周琨
- 作品数：8 被引量：7H指数：1
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 造血发育过程中造血祖细胞生物学特性的时空变化
- 2009年
- 本实验以小鼠胚胎主动脉-性腺-中肾(aorta-gonad-mesonephros,AGM)区、胎肝(fetalliver,FL)以及小鼠骨髓(bonemarrow,BM)为研究对象,研究各阶段造血祖细胞在发育过程中的c-kit的表达变化和部位迁移,以及不同发育阶段、不同造血部位来源c-kit+细胞的生物学特性。用流式细胞术检测小鼠胚胎10.5天(embryonic10.5,E10.5)、E11.5的AGM区,E12.5、E14.5、E16.5、E18的FL以及BM来源的单个核细胞中c-kit+细胞的比例。用磁珠分选法分离E10.5AGM区、E14.5FL以及BM来源c-kit+细胞,贴壁培养法分离小鼠E14.5FL基质细胞。建立体外Transwell共培养体系,比较不同来源的c-kit+细胞增殖、分化、迁移以及集落形成能力。流式细胞术检测发现:相对于BM,E10.5AGM区和E12.5FL中c-kit+细胞比例较高。进行体外培养,AGM区来源c-kit+细胞具有较强的增殖潜能,而FL、BM来源的c-kit+细胞在体外培养中更容易分化;AGM区和FL来源的c-kit+细胞比BM来源的c-kit+细胞在体外培养中具有更强的趋化迁移能力。集落形成能力方面,AGM区来源c-kit+细胞具有较强形成混合集落形成单位(CFU-Mix)的能力;FL、BM来源c-kit+细胞则能形成更多粒单系集落形成单位(CFU-GM)。以上结果表明,和FL、BM来源的c-kit+细胞相比,AGM区来源c-kit+细胞具有更强的体外增殖、多系分化潜能以及趋化迁移能力,在未来可能有着更广阔的应用前景。
- 周琨黄丽芳胡采红刘文励孙汉英
- 关键词：造血祖细胞造血发育主动脉-性腺-中肾区胎肝
- 免疫损伤介导的骨髓衰竭小鼠模型的建立被引量：4
- 2009年
- 目的对免疫损伤介导的再生障碍性贫血（再障）小鼠模型进行改良研究，为其发病机制和治疗提供研究平台。方法Balb／c小鼠（受鼠）经5．0Gy ^60Co叫射线照射后，输入5×10^6个DBA／2小鼠（供鼠）的淋巴结细胞，观察外周血细胞、骨髓组织切片、骨髓单个核细胞计数、血清IFN-γ水平和调节T细胞（Treg）等指标。结果照射和淋巴结细胞输入可迅速导致Balb／c小鼠外周血三系严重减少，在输入供鼠淋巴结细胞后第14天最低，第28天仍呈三系严重减少，无恢复迹象。第14天骨髓组织切片出现骨髓增生极度减低、造血细胞罕见、脂肪细胞填充等表现，至第28天均未出现改善。血清IFN-γ浓度于第6天[（170．0±17．0）pg／ml]明显升高，为正常水平[（27．7±7．1）pg／m1]的6．3倍，随后逐渐下降至正常；Treg数量先降低，后逐渐上升，第21天[（3．38±0．52）％]基本恢复正常水平[（4．04±0．44）％]；在第14天检测Foxp3，与正常对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论通过对受鼠进行放射性核素照射和供鼠淋巴结细胞输注，模型小鼠的各项检测指标均达到骨髓衰竭的诊断标准，符合骨髓衰竭的细胞免疫损伤的发病特点，可作为深入研究骨髓衰竭发病机制及治疗的小鼠模型。
- 黄丽芳周琨张娜罗莉郑邈周晟孙汉英刘文励
- 关键词：骨髓衰竭小鼠模型调节T细胞FOXP3
- Wnt、Notch信号参与造血微环境调控造血机制的研究
- 2009年
- 目的探讨造血发育过程中Wnt和Notch信号通路参与造血微环境调控造血的机制。方法磁珠分选法分离小鼠骨髓c—kit^＋造血干／祖细胞（HSPC）。贴壁培养法分离小鼠孕10．5d主动脉-中肾-肾上腺（AGM）区，孕12．5d、14．5d、16．5d胎肝以及骨髓来源的基质细胞。通过Transwell共培养以及流式细胞术计数．比较不同来源基质细胞支持HSPC增殖的能力。通过实时定量PCR和免疫荧光动态检测各发育阶段基质细胞中Wnt、Notch mRNA和蛋白的表达。结果体外培养7d，AGM区和胎肝基质细胞培养体系中c-kit^＋细胞数由0．4×10^5／孔分别扩增为（19．2±3．2）×10^5／孔和（26．8±5．4）×10^5／孔．明显高于骨髓基质细胞培养体系的（9．6±2．9）×10^5／孔（P〈0．05）；其中，AGM区和骨髓基质细胞培养体系中c—kit^＋细胞比例分别为（75．2±7．1）％和（74．1±6．2）％，明显高于胎肝基质细胞培养体系的（63．4±5．3）％（P〈0．05）=Wnt、Notch在各阶段基质细胞均有表达，Wnt在ACM区和胎肝基质细胞表达水平较高，Notch在AGM区及骨髓基质细胞表达水平较高（P〈0．05）、结论造血发育过程中，造血微环境通过Wnt与Notch信号通路协作、交替、整合，精密调控HSPC的发育．
- 周琨胡采红黄丽芳刘文励孙汉英
- 关键词：造血微环境造血干细胞造血调控
- γ射线对小鼠主动脉性腺中肾区基质细胞氨基肽酶N／CD13活性的影响被引量：1
- 2007年
- 目的探讨小鼠主动脉性腺中肾（AGM）区基质细胞氨基肽酶N／CD13（APN／CD13）的表达和放射损伤前后该酶活性的变化及意义。方法采用免疫组织化学染色、RT-PCR检测AGM区基质细胞APN／CD13的表达；^60Coγ射线8．0Gy照射细胞，在不同的时间点用分光光度计检测APN／CD13的酶活性。结果AGM区基质细胞APN／CD13呈强阳性表达；放射损伤后酶活性呈一过性降低，继而升高，4h达高峰，24—48h基本恢复至照射前水平。结论APN／CD13在AGM区基质细胞上呈强阳性表达；在放射损伤后酶活性增高，可能是促进造血功能恢复的一种代偿机制。
- 朱艳黄丽芳罗小华孙汉英冉丹张可杰郑邈周琨刘文励
- 关键词：基质细胞酶活性
- 外源性shh蛋白对c-kit^+造血祖细胞增殖分化作用研究
- 2010年
- 目的探讨sonic hedgehog(Shh)信号对小鼠造血祖细胞的扩增分化调控作用。方法取孕14.5天Balb/C小鼠,分离培养小鼠胎肝基质细胞作饲养层。免疫磁珠法分选小鼠骨髓来源c-kit+造血祖细胞,将分选的造血祖细胞在不同实验组培养条件下培养7d(a.对照组;b.Shh组;c.以胎肝基质细胞为饲养层的Transwell共培养组;d.Shh+Transwell共培养组)。通过绘制细胞生长曲线,免疫表型鉴定及功能分析,观察胎肝基质细胞饲养层以及Shh活性肽对细胞增殖、分化、集落形成的调控作用。结果和对照组相比,胎肝基质细胞可以明显促进造血祖细胞增殖(P<0.05);单纯的外源性Shh蛋白可以同时促进造血祖细胞的增殖和分化(P<0.05);在与胎肝基质细胞共培养体系中,外源性Shh蛋白可以明显地促进细胞增殖,经过体外培养7d后,细胞数达80×105,其中c-kit+细胞占(84±9.44)%,集落形成能力亦明显增强。结论 Shh蛋白参与调控造血祖细胞的增殖与分化,在胎肝基质细胞的支持下,Shh蛋白对小鼠c-kit+造血祖细胞的扩增有明显的促进作用,表明Shh蛋白与胎肝基质细胞存在着某种整合作用,这种作用在一定程度上调控着造血祖细胞的增殖与分化。
- 胡采红周琨孙汉英刘文励
- 关键词：造血微环境基质细胞胎肝
- IDO激活剂治疗再生障碍性贫血的实验研究
- 2008年
- 目的探讨IDO参与再生障碍性贫血(Aplastic Anemia,AA)的免疫系统异常活化的发病机制,观察IDO特异性激活剂——3,4-DAA治疗再障的疗效。方法建立免疫介导的再障小鼠模型,用反向高效液相色谱法检测色氨酸(Trp)和其代谢产物犬尿氨酸(Kyn)的血清水平,用RT-PCR方法检测骨髓单个核细胞IDO mRNA的表达水平,探讨IDO在疾病进程中的异常表现;给予3,4-DAA治疗后检测相应指标的变化。结果模型小鼠Trp浓度明显低于正常小鼠,Kyn浓度明显高于正常小鼠(P<0.05),模型小鼠的单个核细胞IDO mRNA表达水平较正常小鼠高(P<0.05);给予3,4-DAA治疗后上述指标差异更具统计学意义(P<0.01)。结论在再障发病过程中,色氨酸限速酶IDO的表达水平和活性均较正常明显增高,促进色氨酸向犬尿氨酸转化,色氨酸的不足导致细胞内的"色氨酸饥饿状态"从而抑制T细胞的活化和增殖,是机体免疫系统自我调节的一种重要保护机制,IDO激活剂理论上是一种治疗再障的新策略。
- 戴敏黄丽芳周琨孙汉英刘文励
- 关键词：再生障碍性贫血高效液相色谱色氨酸犬尿氨酸
- 色氨酸代谢在再生障碍性贫血中的实验研究被引量：1
- 2007年
- 目的 探讨色氨酸代谢参与再生障碍性贫血（Aplastic Anemia，AA）的免疫系统异常活化的发病机制。方法 建立免疫介导骨髓衰竭模型，用反向高效液相色谱法检测色氨酸（Trp）和其代谢产物犬尿氨酸（Kyn）的血清水平，以及Trp的限速酶——吲哚胺双加氧酶（IDO）活性，用RT—PCR方法检测骨髓单个核细胞IDOmRNA的表达水平，探讨色氨酸在疾病进程中的异常表现。结果 模型小鼠Trp浓度明显低于正常小鼠（P〈0．05），模型小鼠IDO活性明显高于正常小鼠（P〈0.05），模型小鼠的单个核细胞IDOmRNA表达水平较正常小鼠高（P〈0．05）。结论 免疫介导骨髓衰竭模型小鼠的色氨酸限速酶IDO的表达水平和活性均较正常小鼠高，免疫系统的异常活化导致必需氨基酸色氨酸的不足。
- 周琨孙汉英戴敏徐惠珍刘文励
- 关键词：获得性再生障碍性贫血色氨酸
- 再生障碍性贫血中色氨酸和犬尿氨酸的检测方法及意义被引量：1
- 2008年
- 目的:建立检测再生障碍性贫血(aplastic anemia,简称再障)血清中色氨酸(Trp)及其代谢产物犬尿氨酸(Kyn)水平的方法,探讨其与疾病之间的关系。方法:应用反向高效液相色谱法检测,以荧光检测器检测Trp,以紫外检测器检测Kyn的血清水平。结果:再障患者血清Trp浓度明显低于正常对照,Kyn浓度明显高于正常对照(P<0.05);再障动物模型结果与患者血清结果相同。结论:再障中吸哚胺-2,3-双加氧酶的活性较正常明显增高,促进色氨酸向犬尿氨酸转化,造成细胞内的"色氨酸饥饿状态"从而抑制T细胞的活化和增殖,可能是机体的一种自我保护机制。
- 戴敏周琨黄丽芳孙汉英刘文励
- 关键词：贫血高效液相色谱法色氨酸犬尿氨酸
