韦艳
- 作品数：10 被引量：4H指数：1
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所病毒基因工程国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 登革2型病毒ZS01／01株E蛋白在真核细胞中的分泌表达研究被引量：1
- 2011年
- 目的对登革2型病毒（DENV-2）ZSO1／01株E蛋白在哺乳动物细胞及昆虫细胞中的分泌表达进行研究。方法RT．PCR扩增DENV-2prM／E基因，通过融合PCR在prM基因前添加来自乙型脑炎病毒的信号肽序列，并将E基因羧基末端20％区域缺失或替换为乙型脑炎病毒SA14-2株E基因相应序列，将上述基因元件分别克隆人哺乳动物细胞表达载体pcDNA5／FRT及昆虫细胞表达载体pAcUW51-M中，将重组质粒转染293T细胞或Sf9细胞，利用间接免疫荧光（Immunofluoreseence assay，IFA）及Western Blot检测E蛋白的表达与分泌。结果各重组质粒分别转染293T细胞或Sit）细胞后，E蛋白在细胞内均有效表达，而仅有携带乙脑信号肽且缺失或替换E基因羧基末端20％区域的重组质粒转染293T细胞后，上清中可检测到明显的E蛋白分泌。结论信号肽及E基因羧基末端20％区域对登革病毒E蛋白的分泌至关重要，宿主细胞对其亦有一定影响。
- 张硕顾雯李川苗芳陆鹏曲靖韦艳张全福刘琴芝李建东梁米芳李德新
- 关键词：登革热病毒
- 乙脑/登革嵌合病毒及其应用
- 本发明提供了一种乙脑/登革嵌合病毒，其是将乙脑cDNA克隆中的prM/E基因替换为登革病毒2型的prM/E基因获得。本发明嵌合病毒经IFA及Western blot证实能够表达登革病毒的E蛋白，并且能够在C6/36细胞中...
- 李德新韦艳梁米芳李川王晓芳
- 文献传递
- 基于荧光微球的病毒性出血热IgM抗体检测方法的建立
- 2009年
- 目的建立并初步评价多元检测引起病毒性出血热病原体特异性IgM抗体的方法。方法在原核细胞中重组表达纯化马尔堡病毒、拉沙热病毒、裂谷热病毒、肺综合征出血热汉坦病毒、汉滩病毒、Seoul病毒及普马拉病毒核蛋白（NP），共价偶联到7种不同的xMAP荧光微球上，优化评价偶联效果，通过参比血清中相应病毒NP特异性抗体检测，评估检测方法，并与常规使用的MacELISA方法进行比较。结果在Luminex平台的基础上建立了多元检测引起病毒性出血热的病毒核蛋白特异性抗体的方法，特异性与敏感性与常规应用的特异性抗体检测MacELISA试剂盒相当，但可以同时排查多个病毒感染情况。结论利用LuminexxMAP技术建立基于病毒核蛋白多元检测方法快速敏感，操作简单，可以用于病毒性出血热的检测和血清流行病学调查。
- 李建东张硕张全福刘琴芝韦艳李川梁米芳李德新
- 关键词：出血热病毒性核蛋白质类免疫球蛋白M
- 登革工型病毒E蛋白在293T细胞中的分泌表达被引量：1
- 2009年
- 目的分泌表达登革I型病毒prM／E基因，为研究该蛋白的免疫学功能和特性奠定基础。方法用RT-PCR法获得登革I型病毒广州分离株全长prM／E基因，在prM基因前添加乙型脑炎病毒的信号肽或同时替换E基因羧基末端的20％为乙脑病毒E基因相应的部分，分别将其克隆入真核表达载体pcDNA5／FRT中，获得三种重组质粒D1prME-pc5，D1JsprME．pc5，D1JsprM80E20JE-pc5。用脂质体法分别将重组质粒DNA转入293T细胞，通过免疫荧光、Western印迹检测外源基因在真核细胞中的分泌表达。结果用免疫荧光法检测到分别转染了三种重组质粒的293T细胞的胞质中均有登革I型病毒蛋白的表达。Western印迹检测转染了D1prME-pc5重组质粒的293T细胞上清中没有特异蛋白条带，转染了经基因改造的重组质粒D1JsprME-pc5和D1JsprM80E20JE-pc5的细胞上清中均存在登革I型病毒的特异蛋白条带。结论转染了三种重组质粒的293T细胞均可表达登革I型病毒prM／E蛋白，只有在prM基因前添加了信号肽的重组质粒转染后蛋白才获得分泌表达。
- 苗芳李川张硕王晓芳李建东张全福刘琴芝韦艳杭小同梁米芳李德新
- 关键词：登革热病毒基因
- 乙脑病毒SA14-14-2株复制子载体的构建及鉴定被引量：2
- 2009年
- 目的构建乙脑病毒SA14-14-2株复制子载体，为进一步研究以乙脑病毒为载体的新型疫苗奠定基础。方法（1）构建了两个乙脑病毒复制子：一个为完全缺失PrM／E基因（命名为Full △prMJE Replicon）；一个保留E基因C端213bp（命名为Partial △prM／E Replicon），并代之以多克隆位点。（2）将复制子RNA转染BHK-21细胞，于24、48、72、96h采用Real-time PCR验证复制子的自主复制能力。（3）于复制子多克隆位点处插入YFP报告基因，并将含报告基因的复制子RNA转染BHK-21细胞，采用荧光显微镜观察及流式细胞仪检测验证YFP的表达。结果（1）两个复制子RNA转染BHK-21细胞后，RNA有随时间增加而不断增多的趋势。（2）含报告基因的复制子RNA转染BHK-21细胞后，荧光信号持续增强，表达YFP的阳性细胞率也逐渐增多。结论构建的乙脑病毒SA14-14-2株复制子载体Full △prM／E Replicon及Partial △prM／E Replicon具有自主复制能力及对外源蛋白的表达能力。
- 韦艳李川陆鹏于建石李建东刘琴芝张全福李德新
- 关键词：脑炎病毒复制子杂合子检测
- 反向遗传学在登革病毒研究中的应用
- 2009年
- 关于登革病毒及其感染的研究迄今还有很多尚未解决的问题，利用反向遗传学技术（reverse genetics approaches）对登革病毒进行研究是目前的热点。本文将就近年来反向遗传技术在登革病毒研究中的研究进展进行综述。
- 韦艳李德新
- 关键词：登革病毒
- 以乙脑病毒SA_(14)-14-2为载体构建乙脑/登革2型嵌合病毒的研究
- 登革病毒(DV)是黄病毒科黄病毒属成员,包含四个血清型,通过伊蚊传播。DV感染是当今人类中流行最广的虫媒病毒病,几乎在所有的热带、亚热带地区都有分布。登革病毒感染后可导致登革热、登革出血热、和登革休克综合征。据WHO估计...
- 韦艳
- 关键词：乙脑病毒登革病毒嵌合病毒感染性克隆
- 文献传递
- 中国临床诊断克雅氏病人脑脊液中tau蛋白浓度诊断价值的研究
- 克雅氏病(Creutzfeldt-Jakob disease,CJD)是一种由朊病毒引起的致死性快速进行性神经退行性疾病,到目前为止,确诊需进行脑组织活检或尸检。脑脊液(CSF)与大脑细胞外空间接触最为紧密,因此大脑的生...
- 王桂荣高晨石琪周伟陈建明董辰方石崧王新韦艳姜慧英韩俊董小平
- 关键词：克雅氏病TAUCSFELISA
- 文献传递
- 重组登革病毒E蛋白结构域Ⅲ抑制登革病毒感染的初步研究
- 2008年
- 目的 了解原核表达的登革病毒（dengue virus，DV）的E蛋白结构域Ⅲ直接抑制登革病毒感染及其抗体的中和作用。方法 在大肠埃希菌中表达l～4型登革病毒E蛋白结构域Ⅲ（EⅢ）。重组蛋白纯化后，进行阻断DV．2感染BHK-21细胞试验。用重组蛋白制备免疫血清，检测抗体中和作用。结果 在大肠埃希菌中成功表达了1～4型登革病毒E蛋白结构域埃希菌，4型重组E蛋白结构域Ⅲ均能够阻断2型DV感染，4型重组蛋白的免疫血清均能中和2型DV，但中和抗体效价不同。结论 原核表达的登革病毒结构域Ⅲ可以直接抑制病毒感染，所产生的抗体具有中和作用。直接抑制和中和抗体均对同型病毒作用较强。
- 陆鹏韦艳曹守春李建东刘琴芝张全福李川苗芳张硕杭小同梁米芳李德新
- 关键词：登革热病毒病毒感染
- 乙脑/登革2型嵌合病毒的构建
- 2009年
- 在乙脑病毒SA14-14-2株复制子载体pPartial△prM/E中克隆入DV2(Dengue virus serotype 2)的prM/E基因,构建乙脑/登革2型嵌合体克隆。将嵌合体克隆线性化后体外转录,获得的RNA转染BHK-21细胞,5～7d可观察到CPE。收获病毒上清液分别感染BHK-21细胞及C6/36细胞。接种于C6/36细胞中的嵌合病毒可使细胞出现CPE,RT-PCR、间接免疫荧光和Western blot检测显示:获得的嵌合病毒具有预期嵌合性核酸并能表达DV2的包膜蛋白,但不能在BHK-21细胞中传代培养。成功构建的乙脑/登革2型感染性克隆为进一步研究登革病毒疫苗奠定了基础。
- 韦艳陆鹏于建石李建东刘琴芝张全福李川苗芳张硕杭小同李德新
- 关键词：乙脑嵌合病毒感染性克隆
