冯旭飞
- 作品数：11 被引量：79H指数：6
- 供职机构：西南民族大学生命科学与技术学院更多>>
- 发文基金：国家级星火计划国家自然科学基金四川省科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 绵羊肺炎支原体p128基因序列分析及原核表达被引量：6
- 2015年
- 为进一步探究绵羊肺炎支原体P128蛋白的相关功能,在进行生物信息学分析的基础上,对编码p128的部分基因片段进行了PCR扩增、克隆和原核表达,并采用Western-blot方法对其免疫原性进行了分析。结果显示,p128基因与猪肺炎支原体黏附素基因p146高度同源;克隆基因在大肠杆菌Rosetta(DE3)中成功获得表达,重组蛋白以包涵体的形式存在;经纯化的重组蛋白与抗绵羊肺炎支原体全菌血清发生结合反应,表明P128蛋白是良好的免疫原。研究结果为进一步分析其功能及绵羊肺炎支原体血清学诊断技术的建立提供了有用的信息。
- 冯旭飞刀筱芳张贤宇李定霏杨发龙
- 关键词：绵羊肺炎支原体原核表达
- 山羊支原体山羊肺炎亚种和多杀性巴氏杆菌双重PCR检测方法的建立被引量：3
- 2014年
- 为建立一种能够同时检测山羊支原体山羊肺炎亚种和多杀性巴氏杆菌的双重PCR方法,本研究采用2对特异性引物,对退火温度和引物浓度比进行了优化,成功建立了一种能同时检测上述两种病原的双重PCR方法。结果显示,该方法具有很好的特异性,仅对山羊支原体山羊肺炎亚种和多杀性巴氏杆菌有扩增,而对其他常见的羊呼吸道病原无扩增;该方法对两种病原的检测限分别为32pg和50pg,与单独PCR相同;26份临床样品中山羊支原体山羊肺炎亚种的检出率为23.1%,多杀性巴氏杆菌的检出率为26.9%。所建立的双重PCR具有特异性好、灵敏度高的特点,为临床上这两种病原感染的快速诊断和流行病学调查等提供了更为有用的手段。
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- 关键词：山羊支原体山羊肺炎亚种多杀性巴氏杆菌双重PCR
- 绵羊肺炎支原体和溶血性曼氏杆菌双重PCR检测方法的建立及应用被引量：8
- 2014年
- 为建立同时检测绵羊肺炎支原体(MO)和溶血性曼氏杆菌(Mh)的方法,本研究根据MO的hsp70基因和Mh的gcp基因分别设计引物,建立了同时检测这两种病原的双重PCR检测方法。实验结果显示该方法能够特异性的扩增MO(135 bp)和Mh(227 bp)DNA片段,其最低检出量分别为2.06×103拷贝/μL和6.37 cfu/mL,与单一PCR相同。该方法对常见的致病菌无交叉反应。对临床样本的检测结果显示MO和Mh的检出率分别为56.25%和52.50%,与单独PCR符合率为100%。研究结果表明,本研究所建立的双重PCR检测方法具有特异性强、敏感性高等特点,为临床上MO和Mh混合感染的快速检测、鉴定以及流行病学调查提供了方便、快捷、准确的方法。
- 冯旭飞王远微李定霏杨发龙
- 关键词：绵羊肺炎支原体双重PCR
- 绵羊肺脏中溶血性曼氏杆菌的分离鉴定及其药物敏感性分析被引量：20
- 2014年
- 为了对引起绵羊肺炎的病原进行分离、鉴定和耐药性分析,本研究通过无菌采集绵羊肺脏并对细菌进行分离纯化、生化试验和PCR鉴定,然后对所得到的溶血性曼氏杆菌分离株进行药物敏感性研究。结果显示,分离纯化得到的细菌为革兰氏阴性短杆菌,具有弱溶血性,经生化试验和PCR鉴定为溶血性曼氏杆菌;耐药性分析显示该菌株对恩诺沙星、庆大霉素、四环素等大部分药物敏感。本研究为绵羊溶血性曼氏杆菌感染的有效防制提供有用的信息和数据。
- 冯旭飞刀筱芳王志敏汤承李定霏杨发龙
- 关键词：绵羊耐药性
- 绵羊肺炎支原体P113蛋白N端原核表达及其抗原性分析被引量：10
- 2013年
- 绵羊肺炎支原体可感染绵羊及山羊,并导致非典型肺炎的发生。P113蛋白是绵羊肺炎支原体推测的粘附素,为进一步研究P113蛋白的功能,本试验对其N端1～231位氨基酸的片段进行了原核表达,并采用Western blot方法对P113蛋白免疫原性进行了分析。结果显示,重组蛋白以包涵体的形式在Rosetta(DE3)工程菌中成功获得表达;经纯化的重组蛋白与抗绵羊肺炎支原体全菌血清发生特异性结合反应,表明P113蛋白是良好的免疫原。
- 张贤宇杨发龙冯旭飞王成龙
- 关键词：绵羊肺炎支原体原核表达抗原性
- 藏绵羊肺脏中链球菌的分离鉴定及耐药性分析被引量：2
- 2014年
- 本试验通过无菌采集西藏地区绵羊肺脏,然后进行细菌分离、纯化及PCR鉴定;同时,对分离的链球菌菌株进行药物敏感性研究,以期为生产实践中对该病原的防制提供参考信息。结果显示,纯化所得到的细菌呈革兰氏阳性链球状,经PCR、克隆、测序鉴定为链球菌;药敏试验结果显示分离菌株对复方新诺明、恩诺沙星、庆大霉素及四环素等大部分药物敏感。本研究为西藏地区绵羊链球菌病的有效防制提供参考。
- 冯旭飞王志敏吴禹熹潘玉琨党斌杨发龙
- 关键词：链球菌耐药性
- 绵羊肺炎支原体和多杀性巴氏杆菌双重PCR检测方法的建立及应用被引量：11
- 2013年
- 根据绵羊肺炎支原体hsp70基因和多杀性巴氏杆菌sp6基因分别设计引物,建立了绵羊肺炎支原体和多杀性巴氏杆菌的双重PCR检测方法,优化条件后进行特异性和敏感性评价,并对160份临床样本进行了检测。结果显示,绵羊肺炎支原体和多杀性巴氏杆菌引物的最佳终浓度分别为30pmol/L和10pmol/L。该方法的特异性较好,对其他无关病原不检出。对绵羊肺炎支原体和多杀性巴氏杆菌的检测下限分别为4.4pg和22pg,与独立PCR的敏感性相同。临床样本的检测结果显示,该方法对绵羊肺炎支原体和多杀性巴氏杆菌的检出率分别为50.6%和47.5%。结果表明,本研究建立的双重PCR方法具有特异性好、敏感性高等特点,为临床上绵羊肺炎支原体和多杀性巴氏杆菌混合感染的快速检测、鉴定以及流行病学调查提供了有用的工具。
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- 关键词：绵羊肺炎支原体多杀性巴氏杆菌双重PCR
- 溶血性曼氏杆菌和多杀性巴氏杆菌双重PCR检测方法的建立及应用被引量：23
- 2014年
- 本研究旨在建立溶血性曼氏杆菌与多杀性巴氏杆菌的双重PCR检测方法,从而为临床上同时检测这两种病原的感染提供一种更加方便、快捷、准确的工具。根据溶血性曼氏杆菌lkt基因和多杀性巴氏杆菌sp6基因分别设计引物,优化条件后进行特异性和敏感性的评价,并对180份临床样本进行了检测。结果显示,溶血性曼氏杆菌和多杀性巴氏杆菌引物的最佳终浓度分别为10和20pmol/L。该方法的特异性较好,对其他无关病原不检出。对溶血性曼氏杆菌和多杀性巴氏杆菌的检测限分别为56和22pg,与独立PCR相同。该方法对临床样本的检测结果表明,溶血性曼氏杆菌和多杀性巴氏杆菌的检出率分别为51.67%和47.78%。研究结果表明,本研究建立的双重PCR诊断技术具有特异性好、敏感度高等特点,为临床上溶血性曼氏杆菌和多杀性巴氏杆菌的快速检测、鉴定以及混合感染的流行病学调查提供了有用的工具。
- 冯旭飞刀筱芳李定菲汤承王远微杨发龙
- 关键词：多杀性巴氏杆菌双重PCR
- 绵羊肺炎支原体P113蛋白单克隆抗体的制备及其在免疫荧光检测中的应用研究被引量：2
- 2019年
- P113蛋白是绵羊肺炎支原体重要的免疫原。为了制备针对P113蛋白的单克隆抗体,本研究以原核表达的重组P113蛋白免疫小鼠,制备了1株P113蛋白的特异性单克隆抗体C426,纯化后用异硫氰酸荧光素标记单克隆抗体,并建立了绵羊肺炎支原体的免疫荧光检测技术。结果显示,该株单克隆抗体的ELISA效价为1∶128 000,亚型为IgG2b,轻链类型为κ型,并具有良好的特异性。所建立的免疫荧光检测方法特异性强、灵敏度高,其对绵羊肺炎支原体培养物的检测下限为100 CCU/m L。该方法可以从感染动物的鼻拭子样品或肺组织中成功检测到绵羊肺炎支原体,与PCR方法的阳性符合率为86.25%,明显高于支原体分离培养的方法。本研究制备的P113蛋白单克隆抗体以及免疫荧光技术不仅为绵羊肺炎支原体感染的诊断提供了新的手段,同时为进一步研究P113的功能提供了良好的工具。
- 李垚刀筱芳冯旭飞张斯旂马媛杨发龙
- 关键词：绵羊肺炎支原体单克隆抗体
- 基于p113基因的绵羊肺炎支原体PCR检测方法的建立及应用被引量：7
- 2013年
- 为建立一种特异、敏感的绵羊肺炎支原体PCR检测技术,根据绵羊肺炎支原体p113基因设计引物,并对其特异性进行了评价,同时,对所建立的PCR方法的敏感性和临床样本中绵羊肺炎支原体的检出率进行了分析,并与现有的基于16SrRNA的PCR方法进行了比较。结果显示,该方法能特异性扩增绵羊肺炎支原体参考菌株Y-98及临床分离株,对其他羊的致病性支原体和无关病原不检出;检测灵敏性为44fg,为现有的基于16SrRNA基因的PCR技术的1 000倍;对临床采集的肺组织样本和鼻腔拭子中绵羊肺炎支原体的检出率明显高于基于16SrRNA的PCR方法。研究结果表明,所建立的基于p113基因的PCR技术具有特异、敏感等特点,为绵羊肺炎支原体的检测、鉴定以及流行病学调查提供了有用的工具。
- 冯旭飞张贤宇王成龙杨发龙
- 关键词：绵羊肺炎支原体聚合酶链反应
