贺佳音
- 作品数：1 被引量：2H指数：1
- 供职机构：浙江大学生命科学学院生物技术系更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 基因工程酵母菌来源的D-氨基酸氧化酶分离纯化被引量：2
- 2005年
- 目的 以基因工程酵母表达的胞内D-氨基酸氧化酶(DAAO)为原料,通过破细胞,分离纯化DAAO。 方法 采用机械研磨,反复冻溶,超声波等多种方法破细胞,获得粗酶液,硫酸铵分段沉淀。沉淀透析后,经 DEAE Sephadex A-50,DEAE-DE52,Q-sepharose等离子交换柱进行第一步分离,获得的含酶粗品,再经Sephaciyl S-100分子筛进一步纯化获得电泳纯的DAAO。结果 超声波破壁为最佳的破壁方法,得到的每毫升酶液所含 的酶活力是其他破壁方法的两倍以上,最高达到12 000 U／mi,。两步硫酸铵沉淀能粗分DAAO,50％硫酸铵沉 淀酶回收率可达85％以上。用Q-sepharose、Sephacryl S-100分子筛柱层析两步纯化,酶活力回收率最高可达 90％,SDS-PAGE显示单一蛋白条带。结论 本实验方法能得到电泳纯的DAAO,总回收率约为40％。
- 史训龙冯美卿贺佳音袁中一周珮
- 关键词：S-100细胞分离纯化电泳硫酸铵沉淀D-氨基酸氧化酶
