苑志刚
- 作品数：7 被引量：18H指数：3
- 供职机构：长春生物制品研究所有限责任公司更多>>
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- 人用狂犬病脂质体疫苗的免疫效果被引量：5
- 2007年
- 目的对狂犬病脂质体疫苗进行免疫效果评价。方法用狂犬病脂质体疫苗和无佐剂疫苗分别免疫小鼠，以NIH法检测保护效力，RFFIT法检测中和抗体，流式细胞仪检测淋巴细胞表面标记，体外实验法检测淋巴细胞增殖能力，乳酸脱氢酶释放法检测NK细胞活性，ELISA检测试剂盒检测免疫后小鼠IL-2和IFN水平。结果狂犬病脂质体疫苗与无佐剂疫苗相比，可提高效力2—3倍，脂质体疫苗组中和抗体水平明显高于无佐剂疫苗组，两组之间差异有显著意义。狂犬病脂质体疫苗可增强细胞免疫，小鼠CD4^＋／CD8^＋比例、淋巴细胞增殖指数、NK细胞活性、IL-2及IFN活性与无佐剂疫苗相比，差异均有显著意义。结论狂犬病脂质体疫苗可同时增强细胞免疫和体液免疫。
- 郭秀侠杨倩刘岩苑志刚孟时孙宏亮福泉于洪涛盛军
- 关键词：狂犬病毒脂质体细胞免疫体液免疫
- 一种应用生物反应器及片状载体生产狂犬疫苗的方法
- 本发明涉及一种应用生物反应器及片状载体生产狂犬疫苗的方法，属于生物制品技术领域。在具有固定床篮式搅拌系统的Celligen310型14L生物反应器中以台湾赛宇細胞科技股份有限公司的BioNOCII?cellculture...
- 郭秀侠杨屹苗丽刘岩蔡月红李宇辉崔文广姜文波井伟东苑志刚丁丽丽
- 文献传递
- 应用篮式生物反应器制备Vero细胞人用狂犬病疫苗
- 目的:应用篮式生物反应器制备Vero细胞人用狂犬病疫苗。方法:以人用狂犬病疫苗株aGV为毒种,Vero细胞为培养基质,利用14 L生物反应器(500 g片状载体置于载体篮内)灌流式培养,连续收获的病毒液经超滤浓缩、灭活、...
- 杨屹郭秀侠崔文广苗丽刘岩王亚军蔡月红苑志刚
- 关键词：生物反应器狂犬病疫苗VERO细胞
- 文献传递
- 乙型脑炎病毒在Vero细胞上的传代适应性及毒种库的建立
- 2014年
- 目的分析乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus,JEV）在Vero细胞上的传代适应性,进行培养条件及接种方式的优化,并建立毒种库。方法将JEV P3株在Vero细胞上连续适应性传至20代（P3V1-P3V20）,采用小鼠法检测P3V2、P3V3、P3V4的病毒滴度。优化JEV静置培养条件（维持液p H值、培养温度、MOI）及接种方式（单层接种法、混合接种法）,并进行培养规模的放大。采用RT-PCR法扩增P3V0、P3V1、P3V5、P3V10、P3V15及P3V20代病毒的E基因片段,并进行测序分析。建立JEV毒种库,并进行全面检定。结果 JEV在Vero细胞上传代适应性良好,各代次病毒滴度均大于8.5 lg LD50/ml。最适培养条件为：病毒维持液p H值为7.6,培养温度为34℃,病毒MOI为0.1;最佳接种方式为：单层接种法。在不同培养规模时,病毒滴度变化较小,且均维持在较高水平。P3V0、P3V1、P3V5、P3V10、P3V15及P3V20各代次间E基因片段同源性为100%,传代稳定性良好。建立的毒种库的鉴别试验、无菌检查、支原体检查、病毒滴定、病毒外源因子检查及免疫原性检查结果均符合《中国药典》三部（2010版）相关要求。结论已完成JEV在Vero细胞上的适应性传代培养,并成功建立毒种库,为实现以Vero细胞为基质的JEV疫苗的研发奠定了基础。
- 刘岩苑志刚韩轼奇谢伟周长军李春艳闫峰杨屹
- 关键词：乙型脑炎病毒VERO细胞传代适应性
- 应用篮式生物反应器制备Vero细胞人用狂犬病疫苗被引量：9
- 2011年
- 目的应用篮式生物反应器制备Vero细胞人用狂犬病疫苗。方法以人用狂犬病疫苗株aGV为毒种,Vero细胞为培养基质,利用14 L生物反应器(500 g片状载体置于载体篮内)灌流式培养,连续收获的病毒液经超滤浓缩、灭活、柱层析纯化后,加入冻干保护剂,制备冻干人用狂犬病疫苗,检测冻干前后及37℃放置28 d后的疫苗效价。结果细胞密度最高可达1.0×107个/ml;病毒收获液毒力为7.5×106～3.4×108 FFU/ml;纯化后总蛋白质含量小于80μg/0.5 ml,Vero细胞蛋白质残留量≤3.5μg/0.5 ml,Vero细胞DNA残留量小于100 pg/0.5 ml,疫苗效价大于5.0 IU/0.5 ml。结论应用篮式生物反应器可制备高质量的人用狂犬病疫苗。
- 杨屹汝东宇郭秀侠崔文广苗丽刘岩王亚军蔡月红苑志刚
- 关键词：生物反应器狂犬病疫苗VERO细胞
- 食蟹猴肌肉注射冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)的长期毒性被引量：3
- 2014年
- 目的评价食蟹猴反复肌肉注射冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)的长期毒性。方法采用区段随机分组法,将24只食蟹猴分为阴性对照组、辅料对照组、冻干人用狂犬病疫苗低(1剂/次)、高(5剂/次)剂量组(分别为临床人用剂量的1和5倍),每组6只,雌雄各半,各组均于第0、3、7、14、28和42 d经肌肉注射各免疫1次,停药后进行一般临床观察及体重、体温、心电图、眼科、血液学指标、血液生化及电解质指标、尿液指标、免疫指标、骨髓涂片、脏器及组织病理学改变观察,连续观察4周。结果试验期间各组动物一般状况良好,注射部位肉眼观察无异常;体重、体温、心电图、血细胞计数、凝血功能、血生化、眼科检查、尿常规、外周血T淋巴细胞亚群分布、血清细胞因子IL-2和IFNγ水平、骨髓组织、脏器系数等均未见有毒理学意义的规律性改变;疫苗低、高剂量组动物免疫后血清抗狂犬病病毒特异性抗体水平明显升高,均可产生具有保护作用(大于0.5 IU/ml)的中和抗体;辅料对照组和疫苗低、高剂量组部分动物注射局部可见轻微刺激性改变,4周恢复期结束时,局部刺激性反应消退。结论冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)5剂/次(临床拟用剂量的5倍)以下为无毒性反应剂量,临床需重点关注注射部位局部刺激性反应。
- 苗丽丁丽丽李春艳赵博崔文广苑志刚刘岩杨屹
- 关键词：狂犬病疫苗VERO细胞长期毒性食蟹猴
- 乙型脑炎病毒的生物反应器培养及其灭活和纯化被引量：3
- 2014年
- 目的利用NBS 14 L篮式生物反应器大规模培养乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV),并对病毒收获液进行灭活和纯化,为乙型脑炎灭活疫苗(Vero细胞)的大批量生产提供参考。方法用NBS 14 L篮式生物反应器,以片状载体FibralCel DISKⅠ为载体,进行Vero细胞高密度培养,分别按0.01、0.1和0.3 MOI接种JEV(P3V2)毒种,灌流培养,收获3批病毒液,检测病毒滴度;分别使用不同浓度的甲醛(100、200、400 ng/ml)于4、25℃和不同浓度的β-丙内酯(β-丙内酯︰病毒液分别为1︰2 000、1︰4 000、1︰8 000)于4℃对病毒收获液进行灭活,取灭活后的病毒液,接种昆明小鼠,验证病毒灭活效果;用截留相对分子质量为10万的超滤器对病毒收获液进行超滤浓缩,用Sepharose 4FF层析柱对病毒浓缩液进行层析纯化。结果共培养3批Vero细胞,平台期密度约为1.6×107个/ml。3批病毒收获液的滴度分别为8.4、8.1和7.9 lgLD50/ml。以甲醛为灭活剂,作用浓度为200 ng/ml,温度为4℃时,作用7 d可完全灭活病毒,且免疫原性合格;以β-丙内酯为灭活剂,作用浓度为1︰4 000,温度为4℃时,作用12 h可完全灭活病毒,且免疫原性合格。3批病毒浓缩液病毒液经Sepharose 4FF层析柱层析纯化后,蛋白去除率达99%以上,抗原回收率在95%以上,Vero细胞蛋白质残留量和DNA残留量均符合《中国药典》三部(2010版)的相关规定。结论成功实现了JEV的大规模生物反应器培养,层析纯化后病毒的抗原回收率较高,为乙型脑炎灭活疫苗(Vero细胞)的大批量生产提供了参考。
- 苑志刚刘岩陈立新韩慧丽吴洋李春艳杨屹
- 关键词：乙型脑炎病毒灭活疫苗VERO细胞生物反应器柱层析
