张旻
- 作品数：23 被引量：110H指数：6
- 供职机构：中南大学湘雅二医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖南省自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人胚胎原始生殖细胞移植治疗大鼠急性肝损伤
- 2008年
- 目的：胚胎原始生殖细胞能以原始胚胎状态无限增殖,并可通过异体移植或适宜的体外环境自然分化为胚胎生殖层。实验拟进一步观察体外培养的胚胎原始生殖细胞对急性肝损伤大鼠的治疗效果,及其能否在大鼠体内分化为肝细胞。方法：实验于2003-09/2005-05在中南大学肝病研究所完成。①细胞及动物：经中南大学湘雅二医院医学伦理委员会批准,取孕4～12周流产人胚胎,其双亲3代内无遗传性疾病,孕妇对流产胚胎用于实验均签署知情同意书。清洁级健康成年SD大鼠50只,随机数字表法分为5组：培养基对照组、单纯人胚原始生殖细胞组、人胚原始生殖细胞＋环磷酰胺组、单纯鼠胚原始生殖细胞组、鼠胚原始生殖细胞＋环磷酰胺组,10只/组。另选取健康成年SD孕鼠4只用于分离鼠胚原始生殖细胞。动物均由中南大学湘雅二医院动物实验中心提供,实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准。②实验方法：从人胚胎中分离出原始生殖嵴组织,悬浮培养获取人胚原始生殖细胞,用含15%胎牛血清的高糖DMEM基础培养基调节细胞浓度至1×10^8L^-1。取SD孕鼠胚胎分离生殖嵴,消化离心培养鼠胚原始生殖细胞,浓度1×10^8L^-1。各组大鼠均于腹腔内注射D-氨基半乳糖建立急性肝损伤模型,造模后48h,培养基对照组自尾静脉输注基础培养基,其余4组给予对应细胞悬液及免疫抑制剂环磷酰胺。③实验评估：从细胞形态、表面标记及体外分化等方面检测人胚原始生殖细胞的生物学特性;比较各组大鼠肝功能、增殖细胞核抗原阳性率、糖原染色阳性率、肝脏病理改变;检测各组大鼠肝脏病理切片中人白蛋白、甲胎蛋白的表达。结果：①人胚原始生殖细胞的生物学特性：培养1d后单个原始生殖细胞形成细胞集落,以后集落逐渐增大并隆起,形成鸟巢状,周边界限清晰,内部细胞排列紧密。�
- 唐晓鹏陈丽敏唐元媛陈丁张旻
- 关键词：原始生殖细胞胚胎干细胞急性肝损伤细胞移植
- 晚期酒精性肝硬化并发自发性脊髓硬膜外血肿1例
- 2007年
- 患者男，55岁，因反复乏力、眼黄3月，伴腹胀、双下肢浮肿近1月于2006年7月5日入院。患者喝米酒30余年，0．5～1kg／d，其余病史无特殊。入院体检：体温37℃，脉搏90次／min，呼吸20次／min，血压140／80mmHg（1mmHg=0．133kPa）;自动体位，慢性肝病容，皮肤巩膜重度黄染，可见肝掌，颜面及前胸可见大量毛细血管扩张和蜘蛛痣，四肢远端可见散在出血点，左大腿内侧可见-10cm×15cm大小紫癜;腹膨隆、软，全腹轻压痛和反跳痛，肝脾肋下未触及，移动性浊音阳性，双下肢中度凹陷性水肿，其余大致正常。外院MRI显示肝硬化伴腹水，胃镜发现食管静脉中度扩张。
- 雷建华罗红雨杨旭龚国忠张旻谌资
- 关键词：肝硬化酒精性血肿硬膜外脊髓疾病
- 基于群体药动学模型探索伏立康唑在肝功能不全患者的个体化给药方案
- 唐丹颜苗张旻田沂宋柏力王峰陈西敬龚国忠向大雄
- 脐带血单个核细胞体外培养分化为肝细胞的实验观察被引量：14
- 2006年
- 目的探讨脐带血单个核细胞在体外定向分化为肝细胞的条件及能力,为建立脐血干细胞移植治疗慢性肝衰竭提供实验依据。方法采集脐带血分离单个核细胞后,在实验组加入成纤维细胞生长因子(FGF)及促肝细胞生长因子(HGF)、或FGF加胎肝上清液培养,对照组只加FGF培养,观察细胞生长分化状况,免疫组化检测两组人甲胎蛋白(AFP)和白蛋白(Alb)。结果实验组可见类圆形及多边形细胞,呈类肝细胞形态,对照组大多为梭形细胞,未见多边形细胞;实验组细胞AFP、Alb免疫组化染色为阳性,对照组未见AFP,Alb阳性细胞。HGF的诱导分化效果优于胎肝上清液。结论脐带血单个细胞在HGF或胎肝上清液的诱导下可以定向分化为能分泌Alb及AFP的类肝细胞。
- 唐晓鹏张旻陈丽敏田沂李异曾妍
- 关键词：脐带血单个核细胞脐带血细胞分化类肝细胞
- HCV非结构蛋白5A对HIV长末端重复序列影响的初步探讨
- 2014年
- 目的本研究拟探讨HCV非结构蛋白5A(NS5A)对HIV长末端重复序列(long terminal repeat,LTR)影响,从而为HCV对HIV的影响提供实验依据。方法将构建的LTR启动子驱动的荧光素酶(Luc)报告基因表达质粒(pGL3-LTR-Luc)和含HCV NS5A基因的表达质粒pCNS5A共转染肝癌细胞株(Huh7细胞),采用免疫细胞化学技术、Western Blot及逆转录聚合酶链反应检测HCV NS5A蛋白及mRNA的表达;本实验分三组,将质粒pGL3-LTR-Luc(空白组)、质粒pRc/CMV+pGL3-LTR-Luc(对照组)、质粒pCNS5A+pGL3-LTR-Luc(实验组)分别转染Huh7细胞,48 h后收集细胞,采用Luc活性检测LTR的活性,以观察HCV NS5A对LTR的调控影响。所得荧光活性值以均数±标准差表示,采用Levene's方差齐性检验,多组间比较采用单因素方差分析,两两比较行LSD-t检验。结果转染pcNS5A质粒的Huh7细胞质经RT-PCR及Western Blot检测,HCV NS5A mRNA及蛋白在细胞中获得表达。方差分析结果提示LTR荧光活性在三组间有明显的差异(F=7.876,P=0.002),进一步比较各组间的差异,结果提示共转染质粒pcNS5A+pGL3-LTR-Luc组的Huh7细胞中Luc相对活性(22 476±4471)明显高于单转染pGL3-LTR-Luc组(15 887±3039,P=0.002)及共转染质粒pRc/CMV+pGL3-LTR-Luc组(16 321±4162,P=0.008),差异有统计学意义。结论表达HCV NS5A的质粒pCNS5A成功转染至Huh7细胞;HCV NS5A蛋白能激活HIV LTR,提示HCV NS5A可能为HCV促进HIV复制的分子机制之一。
- 彭米林肖新强蒋永芳田沂许允张旻王文龙彭锋龚国忠
- 关键词：肝炎病毒属HIV病毒非结构蛋白质类
- 5-杂氮胞苷诱导人淋巴细胞系Molt4细胞PD-1基因启动子去甲基化及PD-1蛋白表达的影响被引量：2
- 2011年
- 目的 以T淋巴细胞株Molt-4细胞为模型,探讨甲基化抑制剂5-杂氮胞苷（5-Zac）对淋巴细胞表面程序性死亡受体-1（PD-1）基因肩动子的去甲基化作用及其诱导的PD-1基因表达的改变,并进一步研究去甲基化作用与PD-1基因表达之间的关系.方法 以不同浓度的5-Zac（0、5、10μmoL/L）作用于体外培养的Molt-4细胞72 h,流式细胞术（FCM）检测细胞表面表达PD-1的Molt-4细胞比例和细胞凋亡率;反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测5-Zac作用后PD-1基因mRNA的转录水平;亚硫酸氧钠处理各组Molt-4细胞DNA,PCR扩增与转录因子Brn-2结合的PD-1启动子基因片段,转化感受态大肠杆菌,挑克隆测序,检测扩增的PD-1启动子片段甲基化状态.结果 0、5、10μmol/L的5-Zac作用于Molt-4细胞72 h后,PD-1在细胞表面的表达率分别为1.13%4±0.01%、18.96%±1.87%、63.09%±6.25%,并呈现浓度依赖性（P〈0.05）;PD-1基因mRNA表达量显著增加;细胞凋亡检测结果显示与未处理组相比,5-Zac处理72 h后Molt-4细胞的凋亡率显著增加,3组凋亡率分别为1.9%4±0.06%、8.98%4±1.36%、24.5%4±3.68%,差异有统计学意义（P〈0.01）;3组DNA亚硫酸氢钠测序结果表明,5-Zac处理后,与转录因子Bin-2结合位置的CG点明显受到去基化影响,其去甲基化概率与周围其他CG点去甲基化概率比较差异有统计学意义（P〈0.05）.结论 甲基化抑制剂5-Zac可导致体外培养的淋巴细胞系Molt-4细胞表面PD-1表达显著增加,PD-1基因mRNA表达增加,细胞凋亡率增高;PD-1基因活化和表达的增加可能与5-Zac降低PD-1基因启动子上与转录因子Bin-2结合位置的CG点甲基化水平,从而促进Brn-2与基因启动子结合,使转录表达增加有关.
- 张旻肖新强梁云生彭敏源蒋永芳龚国忠
- 关键词：去甲基化
- 造血干细胞——肝病治疗新希望被引量：1
- 2003年
- 随着上世纪末对造血干细胞生物学特点的深入研究,造血干细胞诱导分化为非髓系/淋巴细胞系的各种细胞系已成为各国科学工作者近年的研究热点,并取得了一定的成果。将造血干细胞诱导分化为肝细胞也是研究的热点之一,本文就这方面的研究成果以及存在的问题作了综述。
- 张旻唐晓鹏杨旭
- 关键词：造血干细胞肝脏再生肝干细胞肝卵圆细胞
- 慢性乙型肝炎患者PD-1启动子区域甲基化状态的研究
- 第一部分、慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞表面的PD-1表达及其影响因素的研究
目的：研究慢性乙型肝炎患者外周血外周血单个核细胞、CD4+T、CD8+T淋巴细胞表达PD-1的情况以及影响PD-1表达的可能的因素。 ...
- 张旻
- 关键词：T淋巴细胞表达
- 文献传递
- PD-1基因启动子区域甲基化水平对慢性乙肝患者外周血单个核细胞上PD-1表达的影响被引量：1
- 2013年
- 目的探讨慢性乙型肝炎（CHB）患者外周血单个核细胞（PBMCs）上程序性死TL=受体-1（PD-1）表达和PD-1启动子区域甲基化水平的差异及其影响因素，以及两者之间的关系。方法筛选2009年9月至2011年9月在中南大学湘雅二医院传染科门诊就诊144例CHB患者和18名健康献血员，流式细胞术（FCM）检测PBMCs表面表达PD-1的细胞比例，同时进行肝功能检测；时间分辨荧光免疫分析法检测CHB患者血清HBV标志物水平，荧光定量PCR检测血清HBVDNA载量；亚硫酸氢钠处理PBMCs细胞DNA，PCR扩增PD-1启动子基因片段，转化感受态大肠杆菌，挑克隆测序，检测扩增的PD-1启动子片段甲基化状态。结果与正常对照组（10．8％±4．4％）比较，CHB患者PBMCs上PD-1表达水平明显升高。在CHB患者中，PBMCs上PD-1表达在HBeAg阳性患者（27．1％±18．4％）中显著高于HBeAg阴性患者（19．6％±15．6％），PD-1表达水平与HBV-DNA和AIJT水平无明显相关性。PD-1启动子上多个CpG点（-601、-553、-538、-483、-463、-317bp）甲基化程度与PD-1在单个核细胞上的表达呈负相关。结论PD-1基因启动子区域甲基化水平可能影响CHB患者PBMCs上PD-1表达。
- 张旻肖新强刘素芳梁云生彭米林许允龚国忠
- 关键词：转录启动子程序性死亡受体-1
- 甲基化抑制剂5-杂氮胞苷对T淋巴细胞株程序性死亡受体-1基因启动子区域甲基化水平及其表达的影响被引量：2
- 2011年
- 目的:以T淋巴细胞株Molt-4细胞为模型,探讨甲基化抑制剂5-杂氮胞苷(5-azacytidine,5-Zac)对淋巴细胞表面程序性死亡受体-1(programmed death receptor 1,PD-1)基因启动子的去甲基化作用及其诱导的PD-1基因表达的改变,并进一步研究去甲基化作用与PD-1基因表达之间的关系。方法:以不同浓度的5-Zac分组(0μmol/L组、5μmol/L组、10μmol/L组)作用于体外培养的Molt-4细胞72 h,流式细胞仪(flow cy-tometry,FCM)检测细胞表面表达PD-1的Molt-4细胞比例和细胞凋亡率;反转录-聚合酶链反应(reverse tran-scription polymerase chain reaction,RT-PCR)检测5-Zac作用后PD-1基因mRNA的转录水平;亚硫酸氢钠处理各组Molt-4细胞DNA,PCR扩增PD-1启动子基因片段,转化感受态大肠杆菌,挑克隆测序,检测扩增的PD-1启动子片段甲基化状态。结果:0μmol/L组、5μmol/L组、10μmol/L组的5-Zac作用于Molt-4细胞72 h后,PD-1在细胞表面的表达率分别为(1.13±0.01)%,(18.96±1.87)%和(63.09±6.25)%,并呈现浓度依赖性;PD-1基因mRNA表达量显著增加;细胞凋亡检测结果显示:与0μmol/L组相比,5μmol/L组、10μmol/L组5-Zac处理72 h后Molt-4细胞的凋亡率显著增加,0μmol/L组、5μmol/L组、10μmol/L组凋亡率分别为(1.9±0.06)%,(8.98±1.36)%和(24.5±3.68)%,差异有统计学意义(P<0.01);上述3组DNA亚硫酸氢钠测序结果表明:加入甲基化抑制剂5-Zac处理后,PD-1启动子上-601 bp和-553 bp CpG点去甲基化程度明显增高。结论:甲基化抑制剂5-Zac可导致体外培养的T淋巴细胞系Molt-4细胞表面PD-1 mRNA表达显著增加,细胞凋亡率增高,这种增高可能与PD-1基因启动子区域出现的去甲基化有关。
- 张旻肖新强梁云生彭敏源蒋永芳许允龚国忠
- 关键词：程序性死亡受体-1去甲基化
