陈存
- 作品数：3 被引量：5H指数：1
- 供职机构：四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 油菜中—未知BnRCH蛋白的E3连接酶活性分析被引量：4
- 2012年
- 利用本实验室前期以ATP6为诱饵蛋白,通过酵母双杂交系统筛选到的一个N端含有RINGv结构(RING-variant)的蛋白,暂命名为BnRCH,构建GTK-BnRCH表达载体在原核细胞E.coli BL21(DE3)中高效表达GST-BnRCH融合蛋白,并将纯化的融合蛋白加入体外泛素反应体系,发现BnRCH在ATP、泛素、E1、E2存在的条件下,能催化多聚泛素化形成,具有E3连接酶活性.
- 陈存唐天元杨虹伟蔡黎杨毅李旭锋
- 关键词：原核表达E3连接酶
- BnRCH同源基因耐热性分析被引量：1
- 2012年
- 本实验室先前通过酵母双杂交在油菜中获得一个未知基因(BnRCH),NCBI保守区域查寻表明BnRCH蛋白合有一个RINGv(RING-variant)结构域,该结构参与多种抗逆途径.为初步探索BnRCH的作用,通过RT-PCR技术,克隆BnRCH及其在其它物种中的同源基因cDNA序列,之后将各基因克隆到原核表达载体pET-28a(+)中进行表达.通过IPTG诱导,western检测表明重组蛋白的相对分子量约为35 kD.进一步在高温环境(43℃)对其生长曲线测定,发现重组菌生长状态优于对照菌,说明BnRCH及其同源基因能提高微生物的耐热性.
- 唐天元陈存陈凤莲杨毅
- 关键词：耐热大肠杆菌
- VDAC3与ABA受体蛋白相互作用的验证以及初步研究被引量：1
- 2013年
- 酵母双杂交技术在拟南芥cDNA文库中筛选得到了与ABA受体蛋白RCAR1,RCAR3均有相互作用的蛋白质VDAC3,并已获得VDAC3基因的全长.VDAC3蛋白包含有3个结构域,分别为Porin3结构域,DUF3442结构域和SEG片段,现根据结构域分布,将VDAC3截短为包含DUF3442的VDAC3N以及包含SEG的VDAC3C两段.将VDAC3全长以及分别截短的169个氨基酸(VDAC3N)及105个氨基酸(VDAC3C)的片段进行酵母转化实验,与RCAR1或RCAR3共同转化后,VDAC3,VDAC3N的共转酵母能够在缺陷型培养基上生长,并且使X-Gal显色为蓝色,而VDAC3C则不能.这验证了全长的VDAC3与RCAR1,RCAR3的存在相互作用,并发现决定VDAC3蛋白与RCAR1,RCAR3是相互作用的结构域位于N端的DUF3442结构域.
- 蔡黎李德款刘志斌冯俊陈存李旭锋杨毅
- 关键词：酵母双杂交系统
