周莹冰
- 作品数：28 被引量：95H指数：6
- 供职机构：重庆市渝中区疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市自然科学基金重庆市科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学理学更多>>
- 重庆市渝中区2011-2013年食源性致病菌监测结果分析被引量：4
- 2014年
- 目的全面了解渝中区食品卫生状况,确定食源性致病菌在不同类食物中的分布情况,为食品安全风险评估提供科学依据。方法按国标GB4789和食源性致病菌监测手册的方法,对16类食品中的沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、阪崎肠杆菌、蜡样芽胞杆菌、单核细胞增生李斯特氏菌、致泻大肠埃希氏菌、副溶血性弧菌和布鲁氏菌进行分离与鉴定。结果 2011-2013年共检测食品样品630份,检出食源性致病菌31株,总检出率为4.92%,其中检出金黄色葡萄球菌15株,检出率为2.46%(15/610);单核细胞增生李斯特菌7株,检出率为2.15%(7/325);蜡样芽胞杆菌2株,检出率为1.43%(2/140);阪崎肠杆菌7株,检出率为10%(7/70);而沙门氏菌、志贺氏菌、致泻大肠埃希氏菌、副溶血性弧菌、布鲁氏菌均未检出。结论本区所售食品存在一定的安全隐患,应加大监管力度,避免食品安全事件的发生。
- 周莹冰罗昱玥刘义萍桂勇
- 关键词：食品食源性致病菌
- 金葡菌TG-TPase嵌合基因在甲醇营养型酵母中的表达被引量：1
- 2009年
- 目的设计耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)耐药相关TG-TPase嵌合基因,构建其真核表达质粒,为嵌合基因的高效、分泌型表达奠定基础。方法在序列结构分析的基础上,设计引物从MRSA菌株中扩增其耐药性相关转糖基酶(TGase)和转肽酶(TPase)活性片段,进一步用酶切连接等分子生物学操作构建TG-TPase嵌合基因,亚克隆至酵母表达质粒pPIC9K中,转化DH5α大肠埃希菌。经酶切、PCR和核苷酸测序鉴定正确的重组质粒用SalⅠ线性化,整合入甲醇营养型毕赤酵母GS115中,在DNA和基因转录水平鉴定出阳性重组酵母。结果采用PCR从MRSA基因组中扩增得到了873bp的TGase片段和1044bp的TPase片段。以酶切连接构建的TG-TPase嵌合基因经酶切、PCR鉴定,能获得约1900bp的融合片段,与预期结果相符,测序表明序列和阅读框均正确。线性化的重组质粒转化GS115后,得到5个高拷贝阳性转化子,经诱导表达和PCR鉴定,这些转化子能转录出目的基因的mRNA。结论成功构建了含TG-TPase嵌合基因的重组毕赤酵母工程菌,为进一步高效制备嵌合蛋白、进而利用其酶学活性进行抗耐药性金葡菌抑制剂的筛选创造前提。
- 杨杰饶贤才侯瑞胡晓梅陈志瑾丛延广谭银铃朱军民周莹冰胡福泉
- 关键词：MRSATGASE毕赤酵母
- HSV-1 UL15 exon-Ⅱ的原核表达及抗体制备
- 2009年
- 目的构建pQE-HSV-1 UL15 exonⅡ原核表达载体,在大肠埃希菌中高效表达并免疫家兔制备抗体。方法以HSV-1感染后的Vero细胞总RNA为模板,通过RT-PCR扩增HSV-1 UL15 exon-Ⅱ基因,克隆入原核表达载体pQE-31;重组质粒经酶切、测序鉴定无误后转化大肠埃希菌JM109,IPTG诱导表达;SDS-PAGE检测蛋白表达情况;表达蛋白用Ni-NTA亲和层析纯化及透析复性处理后免疫家兔制备特异性抗体,抗体的免疫原性用Western blotting进行检测。结果通过RT-PCR扩增获得了HSV-1 UL15 exon-Ⅱ全长基因;构建的pQE-HSV-1 UL15 exonⅡ重组质粒经酶切及测序鉴定无误;阳性转化菌株经IPTG诱导后SDS-PAGE电泳显示表达蛋白的相对分子质量约为43 000,与理论值一致,蛋白表达率约为35%～40%;表达蛋白经纯化及透析复性后免疫家兔获得的抗血清经Western blotting鉴定具有较好的特异性和敏感性。结论成功构建了pQE-HSV-1 UL15exonⅡ原核表达载体,诱导蛋白表达并进一步用表达的蛋白制备了特异性抗体,为HSV-1末端酶全长基因表达情况的鉴定及最终构建抗病毒组装药物的分子筛选模型奠定了前期实验基础。
- 陈灿煌黎庶金晓琳朱晓艳胡晓梅周莹冰丛延广朱军民陈志瑾胡福泉
- 关键词：原核表达抗体制备
- 铜绿假单胞菌噬菌体PaP2生物学特性的研究被引量：14
- 2004年
- 目的 确定铜绿假单胞菌噬菌体PaP2的形态与大小、裂菌特性、最佳感染复数、一步生长特性等基本的生物学特性。方法 电镜观察纯化噬菌体颗粒 ;制备PaP2噬斑 ,观察其特点 ;提取噬菌体感染的细菌基因组 ,用SmaⅠ酶切 ,通过脉冲场电泳观察酶切产物的带型特点 ;测定不同感染复数 ,培养 3 5h后细菌 噬菌体液中的噬菌体滴度 ;加入宿主菌及噬菌体使MOI =10 ,进行一步生长实验 ,在 0时刻和每隔 15min测定噬菌体滴度。结果 噬菌体PaP2头部直径约为 5 2nm ,无囊膜 ,有一短尾 ;噬斑雾状半透明 ,直径约 1～ 2mm ;被噬菌体感染的宿主菌基因组的SmaⅠ酶切产物带型 ,比未感染宿主菌的多出了 1条大于噬菌体基因组的片段 ;当MOI =10时宿主菌产生的子代噬菌体滴度最高 ;绘制出了一步生长曲线。结论 PaP2属短尾噬菌体科 ,是溶原性噬菌体 ;最佳感染复数是 10 ;感染宿主菌的潜伏期是 75min ,裂解期是 90min ,平均裂解量是 3
- 黄建军胡晓梅饶贤才张克斌金晓琳周莹冰李明申晓冬朱军民胡福泉
- 反义人血管生成素的真核表达载体的构建及其体外功能的初步研究被引量：1
- 2004年
- 目的 构建含反义人血管生成素的真核表达载体 ,并转染人肺癌细胞株A5 4 9,使之特异性地封闭A5 4 9细胞中血管生成素的表达 ,以达到抑制肿瘤生长的目的。方法 用RT PCR的方法合成血管生成素的cDNA ,将其反向克隆入逆转录病毒质粒载体中 ,通过PA317细胞包装为假病毒颗粒 ,体外转染肺癌细胞株A5 4 9。结果 构建出含反义血管生成素的逆转录病毒载体 ,感染A5 4 9细胞后 ,能有效抑制A5 4 9细胞血管生成素蛋白的表达。结论 利用反义血管生成素的逆转录病毒载体能够有效抑制培养细胞血管生成素的表达 ,为今后的体内应用奠定了基础。
- 周莹冰刘松青唐敏
- 关键词：血管生成素真核表达载体
- 噬菌体PaP3推定基因tls核酸内切酶活性的初步验证被引量：2
- 2006年
- 目的对BLAST推定的铜绿假单胞菌噬菌体PaP3的tls基因功能进行实验验证。方法采用PCR方法从噬菌体PaP3基因组扩增出tls基因,克隆至pMD18-T载体中,再经酶切纯化后将目的基因插入表达载体pQE31,转化入大肠杆菌JM109,IPTG诱导表达目的蛋白,超声裂菌后收集包涵体,并用裂解缓冲液溶解包涵体蛋白。然后利用Ni-NTA亲合层析纯化蛋白,通过透析使H6-TLS复性。最后构建含有末端酶大亚基酶切位点的底物质粒pMD-cos,检测复性蛋白活性。结果通过上述方法,成功构建了pQE-tls表达载体,融合蛋白H6-TLS表达量占菌体总量的30%。同时成功构建了目的蛋白的底物质粒pMD-cos。经由亲和层析初步纯化及透析复性后,H6-TLS可检测出核酸内切酶的活性,能将底物质粒部分线性化。结论成功地获得了具有内切酶活性的H6-TLS融合蛋白,为tls基因的认证提供了实验证据,为进一步鉴定和利用该基因奠定了基础。
- 申晓冬胡福泉李明胡晓梅周莹冰张克斌
- 关键词：基因表达
- 一起副溶血性弧菌食源性聚集事件的实验室检测及病原分析被引量：1
- 2023年
- 目的:对一起游轮聚集性食源性疾病事件进行病原学调查,为预防食源性疾病事件的发生提供依据。方法:对采集的肛拭子、食品标本进行病原菌分离、鉴定,对分离出的5株副溶血性弧菌进行血清型鉴定、毒力基因(tlh、tdh、trh)鉴定,脉冲场凝胶电泳分子分型,开展药敏实验。结果:从5例病例肛拭标本中分离到副溶血性弧菌,菌株血清型均为O9:K44,所有菌株毒力基因为tlh+tdh+trh-;脉冲场凝胶电泳聚类分析显示3株同源性为100%,其余2株与这3株的同源性分别为88.89%、83.78%;药敏试验显示5株分离株仅对氨苄西林中度敏感,对氯霉素、甲氧苄啶/磺胺甲噁唑、多粘菌素E、厄他培南、头孢噻肟、头孢他啶、头孢他啶/阿维巴坦、四环素、替加环素、美罗培南、头孢西丁、环丙沙星、萘啶酸、阿奇霉素、阿米卡星和链霉素均敏感。结论:引起此次聚集性食源性疾病的病原菌是副溶血性弧菌O9:K44型,相关部门应加强对旅行机构餐饮宴席的日常监管,预防类似事件的发生。
- 李佳琪罗昱玥章兴隆刘义萍周莹冰
- 关键词：副溶血性弧菌食源性疾病脉冲场凝胶电泳药敏
- 重庆市某儿童医院食源性疾病病原体检测及结果分析被引量：3
- 2022年
- 目的了解重庆市儿童群体中食源性疾病流行病学特征及病原体检出情况,为预防儿童感染性腹泻提供科学依据。方法以2019-2021年重庆医科大学附属儿童医院采集的食源性疾病病例粪便标本进行沙门氏菌、副溶血性弧菌、志贺氏菌、致泻大肠埃希氏菌及诺如病毒的病原学检测,并对结果进行分析。结果2019-2021年共报告438例病例,采集标本354件,有126份标本检出阳性,检出率为35.59%,病原体检出情况为沙门氏菌103株(29.10%),致泻大肠埃希氏菌3株(0.85%),诺如病毒33株(9.32%),未分离出志贺氏菌和副溶血性弧菌,致病菌合并诺如病毒感染13例(3.67%);病例主要集中在小于或等于5岁年龄段,阳性标本多集中在小于或等于2岁年龄段,占阳性标本总数的82.08%(食源性致病菌)和84.85%(诺如病毒);可疑食品大部分来自家庭自制食品,占所有病例的71.92%。结论重庆地区儿童食源性疾病病原体以沙门氏菌和诺如病毒为主,应有针对性地加强食品安全宣教健康教育,开展食源性疾病防控知识宣传,以降低食源性疾病的发生。
- 李佳琪罗昱玥唐小静李英杰周莹冰
- 关键词：儿童腹泻食源性疾病病原体
- pQE-EGFP原核表达载体的构建及其表达和鉴定被引量：4
- 2008年
- 目的:利用分子克隆技术构建原核表达载体pQE-EGFP,在大肠埃希菌中高效表达与鉴定。方法:以质粒pEGFP-N2为模板,采用PCR方法特异性扩增增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因序列,将其克隆于原核表达载体pQE-31,所构建的重组质粒经测序鉴定后转化大肠埃希菌JM109,用异丙基巯基半乳糖(IPTG)诱导表达;十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western blotting鉴定表达蛋白质。结果:PCR扩增得到了EGFP全长结构基因。所构建的pQE-EGFP重组质粒经酶切及测序鉴定结果与设计序列一致;转化大肠埃希菌JM109,经IPTG诱导后,目的蛋白表达率约为25%;SDS-PAGE、Western blotting初步测定目的蛋白的相对分子质量约为28 500,与理论预期值一致。结论:pQE-EGFP重组质粒的成功构建、表达和鉴定为TAT-EGFP融合蛋白穿透细胞能力的研究奠定了基础。
- 李欢胡晓梅杨杰饶贤才丛延广黎庶周莹冰朱军民胡福泉
- 关键词：增强型绿色荧光蛋白基因克隆蛋白表达蛋白鉴定
- 毕赤酵母表达肽抗生素hPAB-β的纯化被引量：6
- 2008年
- 目的在成功构建肽抗生素hPAB-β重组毕赤酵母的基础上,深入探讨酵母表达hPAB-β的规模化纯化方法。方法采用高密度发酵法在3.7L发酵罐中对pPIC9K-hPAB-β/GS115优5重组菌株进行发酵,收集发酵液,依次采用W-UF-Ⅱ过滤系统超滤、反相层析、阳离子交换、分子筛层析等纯化技术对目标表达产物逐级进行纯化,目的蛋白用15%的Tricine-SDS-PAGE电泳进行跟踪分析。最终纯化产物的生物学活性用平板琼脂扩散法进行测定。结果在培养至工程菌菌体湿重约200～250g/L时,以甲醇诱导培养基诱导目的蛋白表达,48h后菌体湿重达280g/L,目标产物表达量约75mg/L。发酵液经Mr10000膜超滤,达到去除大部分酵母色素和浓缩样品的目的(体积浓缩约2/3)。再经反相层析、离子交换、分子筛层析纯化,最终目的产物的纯度达98%以上,得率达32.5%。且纯化的目的蛋白具有良好的杀灭金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌的活性。结论酵母表达肽抗生素hPAB-β经膜超滤、反相层析、离子交换和分子筛层析四步纯化,实现了去除非目的蛋白、酵母色素及脱盐的目的,为规模化制备hPAB-β创造了前提。
- 陈志瑾丛延广周莹冰侯瑞胡福泉饶贤才
- 关键词：毕赤酵母肽抗生素发酵纯化
