钟毅
- 作品数：9 被引量：38H指数：4
- 供职机构：江西出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：国家质检总局科技计划项目国家科技支撑计划江西省科技计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学轻工技术与工程经济管理更多>>
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒PCR-DHPLC检测新技术的建立及应用被引量：3
- 2012年
- 应用PCR结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),根据PRRSV GP5基因的序列特点设计特异性引物,PCR扩增产物经DHPLC技术进行快速检测。以猪细小病毒、猪圆环病毒Ⅱ型、猪流感病毒、猪瘟病毒和猪伪狂犬病毒进行特异性试验,无交叉反应,具有较好的特异性和重复性;对阳性标准品的检测结果表明,所建立的PCR-DHPLC法灵敏度可达1.0×101拷贝/μL。对16份疑似病料分别应用本试验所建立的PCR-DHPLC法与SYBR GreenⅠ实时荧光PCR法、PCR-凝胶电泳法、病毒培养法进行检测,发现有15份荧光定量PCR阳性,15份PCR-DHPLC阳性,12份PCR-凝胶电泳阳性。结果表明,建立的PCR-DHPLC法具有特异、敏感、快速、重复性好等优点,可用于临床PRRSV感染的早期诊断以及分子流行病学调查。
- 杨春华祝建新钟毅孙思扬沈艳陈庆富王川庆
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5基因变性高效液相色谱实时荧光PCR
- 猪细环病毒数字PCR定量检测方法的建立被引量：4
- 2017年
- [目的]实现猪细环病毒(TTSuV)的准确定量检测。[方法 ]根据TTSuV的序列特点,设计特异性引物、探针,建立数字PCR检测技术。对数字PCR反应体系中的引物和探针浓度进行优化,分析方法的灵敏度、特异性,并初步应用于进行临床检测。[结果 ]最终确定TTSuV1a和TTSuV1b数字PCR反应体系中最佳引物浓度均为250 nmol/L,最佳探针浓度均为300 nmol/L,TTSuV1a型和TTSuV1b型灵敏度均可达到单个拷贝数;以猪圆环病毒Ⅱ型、猪细小病毒和猪伪狂犬病毒进行特异性试验,结果无交叉反应;批内和批间试验表明,该方法的重复性良好;本实验室留存的92份血清样本的检测结果与其背景信息一致。[结论 ]本研究建立的TTSuV数字PCR法具有特异性强、灵敏度高、检测限低等优点,可用于TTSuV的定量检测。
- 杨春华孙洁罗秋红祝建新孙思扬周延钟毅夏彪
- 关键词：实时荧光PCR
- WXS环境下的e-CIQ主干系统跨集群SESSION共享故障排查实例
- 2016年
- 中国电子检验检疫主干系统（以下简称e-CIQ主干系统）是基于全国大集中要求设计的全新核心业务系统,它依托在北京建设的亦庄、东坝双活数据中心,实现了全国大集中条件下应用可用性99.99%的设计要求。而用户Session会话的跨数据中心集群的安全、快速、可靠共享管理,是确保双活顺利实现的关键。为此,e-CIQ主干系统运用跨WAS集群的Session,
- 魏文钟毅马欣欣谢成宸
- 关键词：核心业务系统共享管理集群电子检验检疫
- 乳及乳制品中阪崎肠杆菌PCR-DHPLC检测新技术的建立被引量：13
- 2008年
- 为了应用PCR结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术建立食品中阪崎肠杆菌的快速检测方法,根据阪崎肠杆菌16S-23S rRNA特异基因序列的特点设计特异性引物,PCR扩增的产物经DHPLC技术进行快速检测。以阪崎肠杆菌等59株参考菌株做特异性试验;阪崎肠杆菌菌株稀释成不同梯度,做灵敏度试验,结果表明该方法具有很好的特异性,方法灵敏度较高,检测低限可达到为25 CFU/mL;该方法可以快速、准确检测阪崎肠杆菌,是食品中致病菌快速检测的新技术。
- 杨春华曹际娟桂家祥钟毅
- 关键词：DHPLC阪崎肠杆菌
- 江西地区猪瘟感染和免疫状况的血清学调查被引量：7
- 2009年
- 杨春华祝建新段振龙钟毅邱昌庆沈艳
- 关键词：猪瘟病毒血清学调查免疫状况接触性传染病VIRUS
- 检测猪繁殖与呼吸综合征病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法的建立及初步应用被引量：1
- 2010年
- 利用反转录PCR(RT-PCR)技术扩增出猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5基因部分片段,并克隆到pGEM-TEasy载体上,得到重组质粒作为荧光定量PCR检测的标准模板,以10倍梯度稀释模板,进行SYBR GreenⅠ荧光定量PCR扩增并制作标准曲线,建立PRRSV的荧光定量PCR检测方法。该方法检测灵敏度可达10拷贝/μL,与猪圆环病毒、猪乙型脑炎病毒、猪伪狂犬病毒、猪瘟病毒、猪流感病毒和猪细小病毒不发生交叉反应,具有良好的特异性和重复性;对16份临床疑似病料进行了检测,发现15份均为荧光定量PCR阳性,而常规RT-PCR只能检测出12份阳性。结果表明,建立的实时荧光定量PCR具有特异、敏感、快速、定量、重复性好等优点,可用于临床PRRSV感染的早期诊断以及分子流行病学调查。
- 杨春华胡慧钟毅韩志涛祝建新
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5基因实时荧光定量PCRSYBR
- 猪细环病毒PCR-DHPLC检测技术的建立及应用被引量：4
- 2012年
- 为了应用PCR结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术检测猪细环病毒1型和2型,根据猪细环病毒的序列特点设计特异性引物,PCR扩增产物经DHPLC技术进行快速检测。选择猪细小病毒、猪圆环病毒Ⅱ型和猪伪狂犬病毒进行特异性试验,无交叉反应。该检测方法具有较好的特异性和重复性;用质粒标准品进行TTSuV1和TTSuV2的PCR-DHPLC检测,灵敏度可达1.0×101拷贝·μL-1。对80份血清样本分别应用实时荧光PCR法、PCR-凝胶电泳法及本文所建立的PCR-DHPLC法与进行检测,发现TTSuV1有63份PCR-DHPLC阳性,63份实时荧光PCR阳性,54份PCR-凝胶电泳阳性;TTSuV2有69份PCR-DHPLC阳性,69份实时荧光PCR阳性,56份PCR-凝胶电泳阳性。本试验建立的PCR-DHPLC法具有特异、敏感、快速、重复性好等优点,可用于TTSuV感染的分子流行病学调查。
- 杨春华周延孙思扬钟毅王川庆
- 关键词：变性高效液相色谱实时荧光PCRPCR
- 猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒河南09分离株ORF5基因的克隆及结构分析被引量：1
- 2011年
- 参照GenBank上登录的猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒（PRRSV）美洲型AF494042株ORF5基因序列,设计1对特异性引物,应用RT-PCR扩增出PRRSV河南09分离株（HN-09）的ORF5基因,经与pGEM-T Easy载体连接后,筛选出阳性重组质粒进行序列测定,并利用DNASTAR软件对序列进行分析。结果表明,扩增片段长度为721 bp,与预期目的片段大小一致,测序验证其为PRRSV的ORF5基因。序列分析表明,HN-09株与AF494042的同源性为93.5%,与山西、山东近年分离株的同源性为97.8%-99.2%,与河北、安徽、黑龙江等省分离株的同源性为93.4%-98.7%,但与2004年河南分离株的亲缘关系较远,其同源性为88.7%。用ANTHEPROT软件分析HN-09株和AF494042株编码蛋白质氨基酸的组成和二级结构的含量及分布,结果表明,HN-09株中碱基的突变,导致其氨基酸序列与美洲型有所不同,形成的二级结构略有差异,但二级结构元件的大致分布与美洲型相同。
- 杨春华韩志涛胡慧钟毅王冬祝建新
- 关键词：猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒ORF5基因克隆
- 乳及乳制品中肺炎克雷伯氏菌PCR-DHPLC检测新技术的建立被引量：9
- 2010年
- 为了应用PCR结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术建立乳品中肺炎克雷伯氏菌的快速检测方法,根据肺炎克雷伯氏菌16S-23S rRNA特异基因序列的特点设计特异性引物,PCR扩增的产物经DHPLC技术进行快速检测。以肺炎克雷伯氏菌等57株参考菌株做特异性试验;将肺炎克雷伯氏菌菌株稀释成不同梯度,做灵敏度试验。试验结果表明该方法具有很好的特异性,灵敏度较高,检测低限可达到100 CFU/mL,可以快速、准确检测肺炎克雷伯氏菌,是乳及乳制品中致病菌快速检测的新技术。
- 杨春华曹际娟钟毅石磊陈庆富马欣欣龚斐
- 关键词：DHPLC肺炎克雷伯氏菌
