酶真核细胞
