目的线粒体功能障碍是阿尔茨海默病(AD)发生发展过程中非常重要的机制之一。线粒体自噬可以清除受损的线粒体。磷酸酶及张力蛋白同源物诱导的蛋白激酶1(PINK1)是一种与线粒体自噬相关的蛋白激酶。本研究主要观察蛋白激酶PINK1对Aβ25-35所致阿尔茨海默病痴呆模型大鼠病理学的影响。方法体内采用采用5月龄雄性SD大鼠和同月龄纯合雄性PINK1-/-大鼠(SD背景),侧脑室注射Aβ25-35。采用Y迷宫、新物体辨别实验、避暗实验和Morris水迷宫实验考察学习记忆和认知能力,转棒实验和自发活动考察运动功能。ELISA检测大鼠海马炎症因子IL-18,IL-1β和TNF-α的含量,Western蛋白印迹法检测海马突触相关蛋白PSD95和SYP的表达,免疫荧光和Western蛋白印迹法检测Neun的表达。用线粒体分离试剂盒提取线粒体,观察LC3与线粒体共定位。体外采用si RNA下调PC12细胞PINK1表达,再加入Aβ25-35,确认PINK1下调后是否加重了Aβ25-35对细胞的损伤:观察细胞形态,考察细胞死亡率;JC-1染色考察线粒体膜电位;LPS作用于BV2细胞一定时间后,取条件培养基,加入PC12细胞(含PINK1 si RNA组),考察细胞死亡率,确认PINK1 si RNA组细胞是否对LPS诱导小胶质细胞所释放的炎症因子更敏感。结果行为学实验结果显示,PINK1-/-对动物的运动能力没有影响,但在避暗实验中与SD和SD+Aβ25-35组大鼠相比,PINK1-/-+Aβ组大鼠错误次数显著增加。与SD组大鼠相比,PINK1-/-、PINK1-/-+Aβ25-35组SYP,PSD95和Neun的表达显著减少;炎症因子IL-18,IL-1β和TNF-α的含量显著增加;PINK1-/-组LC3与线粒体的共定位显著减少。PINK1-/-+Aβ组LC3与线粒体的共定位显著增加。体外实验结果显示,与单独孵育Aβ25-35组细胞相比,PINK1沉默后给予Aβ25-35细胞生存率显著降低;线粒体膜电位显著降低;且PINK1沉默后给予条件培养基,细胞生存率也显著降低。结论PINK1敲除加重了Aβ25-35所致AD模�
