应用前期工作克隆的腺病毒晚期表达盒对引进的5型腺病毒(Adenovirus type 5,Ad5)载体进行改建,首先将成人腹泻轮状病毒(Adult Diarrhea rotavirus,ADRV)第5基因克隆入表达盒中,而后将该表达盒插入到Ad5载体的E3区,最后重组质粒与Ad5 DNA EcoR I大片段共转染A549细胞,经打点杂交和Southern转印筛选出重组病毒空斑。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测重组病毒感染细胞上清和沉淀的抗原滴度分别为1:8,1:64。Western转印显示在分子量44 000处有一条转印带。ADRV第5基因在改建的Ad5载体上的表达为口服腺病毒基因工程疫苗的研究积累了实验经验,为ADRV诊断试剂的研制提供了便利条件。
