邢晓为 作品数:81 被引量:318 H指数:11 供职机构: 中南大学湘雅三医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家重点基础研究发展计划 湖南省自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 农业科学 文化科学 更多>>
S1P2受体shRNA腺病毒载体的构建及筛选 被引量:2 2009年 目的为探讨S1P2受体介导血管内皮细胞衰老的机制,构建和筛选特异性S1P2受体shRNA腺病毒载体。方法设计并合成4对靶向S1P2受体的单链寡核苷酸(ssoligo),经变性退火为双链寡核苷酸(dsoligo)插入穿梭质粒pRNAT-H1.1/Shuttle载体,测序正确后经脂质体介导转染人肺动脉内皮细胞(HPAEC),通过RT-PCR方法筛选对S1P2受体基因沉默效果最佳的穿梭质粒pRNAT-H1.1/Shuttle-shRNA,提取质粒DNA,经双酶切,回收S1P2受体基因沉默效果最佳的shRNA片段,亚克隆到腺病毒表达载体(pAdeno-X),筛选出正确重组子,转染HEK293A细胞,收集重组的腺病毒,测定病毒滴度,通过Westernblot方法检测S1P2受体沉默效果。结果测序结果证实所构建的pRNAT-H1.1/Shuttle-shRNA质粒正确,并从4对dsoligos筛选出对S1P2受体沉默效果最佳的穿梭质粒pRNAT-H1.1/Shuttle-shRNA,经亚克隆到腺病毒表达载体。转染人肺动脉内皮细胞后,Western印迹检测显示构建的腺病毒载体pAdeno-shRNA对S1P2受体蛋白的沉默有明显效果。结论成功地构建和筛选出介导特异性shRNA-S1P2的重组腺病毒。 闾宏伟 陈淑华 阳国平 朱晒红 邓昊 邢晓为关键词:重组腺病毒 短发夹RNA 自发性高血压大鼠心肌组织β1肾上腺素能受体过表达对美托洛尔降压疗效的影响 目的通过构建大鼠β肾上腺素能受体(AR)腺相关病毒载体AAV/Adrb1,并体内转染自发性高血压大鼠(SHR),探讨β-AR表达水平与美托洛尔降压疗效的关系。方法采用基因合成法获得大鼠β-AR基因开放阅读框全长,克隆至A... 袁洪 张梅珍 邢晓为 黄志军文献传递 AAV9-shRNA-ADRB1-ZsGreen介导的自发性高血压大鼠心肌β1受体表达下调对美托洛尔降压疗效的影响 刘小丽 邢晓为 袁洪人类睾丸生精细胞凋亡相关基因TSARG3的克隆 被引量:6 2003年 目的 克隆人类睾丸生精细胞凋亡相关基因TSARG3。方法 从已获得的小鼠隐睾和正常睾丸对照中表达量有明显差异的表达序列标签片段 (BE64 45 3 7)入手 ,构建人同源表达序列标签重叠群 ,应用基因特异性引物和载体特异性引物 ,在睾丸cDNA文库的DNA中进行巢式PCR扩增、测序 ,对测序结果进行生物信息学分析。结果 从睾丸cDNA文库中分离出人类睾丸凋亡相关基因的 5′末端而获得全长cD NA ,命名为TSARG3 ,GenBank登录号为AF4192 91(保密期为 1年 ) ,同时应用相同方法克隆了该基因在小鼠中的同源基因 ,GenBank登录号为AF4192 92。结论 获得人类睾丸生精细胞凋亡相关基因TSARG3 ,该基因可能与人类睾丸生精细胞凋亡有关。 刘刚 卢光琇 傅俊江 刘上峰 邢晓为 李麓芸关键词:巢式聚合酶链反应 睾丸 精子 男性不育 液相蛋白质芯片检测血清C反应蛋白方法的建立 被引量:2 2007年 目的建立液相蛋白质芯片检测血清C反应蛋白(CRP)的方法,探讨该方法诊断冠心病的临床应用价值。方法用聚苯乙烯荧光微珠,将抗CRP单克隆抗体包被在微珠上,将另一针对CRP不同抗原表位的单克隆抗体生物素化;包被好的微珠加入到96孔板中,将待测血清分别加入各孔,用CRP标准品建立标准曲线,各孔中加入生物素化抗CRP单抗和PE荧光素标记的链霉亲合素。在Bio-Plex液相蛋白质芯片分析仪上检测296份血清样品。同一血清标本同时用免疫比浊法测定。比较两种方法对CRP检测的敏感性和特异性。结果液相蛋白质芯片检测CRP方法对诊断冠心病的敏感性(78.3%)和特异性(87.1%)较免疫比浊法的敏感性(63.0%)和特异性(86.5%)高,χ2=28.94,P<0.001。结论建立了一种检测血清CRP的新方法,对诊断冠心病有临床应用价值。 袁洪 闾宏伟 桑海强 阳国平 黄志军 林玲 邢晓为关键词:C反应蛋白 cDNA微阵列结合信号通路分析喉鳞癌差异表达基因 被引量:3 2005年 陈杰 田勇泉 肖健云 邢晓为 左朝辉 黄文孝关键词:喉鳞癌 芯片 信号通路 差异表达基因 肥胖、糖脂代谢障碍对美托洛尔降压疗效的影响 被引量:4 2007年 目的探讨肥胖、糖脂代谢障碍对选择性β1肾上腺素能受体阻滞剂美托洛尔降压疗效的影响。方法筛选血压分级为1级或2级的原发性高血压患者300例,给予美托洛尔治疗8周,根据血压的降低判断其疗效,并分析肥胖或中心性肥胖、糖尿病和高脂血症对美托洛尔疗效的影响。结果肥胖或中心性肥胖、糖脂代谢障碍可显著影响美托洛尔的降压疗效,正常体质指数组的降压有效率(68.4%)均高于超重组(47.4%)和肥胖组(39.4%),非中心性肥胖组的有效率(62.8%)也高于中心性肥胖组(46.6%),高脂血症和糖尿病对疗效的影响有性别差异。Logsitic回归分析发现,体质指数是对美托洛尔疗效影响最大的因素。结论肥胖、糖脂代谢障碍可影响美托洛尔的降压疗效,后者对男性影响更大。 姚远 黄志军 袁洪 林玲 邢晓为 闾宏伟 阳国平关键词:内科学 肥胖 中心性肥胖 糖脂代谢异常 美托洛尔 降压疗效 一个新的人类睾丸特异基因的cDNA克隆和表达分析 被引量:2 2004年 运用“数据库消减杂交”(DigitalDifferentialDisplay)方法筛选人类睾丸特异表达新基因 ,获得了有差异显示的代表新基因的克隆重叠群 ,挑选其中一个克隆重叠群HS .12 9794进行多组织RT PCR ,初步证实该重叠群在人睾丸中有高表达。然后从包含该重叠群的IMAGE克隆出发 ,采用生物信息学的方法快速克隆了一个人类新基因的全长cDNA序列 ,其全长 2 4 30bp ,开放阅读框为 6 76~ 12 4 8bp ,定位于 3p2 1 1,编码由 190个氨基酸组成 ,分子量为 2 0 4 17 8Da ,等电点为 5 2 3的一个偏酸性蛋白质 ,该蛋白与已知蛋白质无明显同源性。克隆实验验证该基因阅读框完全正确 ,半定量RT PCR进一步显示该基因在人不同发育时期的睾丸及精子细胞中有表达 ,推测其可能与精子生成相关 ,暂命名为SRG5 (TestisSpermatogenesisRelatedGene 5 ,SRG5 ) (GenBank登录号 :AY2 2 1117)。SRG5基因的成功克隆表明 ,“数据库消减杂交”与实验验证相结合的技术路线是一种快捷高效的发现更多人类功能新基因的新策略。 李丹 卢光琇 傅俊江 莫亚勤 邢晓为 刘刚关键词:基因克隆 睾丸 组织特异表达 人睾丸蛋白SPAG4L与KASH结构域蛋白Nesprin-3的相互作用 2017年 目的探讨含SUN(Sad,UNC-84)结构域的人睾丸蛋白SPAG4L(sperm-associated antigen 4 like)与具有KASH(Klarsicht,ANC-1 and Syne homology)结构域的核膜血影重复蛋白3(nuclear envelop spectrin repeat proteins 3,Nesprin-3)之间的相互作用。方法用生物信息学方法对SPAG4L蛋白进行分析,通过体外转染实验,观察SPAG4L的亚细胞定位;并用免疫荧光技术、免疫共沉淀和双分子荧光互补实验检测SPAG4L是否与KASH结构域蛋白Nesprin-3存在相互作用。结果生物信息学分析结果表明,SPAG4L蛋白具有跨膜结构;亚细胞定位结果发现,SPAG4L蛋白定位于核膜和胞浆;免疫荧光、免疫共沉淀和双分子荧光互补实验结果表明,SPAG4L蛋白与Nesprin-3蛋白质相互作用,形成LINC(linkers of the nucleoskeleton to the cytoskeleton)复合物。结论 SPAG4L与Nesprin-3能够相互作用,形成LINC复合物,对了解SPAG4L蛋白在精子发生中的作用具有重要的意义。 任瑶 伍勇 黄利华 邢晓为关键词:相互作用 精子发生 β1肾上腺素能受体基因多态性及其甲基化修饰对美托洛尔降压疗效的影响 被引量:7 2008年 目的研究β1肾上腺素能受体基因多态性及其甲基化修饰对美托洛尔降压疗效的影响。方法入选300例高血压病患者,给予相同剂量美托洛尔降压治疗,同时用聚合酶链反应限制片长多态性法检测其基因型,比较不同基因型高血压患者血压下降水平;用甲基化特异性聚合酶链反应法检测相同基因型高血压患者和正常血压者β1肾上腺素能受体基因甲基化修饰情况。结果美托洛尔治疗后,Arg389Arg型患者舒张压较Gly389Arg型和Gly389Gly型患者明显下降(降幅8.0%±1.3%比4.0%±1.5%和3.0%±1.1%,P<0.05);三种基因型患者收缩压下降幅度差异无显著性。所有研究对象外周血中β1肾上腺素能受体基因均存在甲基化修饰。结论β1肾上腺素能受体的Gly389Arg基因多态性与美托洛尔降压疗效相关;外周血β1肾上腺素能受体基因甲基化修饰未发现与美托洛尔降压疗效相关。 刘晶晶 邢晓为 袁洪 黄志军 林玲 岑超群 肖洁关键词:药理学 美托洛尔 Β1肾上腺素能受体 基因多态性 甲基化修饰