刘中来
- 作品数：11 被引量：21H指数：3
- 供职机构：浙江省农业科学院更多>>
- 发文基金：浙江省科技厅公益技术研究农业项目国家科技重大专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 转mCherry基因水稻的遗传分析及T-DNA整合位点的研究被引量：8
- 2012年
- 为了建立转基因水稻的高通量遗传分析系统,本研究以粳稻成熟胚诱导的愈伤组织为受体材料,潮霉素磷酸转移酶(HPT)为抗性筛选标记,通过农杆菌介导的方法将红色荧光蛋白基因mCherry导入水稻。在水稻转化愈伤组织、转化植株(T0)和转基因后代(T1)均检测到红色荧光,证实mCherry在转基因水稻中稳定表达。139个独立转化株系的遗传分析表明,mCherry在转基因后代表现多种遗传模式,54%的转基因株系呈单位点遗传。TAIL-PCR进一步验证转基因整合到水稻基因组。根据T-DNA整合位点DNA序列分析结果,T-DNA左边界发生碱基缺失、增加和替换,右边界只发生碱基缺失,说明左边界比右边界有更多的碱基变异类型。此外,对T2代植株mCherry和HPT的转录水平进行实时定量逆转录PCR分析,结果表明,mCherry和HPT转录水平因T-DNA在水稻基因组中的整合位置而变化,表现位置效应。本研究在mCherry荧光蛋白和其它相关方法的基础上,为转基因水稻遗传及分子分析建立了一个高效的流程体系。
- 李亚丽刘中来周洁徐国娟瞿绍洪
- 关键词：水稻MCHERRY转基因T-DNA整合位点
- 一种转化水稻抗病基因并获得无选择标记转基因后代的方法
- 本发明涉及一种转化水稻抗病基因并获得无选择标记转基因后代的方法，首先，将绿色荧光蛋白(GFP)与潮霉素磷酸转移酶(HPT)克隆于标记基因载体，目的基因置于另一T-DNA载体，携带标记基因载体的农杆菌菌株与携带目的基因载体...
- 瞿绍洪李军王歆赵建华何海燕刘中来
- 文献传递
- 共转化水稻植株T-DNA共整合结构的分子分析被引量：1
- 2013年
- 为研究共转化水稻的T-DNA共整合结构，本研究利用分别含有HPT、GFP和mCherry基因的T—DNA载体共转化水稻，从共转化植株获得了22个由两种T—DNA共整合形成的串联结构和25个关于相同T—DNA的多拷贝结构。序列分析结果表明，相邻T-DNA通过LRRL、RLLR和LRLR模式相互连接，由RB参与形成的T-DNA连接区均发生RB序列的完全缺失，在LB参与的T-DNA连接区，LB发生不同数目的碱基缺失或其3＇末端的1个C碱基发生C→T颠换，因而使T-DNA连接区表现多种变异类型。此外，伴随着RB或LB边界的完全缺失，其边界内侧序列也缺失1-643bp。在共转化水稻植株的T-DNA连接区不存在拟南芥相关报道所述的填充DNA序列。研究结果为深入解析禾谷类植物T—DNA共整合的分子机理奠定了重要基础。
- 赵建华李亚丽刘中来瞿绍洪
- 关键词：共转化转基因水稻
- 一种转化水稻抗病基因并获得无选择标记转基因后代的方法
- 本发明涉及一种转化水稻抗病基因并获得无选择标记转基因后代的方法，首先，将绿色荧光蛋白(GFP)与潮霉素磷酸转移酶(HPT)克隆于标记基因载体，目的基因置于另一T-DNA载体，携带标记基因载体的农杆菌菌株与携带目的基因载体...
- 瞿绍洪李军王歆赵建华何海燕刘中来
- 利用共转化方法创制携带Pi9抗稻瘟病基因的无选择标记转基因水稻被引量：1
- 2020年
- 水稻稻瘟病是由子囊菌(Magnaporthe oryzae)引起的水稻灾害性病害。培育抗病品种是防治稻瘟病最经济有效的措施之一。水稻Pi9抗稻瘟病基因来源于小粒野生稻并已被克隆和应用于转基因育种。为了提高无选择标记转基因植株的选择效率,将绿色荧光蛋白(GFP)用作可视遗传标记,对双菌株共转化系统进行改良:目的基因载体携带Pi9抗稻瘟病基因;标记基因载体用潮霉素磷酸转移酶(HPT)作为植物转化选择标记,用GFP作为负选择标记,筛除标记基因分离植株。两种载体的农杆菌转化株混合,分别与水稻品种‘浙恢414’、‘浙粳22’、‘浙11B’、‘日本晴’、‘空育131’和‘粤泰B’的愈伤组织共培养,然后从5%~38.3%的起始愈伤组织筛选获得了转化愈伤组织(HPT+GFP+)。对T0植株进行Pi9基因PCR检测,11.8%~77.8%的T0植株为共转化植株(HPT+GFP+Pi9+)。对共转化植株T1代进行绿色荧光检测,筛选阴性植株(GFP-),再通过PCR筛选Pi9+植株。根据13个T1群体的研究结果,61%的共转化植株在T1代分离出无选择标记转基因植株(HPT-GFP-Pi9+)。转Pi9的无选择标记植株和后代株系对水稻稻瘟病呈抗病反应。因此,本研究通过GFP标记提高了双菌株共转化系统的选择效率,转Pi9的无选择标记水稻株系为水稻抗稻瘟病育种提供了有用的遗传资源。
- 潘龙玉李军王歆刘中来赵建华刘雄伦戴良英毛雪琴瞿绍洪
- 关键词：共转化
- 一种转座因子载体及获得其无选择标记转基因后代的方法
- 本发明涉及一种转座因子载体及获得其无选择标记转基因后代的方法，该载体通过以下步骤构建：1)将绿色荧光蛋白基因(GFP)、红色荧光蛋白基因(mCherry)潮霉素抗性选择标记基因(HPT)、来源于玉米的Ac转座酶基因(Ac...
- 瞿绍洪李莘潘龙玉毕冬玲李利华田旭丹王岚岚龙文莉许赵蒙刘中来赵建华邹小维高晓庆杨海河曲海艳
- 文献传递
- 剔除转基因植物中选择标记的研究进展被引量：2
- 2012年
- 目前无选择标记技术已经成为基因工程中安全转基因研究方面的一个重要内容,转基因植物中标记基因的去除,一方面有利于消除公众对转基因的恐惧心理,另一方面有利于科学家向已转化植物中重复转入外源目标基因。文章对近几年出现的几种无选择标记技术作一综述,并对该技术的发展进行了展望。
- 何海燕周洁李亚丽赵建华刘中来
- 关键词：转基因植物无选择标记位点特异性重组
- 利用荧光蛋白在水稻中建立二元转座因子标签系统
- 随着水稻基因组测序的完成，水稻功能基因组学已成为水稻研究的一个重要领域。突变体研究方法是发现新基因和揭示基因功能的重要途径之一。转座子因子是构建插入突变体较为理想的方法。本研究利用GFP和RFP双荧光蛋白开发的Ac/Ds...
- 刘中来
- 关键词：水稻荧光蛋白标签系统
- 基于细胞学和DNA序列的苎麻与其野生近缘类群系统关系研究被引量：7
- 2009年
- 为了了解苎麻与野生近缘种的系统学关系,更有效利用野生苎麻资源,通过细胞学观察和分子标记证据,对中国苎麻与其24个野生近缘类群进行了系统学分析。细胞学结果表明,苎麻间期核形态属于田中分类体系的前染色体型,而其野生近缘种分别属于前染色体型和分散型;苎麻和23个野生近缘物种(其中15个类群的染色体数目为首次报道)中,19个为二倍体(2n=28),而大叶苎麻组3个类群为三倍体(2n=42),1个为四倍体(2n=56),1个为五倍体(2n=70)。ITS序列和trnL-F序列分析表明,苎麻属可分成A(含A1和A2亚分支)、B(含B1和B2亚分支)和C3个基本分支。根据分析结果本文提出苎麻属的两条演化路线:(1)前染色体型进化路线A1→A2,即腋球苎麻组→苎麻组;(2)分散型进化路线B→C,即腋球苎麻组→帚序苎麻组→序叶苎麻组→大叶苎麻组。
- 廖亮李同建刘中来邓辉胜徐玲玲潘其辉赖占均石庆华
- 关键词：苎麻属染色体数目TRNL-F
- 利用RFP标记进行水稻籼粳杂种偏分离的遗传分析被引量：3
- 2012年
- 为了研究水稻籼粳杂种偏分离的遗传基础,用转化红色荧光蛋白(RFP)的7个粳稻株系与籼稻杂交,以整合在不同基因组位点的RFP为可视遗传标记,对F1花粉及F2植株进行遗传分析。根据‘7F5’转基因系的研究结果,在粳稻‘日本晴’和籼稻‘9311’杂交的遗传背景中,水稻基因组chr02:33465170位置附近存在一个花粉偏分离位点。‘9A2’转基因系组配的籼粳杂种产生1∶1(RFP+∶RFP-)比例的花粉,并且其F2植株群体发生偏分离,说明相应RFP位点(chr04:29587748)附近有一个控制F2植株偏分离的连锁位点,该位点的遗传机制与F1的花粉比例无关。RFP标记提高了籼粳杂种花粉及后代植株的研究效率,为探索偏分离遗传机理提供了新的研究手段。
- 刘中来李军瞿绍洪
- 关键词：红色荧光蛋白转基因水稻籼粳杂种偏分离
