谢晓谦
- 作品数：3 被引量：20H指数：3
- 供职机构：无锡出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：国家质检总局科技计划项目国家科技重大专项艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 不同的样本处理方法对乙型肝炎病毒DNA检测的影响被引量：6
- 1998年
- 目的探讨乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）的聚合酶链反应（ＰＣＲ）常规检测中血清样本的最佳处理方法。方法分别用不同缓冲液（ＰＢＳ与ＴＥ）对血清进行１：１或１：１０稀释，不同浓度去污剂（ＴｒｉｔｏｎＸ－１００与ＮＰ４０）及巯基乙醇处理血清样本，以及用硫氰酸胍－酚－氯仿抽提、蛋白酶Ｋ消化、碱裂解、辛酸钠裂解等方法处理血清样本，比较这些方法对ＰＣＲ法检测血清ＨＢＶＤＮＡ敏感度的影响，并进行了辛酸钠最适浓度实验。结果在所比较的１８种方法中发现硫氰酸胍－酚－氯抽提法、碱裂解法及辛酸钠法有较高的检测敏感度，而辛酸钠法有更好的重复性，方法最为简便。
- 王惠民谢晓谦
- 关键词：乙型肝炎病毒聚合酶链反应病毒DNA
- 基于颜色判定的RT-LAMP技术检测HCoV-NL63冠状病毒基因被引量：4
- 2016年
- 建立了一种适合于国境口岸简便、快速、灵敏和特异检测人冠状病毒NL63(HCoV-NL63)的核酸检测方法。通过建立基于颜色判定的逆转录环介导等温扩增(Reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)技术,针对HCoV-NL63核衣壳蛋白(Nucleocapsid,N)基因序列设计出6条特异性引物,在等温条件下(63℃)进行扩增反应60min,在扩增前加入钙黄绿素作为反应指示剂,并结合浊度仪进行实时监测,以最终反应颜色变化作为结果判断标准。利用该方法对同种属其他人冠状病毒、诺如病毒、流感病毒进行检测,以分析该方法的诊断特异性。应用该方法对梯度稀释的HCoV-NL63病毒RNA进行检测,以分析该方法的诊断灵敏性,并与常规real-time RT-PCR方法进行比较。结果显示,本研究建立的基于颜色判定的RT-LAMP方法在短时间内(40min)即可达到对HCoV-NL63的快速检测。该检测方法与加入其它病毒RNA模板溶液颜色均不产生改变,具有较高的检测特异性。检测灵敏性最低检测下限为1 600拷贝/反应。本研究建立的基于颜色判定的RT-LAMP方法可实现对HCoV-NL63冠状病毒现场快速检测,具有在国境口岸以及基层医疗机构和疫区现场推广应用的潜力。
- 耿合员汪圣强谢晓谦肖雨张汀谭文杰苏川
- 关键词：HCOV-NL63RT-LAMP
- HIV检测基因芯片的研制和应用评价被引量：10
- 2010年
- 目的研制用于HIV检测的基因芯片,并评价其在临床诊断和出入境检疫中的应用价值。方法针对HIV-1gags基因相对保守区域,设计检测探针,并设计内标和对照探针,制备HIV检测微阵列基因芯片;设计引物,以1:20引物比例不对称扩增HIV基因靶标,Cy3荧光标记扩增产物,作为杂交模板。Cy3荧光标记PCR扩增产物与微阵列探针杂交反应,结果经荧光扫描,并用分型软件分析判断阳性探针和样本HIV阴阳性。采用信号放大、梯度临界值技术,增加了检测的灵敏度和特异性。采用70例临床样本实样检测与DNA测序作对照,评价试剂盒的性能和应用价值。结果70例样本,采用本试剂盒与DNA测序并行检测,两者符合率为98.57%。结论本HIV检测基因芯片试剂盒具有高通量、操作简便、低成本、准确度好等优点,应用研究表明,在临床HIV诊断检测和出入境检测方面具有很高的应用价值。
- 朱京京汪圣强谢晓谦钱盼盼高杰胡守旺
- 关键词：HIV基因芯片DNA测序
