黄洁
- 作品数：6 被引量：10H指数：2
- 供职机构：四川大学华西公共卫生学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 大豆异黄酮对大鼠睾丸支持细胞的影响被引量：6
- 2014年
- 目的:研究大豆异黄酮对体外培养的大鼠睾丸支持细胞(sertoli cells,SCs)增殖以及卵泡雌激素受体(folliclestimulating hormone receptor,FSHR)、抑制素α亚基(inhibinα,INHα)、抑制素βB亚基(inhibinβB,INHβB)、雄激素结合蛋白(androgen binding protein,ABP)、转铁蛋白(transferrin,Tf)和波形蛋白(vimentin)mRNA水平的影响。方法:体外培养大鼠SCs,用0.03,0.3,3及30μmol/L的大豆黄酮(daidzein,Dai)和0.05,0.5,5及50μmol/L的染料木黄酮(genistein,Gen)处理细胞,MTT检测细胞增殖,实时荧光定量PCR检测FSHR,INHα,INHβB,ABP,Tf和vimentin mRNA的相对表达量。结果:与对照组相比,其余各组细胞增殖和INHβB,ABP mRNA相对表达量差异均无统计学意义(P>0.05),Dai(0.3及3μmol/L)和Gen(0.05μmol/L)组INHαmRNA表达增加,Dai(30μmol/L)和Gen所有浓度组的FSHR mRNA表达下降,Dai(30μmol/L)和Gen(5μmol/L和50μmol/L)组Tf mRNA表达下降,Dai(3μmol/L及30μmol/L)和Gen(50μmol/L)组vimentin mRNA表达下降。结论:大豆异黄酮可能通过抑制SCs重要功能蛋白的mRNA转录而影响其功能发挥,从而对雄性生殖系统产生负面影响。
- 印德娇朱彦锋刘林夕徐华黄洁李云
- 关键词：大豆黄酮染料木黄酮支持细胞实时荧光定量PCR
- 小鼠睾丸体外培养模型研究邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯对睾酮合成及机制的影响被引量：1
- 2013年
- 目的探讨睾丸体外培养模型下邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)暴露对小鼠睾丸睾酮合成及基因表达的影响。方法用浸浴式一次性通气旋转装置体外培养小鼠睾丸组织。实验分为二甲基亚砜(DMSO)溶剂对照组和4个DEHP剂量染毒组(终浓度0.1、1.0、10.0、100.0μmol/L)。分别培养24、48、72h,每24h通气一次。放射免疫法测定收集培养基中睾酮水平;Elisa法测定收集培养基中抑制素基因β_B基因(INHBβ)水平;实时荧光定量(QT)-PCR检测睾丸组织相关基因表达水平;HE染色观察睾丸组织病理学变化;免疫组化法检测睾丸组织相关蛋白表达。结果与DMSO溶剂对照组相比,DEHP一定浓度范围内,可使睾酮合成增加,但在DEHP100.0μmol/L染毒48、72h,睾酮合成开始减少。Elisa测定INHBβ在DEHP 0.1μmol/L、1.0μmol/L染毒组合成增加,从DEHP 10.0μmol/L开始合成减少。QT-PCR检测结果显示,与DMSO溶剂对照组相比,3β羟类固醇脱氢酶(3β-HSD)、抗细胞色素P450 17α羟化酶(P450c17)、细胞色素P450侧链裂解酶(P450Scc)、波形蛋白(vimentin)mRNA表达下降,尤其是DEHP 100.0μmol/L剂量组(P<0.05),INHBβmRNA表达无显著变化。HE染色,各组睾丸组织未观察到明显病理学改变。免疫组化检测结果显示,与DMSO溶剂对照组相比,蛋白3β-HSD、P450c17、P450Scc表达增强,vimentin表达减弱,尤其是DEHP 10.0μmol/L、100.0μmol/L两个剂量染毒组。结论 DEHP暴露对体外培养睾丸的睾酮合成有影响,其机制可能由于其影响了相关功能基因表达,进而对睾酮合成产生正负调控两种作用。
- 徐华黄洁李敏高志斌朱彦锋李云
- 关键词：器官培养邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯乳鼠睾丸实时荧光定量PCR
- 雌激素受体亚型介导的荧光素酶报告基因试验方法的建立及应用被引量：1
- 2015年
- 目的建立人源性雌激素受体(hERα/β)介导的荧光素酶报告基因试验方法,比较不同雌激素受体亚型介导的报告基因试验的反应性和灵敏度,为检测内分泌干扰物拟雌激素活性提供研究工具。方法以恒河猴肾细胞(LLC-MK2)为转染细胞,以萤火虫荧光素酶基因(Luc)为报告基因,利用瞬时转染的方法,将表达hERα/hERβ的质粒与重组Luc报告基因质粒pERE-minP-Luc2P、内对照质粒pGL4.74共转染LLC-MK2细胞,建立由hERα/β介导的Luc报告基因试验方法。以雌二醇(E2)、己烯雌酚(DES)作为阳性受试物,以10-5 mol/L雌激素拮抗剂(ICI 182,780)和不同浓度的E2共同染毒,观察Luc表达的变化。用双酚A(BPA)和染料木黄酮(GS)对方法的有效性进行检验并比较雌激素受体两亚型反应性、灵敏度和特异性。结果 hERα报告基因系统对E2的最低检测限为1.9×10-11 mol/L,在10-8 mol/L处获得最高诱导倍数,是对照组的30.7倍。hERβ报告基因系统对E2的最低检测限为2.2×10-11 mol/L,在10-8 mol/L处获得最高诱导倍数,是对照组的14.4倍。ICI 182,780在10-5 mol/L浓度下能显著抑制两个报告基因系统E2的雌激素活性。未转染受体表达载体hER-pcDNA3.1的LLC-MK2细胞用不同浓度E2诱导,两个报告基因系统均与E2无明显反应。BPA和GS在以上两个不同的报告基因系统中均能诱导Luc表达,但同一受试物在不同雌激素亚型介导的报告基因系统中表达倍数不同。结论本研究建立ER不同亚型的报告基因试验有较高的灵敏度和重复性。hERα介导的报告基因试验灵敏度高于hERβ,在hERα系统中BPA雌激素活性强于GS,在hERβ系统中GS雌激素活性强于BPA。
- 刘杨黄小明曲绍娟黄洁刘运夏钟灵毓陈奕李云
- 关键词：内分泌干扰物雌激素受体
- 用小鼠睾丸体外培养模型研究邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)对睾酮合成的影响及机制
- 目的：利用睾丸体外培养方法探讨邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)暴露对小鼠睾丸睾酮合成及基因表达的影响,探讨相关的分子机制.方法：用浸浴式一次性通气旋转装置体外培养小鼠睾丸.实验共分1个DMSO溶剂对照组和0.1...
- 徐华黄洁李敏高志斌朱彦锋李云
- 关键词：器官培养邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯乳鼠睾丸
- 双酚A对体外培养小鼠睾丸睾酮合成的影响及机制被引量：2
- 2013年
- 目的探讨睾丸体外培养模型下双酚A(BPA)暴露对小鼠睾丸睾酮合成及基因表达的影响。方法采用睾丸器官体外培养方法,将睾丸随机分为DMSO溶剂对照组和4个BPA剂量染毒组(终浓度为10-7、10-6、10-5和10-4mol/L)。分别培养24、48和72h,每24h通气一次。HE染色光镜下观察睾丸组织形态学变化,放射免疫法检测培养液睾酮浓度,免疫组化法检测睾丸组织相关蛋白表达。实时荧光定量PCR检测睾丸组织相关基因表达水平。结果 10-4mol/L剂量组支持细胞数目减少,部分间质细胞核固缩或呈絮状改变;随着时间的延长睾酮分泌逐渐减少,与DMSO对照组相比,10-5mol/L剂量组在48h时睾酮合成增加(P<0.05),其余各剂量组睾酮分泌降低,以10-4mol/L剂量组较明显(P<0.01);睾酮合成相关酶3β-羟基类固醇脱氢酶(3βHSD)、胆固醇侧链裂解酶(P450scc)、细胞色素P45017a羟化酶(P450c17)及波形蛋白(Vimentin)的基因及蛋白表达水平下降。结论 BPA能通过抑制3βHSD、P450scc、P450c17及Vimentin等相关酶的表达,干扰间质细胞睾酮的合成。
- 黄洁徐华高志斌李敏朱彦锋李云
- 关键词：双酚A睾丸睾酮
- 双酚A对体外培养小鼠睾丸睾酮合成的影响及机制
- 目的：建立小鼠睾丸器官体外培养模型,观察双酚A(bisphenol A,BPA)对小鼠睾酮合成的影响以及3β-羟基类固醇脱氢酶(3βHSD)、胆固醇侧链裂解酶(P450scc)、细胞色素P45017a羟化酶(P450c1...
- 黄洁徐华高志斌李敏朱彦峰李云
- 关键词：双酚A睾酮
