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大肠杆菌天门冬酰胺酶Ⅱ的基因克隆与表达被引量：14: 1995年; 本文报道用一对与大肠杆菌编码Ｌ－天门冬酰胺酶Ⅱ（Ｌ－ＡｓＰｓⅡ）的基因ａｎｓＢ两侧序列互补的寡核苷酸Ｌ１、Ｌ２作引物，以Ｌ－ＡＳＰｓⅡ的野生型生产菌ｃＰＵ２１０００９染色体为模板，经ＰＣＲ扩增得到长约１．６Ｋｂ的ＤＮＡ片段。该片段通过以ＬＰ１、ＬＰ２为内引物的ＰＣＫ反应，证明包含了ａｎｓＢ基因的编码序列。将此片段经ｘｂａ１、ＨｉｎｄⅡ消化，插入质粒ＰＵＣ１８、ＰＵＣ１９上构建重组质粒ＰＵＡ１８、ＰＵＡ１９，分别转化Ａｓ１．１１８７，Ａｓ１．１１９３，ＨＢ１０１，９６３７，ＪＭ１０７，７１／１８，ＣＰＵ２１０００９等宿主菌，筛选得到Ｌ－ＡＳＰｓⅡ酶活力明显提高的８株阳性转化子。在１Ｌ生物反应器中，ＬＢ培养基３７℃下培养２４ｈ，其酶活在６．２～３１．８１Ｕ。ｍｌ之间。其中ＣＴＡ８表达Ｌ－ＡＳＰｓⅡ水平最高，达到３１．８１Ｕ／ｍｌ．各基因工程菌株较之野生型生产菌体ＣＰＵ２１０００９，其生产Ｌ－ＡＳＰｓⅡ水平提高了５～２６倍。而且ＩＰＴＧ诱导对工程菌表达Ｌ－ＡＳＰｓⅡ的水平几无影响。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得工程菌表达的Ｌ－ＡＳＰｓⅡ分子量约为１４０Ｋｄ．薄层扫描结果显示：ＣＴＡ７、ＣＴＢ８、ＣＴＡ９所产生的Ｌ－ＡＳＰｓ?; 李晶刘景晶吴梧桐胡梅清; 关键词：大肠杆菌基因克隆基因表达

人肝谷胱甘肽过氧化物酶纯化及性质研究被引量：8: 1995年; 经硫酸铵分级沉淀，离子交换层析和凝胶过滤等步骤，从人肝中获得了ＰＡＧＥ单一条带的谷胱甘肽过氧化物酶，比活提高１２０倍，得率为２５％。凝胶过滤法测得分子量为９０９８０，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定亚基分子量为２２４２３．原子吸收法测得每分子酶含有四个硒原子。等电聚焦显示该酶等电点为５．０．酶活力的最适ｐＨ为８．５，最适温度为３７℃。动力学实验提示该酶作用机理属于乒乓机制型。; 徐蘅裘奇胡梅清魏涌; 关键词：谷胱甘肽过氧化物酶提纯

人肝谷胱甘肽过氧化物酶的动力学性质: 1994年; 从人肝中分离获得谷胱甘肽过氧化物酶，其最适ｐＨ为８．５，最适温度为３７℃。该酶以Ｈ２Ｏ２或ＧＳＨ为底物时表现Ｋｍ值分别为０．２７ｍｍｏｌ／Ｌ和１．３ｍｍｏｌ／Ｌ。酶与多分子底物作用的动力学研究表明人肝谷胱甘肽过氧化物酶的作用为乒乓机制。并观察了一些金属离子和烷化剂对该酶具有不同程度的抑制作用。; 徐蘅裘奇胡梅清; 关键词：人肝谷胱甘肽过氧化物酶动力学过氧化反应

人血超氧化物歧化酶的化学修饰被引量：3: 1993年; 应用右旋糖苷及聚蔗糖对人血SOD进行化学修饰。人血SOD分别经右旋糖苷及聚蔗糖两种修饰剂共价修饰后,仍保留其紫外、荧光吸收特性及SOD的酶活性。人血SOD修饰物的抗胃蛋白酶酶解能力、热稳定性、耐酸性均有显著提高。; 胡梅清陈彤方胜吴梧桐李继珩; 关键词：超氧物歧化酶右旋糖苷

人血超氧化物歧化酶Ⅰ的理化性质研究: 1989年; 超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase,简称SOD）（EC1.15.1.1）广泛存在于生物体内,能催化超氧阴离子自由基（O₂^·）产生歧化反应,生成O₂和H₂O₂,是生物体O₂^·的天然清除剂。其抗辐射、抗肿瘤、抗病毒及抗衰老作用已引起国内外学者高度重视。; 李继珩张利吴梧桐胡梅清; 关键词：抗衰老作用清除剂抗病毒柱层析歧化反应蛋白溶液

大肠杆菌L－天门冬酰胺酶Ⅱ基因的高效表达被引量：20: 1996年; 用一对与大肠杆菌天门冬酰胺酶Ⅱ基因（ＡｎｓＢ）两侧序列互补的寡核苷酸Ｅ１，Ｅ２作引物，以大肠杆菌野生株ＣＰＵ２１０００９的染色体ＤＮＡ为模板，通过ＰＣＲ扩增得到约１．２ｋｂ的ＤＮＡ片段，将此片段插入ｐＫＫ２３３－２的ｔａｃ启动子下游，转化不同的大肠杆菌宿主菌株，结果表明以ＣＰＵ２１０００９为宿主菌时，转化子的酶表达量最高，重组Ｌ－天门冬酰胺酶占菌体总蛋白４８．３％，发酵液酶活力达４００ＩＵ／ｍｌ；比活为４８ＩＵ／ｍｇ蛋白，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示纯化后的重组Ｌ－天门冬酰胺酶分子量与天然酶相同，均为１４０ＫＤ。; 刘景晶李晶吴梧桐胡梅清; 关键词：药物大肠杆菌基因表达

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胡梅清

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