刘广锦
- 作品数：26 被引量：34H指数：4
- 供职机构：南京农业大学更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金国家自然科学基金江苏高校优势学科建设工程项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生理学更多>>
- 无乳链球菌dnaJ基因缺失株的构建及其致病性研究被引量：3
- 2019年
- 为研究dnaJ基因序列与细菌致病力的关系,本研究构建了dnaJ基因缺失株和互补株,并对其致病性进行验证。参照GenBank中无乳链球菌GD201008-001(登录号:NC_018646)目的基因序列分别设计引物,PCR克隆dnaJ基因上、下游同源臂基因序列,通过融合PCR将两个片段连接到一起,构建dnaJ基因上、下游同源臂融合片段,PCR克隆含有启动子序列的dnaJ基因。将dnaJ基因上、下游同源臂融合片段和含有启动子序列的dnaJ基因分别连接链球菌-大肠杆菌穿梭质粒pSET4s和pSET2,电转化GD201008-001感受态细胞,构建dnaJ基因缺失株ΔdnaJ和互补株CΔdnaJ。通过分析ΔdnaJ和CΔdnaJ的遗传稳定性与形态学变化对dnaJ上、下游基因转录的影响,以及生长速率和斑马鱼攻毒试验评价dnaJ基因对无乳链球菌毒力的影响。经PCR鉴定和测序证明,ΔdnaJ和CΔdnaJ构建成功;与野生株GD201008-001相比,ΔdnaJ和CΔdnaJ在细菌染色形态上均无明显差异,但ΔdnaJ在液体培养基中的生长速度明显减缓;dnaJ基因的缺失未对相邻基因的转录造成影响;ΔdnaJ对斑马鱼的毒力明显下降,对斑马鱼的LD 50为5.68×10 4 CFU,约是野生株的241倍。dnaJ基因对无乳链球菌的毒力有显著影响,本试验结果为进一步探究无乳链球菌dnaJ基因的功能提供了参考依据。
- 郭长明吴植吴双王永娟王安平刘广锦刘永杰朱善元
- 关键词：无乳链球菌基因缺失株毒力
- 正则乘子Hopf代数上Yetter-Drinfel'd模范畴中的自同构代数（英文）
- 2016年
- 本文研究了正则乘子Hopf代数上Yetter-Drinfel'd模范畴中自同构代数的问题.利用乘子Hopf代数以及同调代数理论中的方法,获得了Yetter-Drinfel'd模范畴中两个自同构代数是同构的结果,推广了Panaite等人在Hopf代数中的结果.
- 杨涛刘广锦周璇
- 应用iTRAQ定量蛋白质组学技术筛选无乳链球菌鱼源株与人源株差异表达蛋白被引量：3
- 2018年
- 以斑马鱼和巨噬细胞作为体内、外感染模型,比较无乳链球菌鱼源株GD201008-001与人源株A909的致病性差异,利用iTRAQ技术和质谱分析技术进行差异表达蛋白鉴定,以期为揭示无乳链球菌不同宿主来源株致病机制提供新思路。实验通过测定菌株GD201008-001、A909的斑马鱼半数致死量和巨噬细胞吞噬率,比较二者致病性差异;提取全菌蛋白,经iTRAQ试剂标记后进行质谱鉴定,质谱数据用软件Mascot 2.2和Proteome Discoverer 1.4进行查库(Uni Prot数据库)鉴定及定量分析,并对差异蛋白进行GO功能注释和KEGG通路分析。结果显示,GD201008-001毒力显著高于A909;通过iTRAQ分析两株菌差异表达蛋白,发现差异蛋白涉及的生物学功能较为广泛,在鉴定出的368个差异表达蛋白中,GD201008-001中上调表达蛋白193个(比值>1.5),下调表达蛋白175个(比值<0.667)。生物信息学分析预测这些蛋白主要涉及26个生物学功能,14个通路,推测Clp X、Glm S和Cps IVK可能在两株菌致病性差异中发挥重要作用。本研究为阐明无乳链球菌不同宿主来源株致病性差异奠定了基础。
- 郭长明袁橙武彩红朱善元刘广锦陆承平刘永杰
- 关键词：无乳链球菌ITRAQ蛋白质组学
- 利用16S-23S rDNA间隔区快速鉴定猪链球菌和马链球菌兽疫亚种被引量：2
- 2011年
- 利用16S-23S rDNA间隔区(ISR)长度和序列的多态性,结合16S rDNA和23S rDNA的保守性,分别在16S rDNA末端和23S rDNA前端保守区设计上下游引物,进行PCR扩增。结果为21株猪链球菌均扩增出长度约为1 200 bp的片段,8株马链球菌兽疫亚种均扩出约1 300 bp的片段,其他属菌株和阴性对照无结果。因此,由PCR产物长度的不同就可快速区分猪链球菌和马链球菌兽疫亚种,这种基于ISR的PCR技术为鉴别病原微生物提供了更加简捷的方式。对2株代表菌(HA9801,ATCC 35246)的16S-23S rDNA ISR进行测序发现,猪链球菌和马链球菌兽疫亚种的ISR差异主要表现为碱基的缺失。
- 刘广锦陈绵绵商可心范洁张炜姚火春陆承平
- 关键词：猪链球菌马链球菌兽疫亚种16S-23S聚合酶链式反应
- 利用16S-23S rDNA间隔区快速鉴定猪链球菌和马链球菌兽疫亚种
- 利用16S-23S rDNA间隔区(ISR)长度和序列的多态性,结合16S rDNA和23S rDNA的保守性,分别在16S rDNA末端和23S rDNA前端保守区设计上下游引物,进行PCR扩增.结果为21株猪链球菌均...
- 刘广锦陈绵绵商可心范洁张炜姚火春陆承平
- 关键词：猪链球菌聚合酶链式反应
- EDTA对鸭疫里氏杆菌外膜蛋白表达及免疫原性的影响被引量：1
- 2010年
- 用加入金属离子螯合剂EDTA的TSB(胰酪胨大豆肉汤)培养基,培养鸭疫里氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)Ⅰ型,将未加入EDTA的TSB培养的RAⅠ型菌株作对照。比较后发现,加入EDTA组的外膜蛋白(OMPs)的SDS-PAGE图谱发生改变,从34 ku^100 ku增加了多条蛋白条带,特别是39 ku,60 ku和110 ku蛋白浓度较大。电泳胶经Western-blot(康复血清作为一抗,自制酶标兔抗鸭为二抗),与对照组相比,实验组增加了39 ku条带。实验证明,加入金属离子螯合剂EDTA对外膜蛋白的表达和免疫原性均有影响。
- 张炜汤芳刘广锦鲁岩邵靓范红结陆承平
- 关键词：外膜蛋白EDTA
- 国内部分动物园与花鸟市场鹦鹉热衣原体病原学检测
- 2024年
- 为了解国内动物园与花鸟市场鸟群中鹦鹉热衣原体(Chlamydia psittaci,Cps)的流行现状,通过构建TaqMan荧光定量PCR方法,对江苏省和北京市3处采样点采集的168份禽鸟粪便样本进行了检测,并基于OmpA基因对阳性样本进行了基因序列分析。结果显示:在江苏省1处花鸟市场检出31份Cps阳性,个体阳性率为41.3%(31/75),在其他2处动物园采样点未检出阳性;阳性样品来自虎皮鹦鹉(23份)、牡丹鹦鹉(5份)、玄凤鹦鹉(2份)和珍珠鸟(1份)。在阳性样本中,共扩增出18个OmpA基因片段,其中16份样本的基因序列相同,与另外2份阳性样本序列不在同一分支,但所有阳性样本均属于基因A型。结果表明,花鸟市场存在较高的Cps流行风险,感染源较为集中。结果提示,各地应着重加强花鸟市场Cps流行的防控,严格落实相关监管措施,加强检疫监管,从而降低Cps传播率并保障公共卫生安全。
- 刘心仪包银莉张释丹陆浩天文洪然陈柳蓉张钲浩李金飞陈蓉刘燕代蕾刘广锦
- 关键词：鹦鹉热衣原体核酸检测
- 前噬菌体lamdaSa04对鱼源无乳链球菌环境适应性及致病性的影响被引量：1
- 2022年
- [目的]本文旨在调查前噬菌体lamdaSa04对鱼源无乳链球菌GD201008-001环境适应性和毒力的影响。[方法]利用同源重组技术构建前噬菌体lamdaSa04基因缺失株,比较缺失株与野生株在体外生长、抗环境应激、抗巨噬细胞吞噬、胞内存活以及感染小鼠的存活率和组织细菌载量等方面的差异。[结果]lamdaSa04基因簇缺失不影响无乳链球菌GD201008-001的体外生长能力,但生物被膜形成能力下调38.57%;在10和20 mmol·L^(-1)H_(2)O_(2)的强氧化应激条件下,缺失株存活率较野生株分别下调22.86%及42.01%;小鼠巨噬细胞RAW264.7对缺失株的吞噬率比野生株上调76.12%。模拟巨噬细胞的内环境,在强氧化、一氧化氮、溶菌酶、强酸等多因素结合的应激条件下,检测菌株的存活率,结果表明lamdaSa04的存在有助于无乳链球菌在氧化应激和酸应激条件下的存活。动物试验结果显示,缺失lamdaSa04基因对小鼠致死率及组织细菌载量无明显影响。[结论]前噬菌体lamdaSa04的存在对无乳链球菌的环境适应性有显著影响,但并不影响细菌的致病性。
- 姬姝婷曹青聂蒙董雨豪刘广锦刘永杰
- 关键词：无乳链球菌前噬菌体环境适应性
- 链球菌引发宿主中毒性休克综合症相关机制的研究进展被引量：1
- 2021年
- 某些链球菌在感染过程中,会引发宿主系统性的细胞因子风暴,病程进展迅速,致死率高,即发生链球菌性中毒性休克综合症(streptococcal toxic shock syndrome,STSS)。最初认为STSS由链球菌的超抗原(superantigen,SAg)引发,但近年来也有不依赖超抗原的STSS病例报道,致病机制较为复杂。本文主要对不依赖链球菌超抗原引发STSS的机制研究进行介绍,包括链球菌感染后宿主细胞中炎症信号通路的激活、炎性小体和细胞焦亡的发生、促炎细胞因子的释放以及细胞因子风暴等。同时,对研究链球菌STSS常采用的细胞和动物模型进行总结,旨在为实验室开展STSS的机制研究奠定理论基础。
- 张郁敏马家乐赵焱刘广锦
- 关键词：链球菌炎症信号通路促炎细胞因子
- 无乳链球菌鱼源株10kb基因序列对细菌致病力的影响被引量：4
- 2016年
- 【目的】在前期比较基因组学分析中,我们发现中国无乳链球菌鱼源株GD201008-001基因组中有一段10 kb基因序列,内含11个未知功能的开放阅读框。为了研究该段基因序列与细菌的致病力的关系,本研究将这段基因进行了全段缺失。【方法】运用链球菌-大肠杆菌穿梭质粒p SET4s,构建了10 kb基因缺失株(Δ10 kb),并通过生物学性状的比较,细胞粘附试验,斑马鱼攻毒试验和缺失前后毒力相关基因转录水平的检测,评价该序列对无乳链球菌毒力的影响。【结果】经测序证明缺失株Δ10 kb构建成功,与亲本株GD201008-001相比较,缺失株Δ10 kb在细菌染色形态、对HEp-2细胞的粘附能力无明显差异,但在培养液中的生长速度略慢;缺失株Δ10 kb对斑马鱼的毒力明显增强,LD_(50)有极其显著的差异(P<0.001);编码菌毛骨架蛋白2b的基因(PI-2b)和唾液酸酶基因(neul)在缺失株中的转录水平明显上升。【结论】该序列对无乳链球菌GD201008-001的毒力有显著的影响,可能调控某些毒力基因的转录表达,使细菌的毒力减弱。
- 刘广锦朱洁莲石紫薇丁铭王茹怡姚火春陆承平徐跑
- 关键词：无乳链球菌基因缺失毒力
