王海涛
- 作品数：35 被引量：78H指数：4
- 供职机构：郑州大学第一附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金河南省科技攻关计划河南省医学科技攻关计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生文化科学生物学更多>>
- 微小RNA-608在人骨髓间充质干细胞成骨与成脂肪分化动态平衡中的作用被引量：2
- 2019年
- 目的检测微小RNA(miRNA,miR)-608在人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)向成骨细胞和成脂肪细胞分化过程中的表达变化以及对hBMSCs向成骨细胞和成脂肪细胞分化的调控作用机制.方法利用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)分别检测hBMSCs向成骨细胞以及成脂肪细胞分化过程中miR-608的表达变化.细胞计数试剂盒(CCK-8)和克隆形成实验检测miR-608对hBMSCs增殖的影响.利用生物信息学软件分析miR-608的靶基因.利用双荧光素酶报告基因检测miR-608与靶基因的结合.利用蛋白质印迹法(Western blot)检测miR-608对靶基因蛋白水平的表达变化.利用茜素红染色和油红O染色检测miR-608对hBMSCs向成骨细胞和成脂肪细胞分化的功能的影响.应用SPSS 17.0统计软件分析,数据以均值±标准差(Mean±SD)表示.两样本均数比较采用独立样本t检验,多样本均数比较采用单因素方差分析.结果 FQ-PCR检测显示在hBMSCs向成骨细胞分化第3天miR-608表达量下降,与对照组(1.00±0.11)比较,成骨诱导分化组(0.20±0.09)中miR-608的表达显著性降低,差异有统计学意义(t=9.479,P<0.01).FQ-PCR检测发现在hBMSCs向成脂肪细胞分化第3天表达量升高,与对照组(1.00±0.09)比较,成骨诱导分化组(4.36±0.55)中miR-608的表达显著性降低,差异有统计学意义(t=10.442,P<0.05).CCK-8和克隆形成实验检测发现miR-608抑制hBMSCs的增殖.生物信息学软件分析miR-608与Runt相关基因2(Runx2)以及音猬因子(SHH)3'端非编码区(3'UTR)区有结合位点.双荧光素酶报告基因检测可见与miR-608 mimics NC组(1.00±0.22)比较,miR-608 mimcs组(0.21±0.11)荧光素酶活性显著降低,差异有统计学意义(t=5.542,P<0.05).Western blot检测发现miR-608可以抑制Runx2和SHH蛋白水平的表达.茜素红染色检测显示较miR-608 mimics NC组(1.00±0.14)比较,miR-608 mimcs组(0.32±0.12)茜素红染色显著降低,差异有统计学意义(t=6.387,P<0.05).油红O染色检测发现与miR-608 mimic
- 王海涛王义生殷力张翼李劲峰李月白
- 关键词：人骨髓间充质干细胞成骨分化成脂肪分化微小RNA
- Nutlin3和JQ1协同抗骨肉瘤的作用
- 2018年
- 目的 探讨Nutlin3和JQ1在骨肉瘤细胞中是否具有协同的抗骨肉瘤作用.方法 采用1.0μmol/L Nutlin3单药,0.5μmol/L JQ1单药以及两药联合处理骨肉瘤细胞,通过细胞计数试剂盒（CCK-8）细胞活性检测、协同效应分析、流式细胞仪检测凋亡和Western blot实验,检测Nutlin3 和JQ1两种药物的协同抗骨肉瘤效应,并探讨其分子机制.结果 CCK-8结果显示,在SJSA-1细胞株中,Nutlin3和JQ1单药均能够一定程度的抑制骨肉瘤细胞活性,半数抑制浓度（IC50）值分别为3.7 μmol/L和1.0 μmol/L;但两药联合处理后抗癌效果显著提高,IC50值减低至0.12 μmol/L;采用联合作用指数研究表明在携带有野生型p53的SJSA-1骨肉瘤细胞中CI值为0.18,在p53缺失的Saos-2骨肉瘤细胞中CI值为0.94,表明两个抗癌制剂具有高度协同作用,且这两种新型抗癌制剂的协同作用依赖于p53的活性.流式细胞仪检测凋亡发现1μmol/L Nutlin3和0.5μmol/L JQ1单药分别诱导15％和37％的细胞发生凋亡,两者联合能够诱导80％的细胞发生凋亡,显著高于单药的凋亡作用（P=0.000）,表明两者联合能够诱导大量骨肉瘤细胞发生凋亡.Western blot结果显示Nutlin3和JQ1联合应用能够激发半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase）-3高度活化,导致PARP绝大部分裂解,促进了凋亡信号的活化;同时也发现,Nutlin3和JQ1联合应用能够促进p53的表达升高.结论 新型抗癌制剂Nutlin3和JQ1具有明显的协同抗骨肉瘤作用,这种协同作用具有p53依赖性.
- 张翼时程程张华鹏王海涛殷力
- 关键词：骨肉瘤P53脱噬作用
- 膝关节骨性关节炎病变区软骨细胞来源的细胞外囊泡促进膝关节骨性关节炎进行性发展的机制
- 2023年
- 目的探究膝关节骨性关节炎(OA)患者来源病变区域软骨细胞(OA-L-CH)分泌的细胞外囊泡(OA-L-CH-EVs)对非病变区域软骨细胞的OA发展的影响机制。方法软骨细胞来源于郑州大学第一附属医院10例因OA需行膝关节置换术的患者,提取病变区域(OA-L-CH)和非病变区区域(OA-NL-CH)软骨细胞进行传代培养,运用差速离心法+超速离心法提取EVsOA-L-CH,用蛋白质印迹法(Western blot)检测p65和p38在OA-NL-CH和OA-L-CH中的表达水平。将OA-NL-CH与EVsOA-L-CH共培养作为实验组,对照组(OA-NL-CH)加入等量的磷酸盐缓冲液(PBS),分别用细胞计数试剂盒(CCK-8)和半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶法(Caspase)-3/7检测EVsOA-L-CH对正常软骨细胞的增殖、凋亡的影响。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测软骨合成基因和炎性因子基因表达,采用免疫荧光检测(IF)检测实验组的p-p65和p-p38 MAPK磷酸化水平。采用单因素方差分析和t检验进行统计学分析。结果电子显微镜下可观察到提取物为粒径范围在50~200 nm、大小不等的膜性囊泡结构,Western blot结果显示提取物表达CD9、CD63标志蛋白。镜下可见PKH_(2)6标记后的EVs被摄取到软骨细胞内。Western blot结果显示,EVsOA-L-CH促进p38MAPK和p65核因子-κB(NF-κB)的磷酸化。CCK-8法检测软骨细胞的实验组(0.58±0.13)增殖活性明显低于对照组(1.0,t=5.889,P<0.01)。Caspase-3/7检测实验组(1.33±0.19)的细胞凋亡数量高于对照组(1.0,t=2.931,P<0.05)。RT-PCR检测结果显示实验组[B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)](0.65±0.09)、ACAN(0.80±0.12)、Sox9(0.77±0.14)软骨合成基因的表达明显低于对照组(bcl-2,1.0,t=7.591,P<0.001;ACAN,1.0,t=3.494,P<0.05;Sox9,1.0,t=3.081,P<0.05),实验组(1.19±0.15)炎性因子基因白细胞介素(IL)-1B表达明显高于对照组(1.0,t=2.477,P<0.05)。免疫荧光检测p38(实验组2.33±0.58,对照组1.0,t=3.954,P<0.01)、p65(实验组6.85±1.54,对照组1.0,t=6.564,P<0.001)�
- 石翔宇李树山王海涛韩煜赵洪波董懿新郭沛殷力
- 关键词：膝关节骨性关节炎软骨细胞
- 来自人骨髓间充质干细胞低表达微小RNA-127-5p的细胞外囊泡促进激素性股骨头坏死疾病进展
- 2023年
- 目的观察激素性股骨头坏死(SONFH)患者来源骨髓间充质干细胞(BMSCs)分泌的低表达微小RNA(miR)-127-5p细胞外囊泡(EVs)对正常BMSCs增殖及成骨分化的影响。方法骨髓来源于郑州大学第一附属医院10例需行全髋关节置换手术的患者(激素性股骨头坏死5例,非股骨头坏死5例),提取其中的BMSCs进行培养。使用差速离心法分离SONFH-BMSCs-EVs并用蛋白质印迹法(Western blot)和纳米颗粒跟踪分析(NTA)鉴定。将正常BMSCs中加入SONFH-BMSCs-EVs作为实验组,对照组加入等量磷酸盐缓冲液(PBS),用噻唑蓝(MTT)法检测SONFH-BMSCs-EVs对BMSCs的增殖的影响。分别取两组第3代BMSCs,提取总RNA,使用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测miR-127-5p的表达差异。取第3代BMSCs进行成骨诱导,诱导过程中加入miR-127-5p mimic、miR-127-5p NC,分别用茜素红染色、MTT法、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3/7活性细胞凋亡检测,来检验miR-127-5p对BMSCs增殖及成骨分化的影响。采用单因素方差分析和t检验进行统计学分析。结果SONFH-BMSCs-EVs为大小不均的圆形膜性囊泡,粒径范围在40~200 nm之间且表达CD63、CD9标志蛋白。共聚焦显微镜下显示EVs可以被BMSC摄取。MTT法显示实验组(0.98±0.20)增殖活性低于对照组(0.40±0.13,t=5.39,P<0.01)。RT-PCR显示实验组miR-127-5p的相关表达(1.03±0.21)明显低于对照组(0.58±0.12,t=4.05,P<0.01)。茜素红染色显示SONFH+miR-127-5p mimic(Smm)组成骨分化染出红色的阳性率远远高于SONFH(S)组。MTT法和Caspase-3/7活性细胞凋亡检测显示Smm组相较于S组,促进增殖(Smm组1.51±0.18,S组1.09±0.17,t=3.84,P<0.01),减少凋亡(Smm组0.59±0.12,S组1.02±0.12,t=5.56,P<0.01)。结论SONFH患者来源的BMSCs分泌的低表达miR-127-5p EVs可以抑制正常BMSCs增殖及成骨分化。
- 赵洪波李树山王海涛韩煜孔智恒石翔宇董懿鑫郭沛殷力
- 关键词：激素性股骨头坏死骨髓间充质干细胞
- 不同阶段脓毒症对非去极化肌松药药效学的影响被引量：1
- 2020年
- 目的观察不同阶段脓毒症对大鼠膈肌顺式阿曲库铵和罗库溴铵的药效学影响。方法健康雄性SD大鼠48只(郑州大学基础医学院实验动物中心提供),周龄8周,体重220~250 g,随机分为4组,每组12只:空白对照组(Con)、假手术组(Sham)、盲肠结扎穿孔后9 h组(CLP9)、盲肠结扎穿孔后18 h组(CLP18)。采用序贯给药的方法,应用左膈神经-半膈肌标本,由生物信号采集处理系统记录分析数据,得到两种肌松药的累积浓度-效应曲线,从而计算出50%抑制浓度(IC50)、LogiC50、斜率(slope)。组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素重复测量方差分析,进一步组间两两比较采用SNK-q检验。结果与对照组比较,两种药物Sham组IC50LogiC50(顺阿曲库铵0.951±0.009比0.963±0.003,罗库溴铵0.887±0.001比0.890±0.002),斜率(顺阿曲库铵-5.461±0.028比-5.435±0.027,罗库溴铵-1.967±0.055比-1.971±0.054)差异无统计学意义(顺阿曲库铵:t=1.157、0.667,P>0.05;罗库溴铵:t=1.064、0.139,P>0.05);与假手术组比较,CLP9、CLP18组顺阿曲库铵IC50LogiC50增大(CLP91.259±0.005比0.963±0.003,CLP181.496±0.007比0.963±0.003),斜率减小(CLP9-3.262±0.035比-5.435±0.027,CLP18-2.731±0.027比-5.435±0.027),差异有统计学意义(CLP9:t=46.810、48.610,P<0.01;CLP18:t=63.480、69.680,P<0.01);与CLP9组比较,CLP18组顺阿曲库铵IC50LogiC50增大(1.496±0.007比1.259±0.005),斜率减小(-2.731±0.027比-3.262±0.035),差异有统计学意义(t=24.370、11.930,P<0.01);与假手术组比较,CLP9、CLP18组罗库溴铵IC50LogiC50增大(CLP91.125±0.054比0.890±0.002,CLP181.302±0.068比0.890±0.002),斜率增大(CLP9-2.903±0.009比-1.971±0.054,CLP18-3.291±0.068比-1.971±0.054),差异有统计学意义(CLP9:t=10.540、41.040,P<0.01;CLP18:t=14.710、36.910,P<0.01);与CLP9组比较,CLP18组罗库溴铵浓度效应曲线右移,IC50LogiC50增大(1.302±0.068比1.125±0.054),斜率增大(-3.291±0.068比-2.903±0.009),差异有统计学意义(t=4.978、13.780,P<0.01)�
- 王海涛宋瑞鹏王勇杨建军艾艳秋王中玉
- 关键词：脓毒症膈肌顺式阿曲库铵罗库溴铵
- 牛津Oxford活动平台内侧单髁置换后外侧和髌股间室骨关节炎的中远期评价被引量：4
- 2021年
- 背景:单髁置换以其创伤小、康复快、花费少及本体感觉好等优点,越来越受到重视。而活动平台内侧单髁置换后,外侧间室和髌股间室骨关节炎中远期进展的研究较少。目的:评估活动平台内侧单髁置换后外侧和髌股间室骨性关节炎的进展情况。方法:回顾性分析了2011年1月至2016年1月在郑州大学第一附属医院骨科行活动平台单髁置换的95例患者资料。根据术前和末次随访膝关节X射线片,运用Kellgren-Lawrence分级评估外侧间室骨关节炎的进展情况,其中进展组32例,未进展组63例。运用Kellgren-Lawrence分级及是否有膝前痛症状评估髌股间室骨关节炎的进展情况,其中进展组41例,未进展组54例。比较骨关节炎进展组和未进展组的影像学和临床特征差异,分析术后效果与外侧和髌股间室骨关节炎进展的关系。结果与结论:①末次随访,与未进展组比较,外侧间室骨关节炎进展组患者美国特种外科医院评分降低(P<0.05),目测类比评分和人工关节被遗忘评分升高(P<0.05);②活动平台内侧单髁置换后外侧间室骨关节炎进展的发生率(33.7%)低于髌股间室骨关节炎进展的发生率(43.2%),外侧间室骨关节炎进展与髌股间室骨关节炎进展之间无显著相关性(P>0.05);③术后随访5-10年,均未出现感染、聚乙烯垫片脱位、假体周围骨折等并发症;④活动平台内侧单髁置换后中远期效果主要受外侧间室骨关节炎进展影响,而不受髌股间室影响。
- 乔仁秋殷力张翼王海涛夏培格孔智恒
- 关键词：单髁置换骨关节炎
- 丙泊酚对猪心肺复苏模型S100β蛋白浓度及其表达的影响
- 2021年
- 目的探讨丙泊酚在小型猪心肺复苏模型中对血清S100β蛋白浓度及其表达的影响。方法小型猪12只,采用电击致颤制作心跳骤停-心肺复苏模型,采用随机数字表法分为丙泊酚组和对照组(10%脂肪乳剂),心跳骤停4 min开始复苏,自主循环恢复(ROSC)后分别给予丙泊酚1 mg/kg,随后按照丙泊酚10 mg/(kg·h)持续静脉泵注6 h,对照组给予同等量的10%脂肪乳剂,观察6 h拔除气管插管,24 h后静脉注射氯化钾处死,取大脑皮层,采用双抗夹心酶联免疫分析法(ELISA)测定两组基线、RSOC即刻(0 min)、15 min、1、2、4、6、24 h血清S100β蛋白浓度,采用免疫组织化学法测定大脑皮层S100β蛋白的表达,统计小型猪24 h存活率。两组间及组内不同时间点均采用t检验。结果S100β蛋白水平在6 h上升并达峰值,丙泊酚组血清S100β浓度[(461.58±16.72)ng/L]较对照组[(560.82±30.857)ng/L]上升较少,两组差异有统计学意义(t=-7.341,P<0.05),24 h丙泊酚组血清S100β浓度[(383.82±29.586)ng/L]较对照组[(463.97±20.463)ng/L]上升低,两组差异有统计学意义(t=-6.553,P<0.05),大脑皮层S100β蛋白表达阳性细胞丙泊酚组[(7.2±0.5)个/HP]与对照组[(10.8±0.8)个/HP,t=7.707,P<0.05],差异有统计学意义。结论心肺复苏后静脉输注1 mg/kg丙泊酚,后持续6 h静脉输注丙泊酚10 mg/(kg·h),能降低血清中S100β蛋白的浓度及S100β蛋白在大脑皮层的表达,但对于24 h存活率并无明显影响。
- 赵颖莹王海涛王莹艾艳秋杨建军
- 关键词：心肺复苏丙泊酚脑保护
- 睡眠剥夺对盲肠结扎穿孔术脓毒症小鼠海马神经元和小胶质细胞的影响
- 2023年
- 目的探讨睡眠剥夺对盲肠结扎穿孔术脓毒症小鼠海马神经元和小胶质细胞的影响。方法24只8周龄C57BL/6小鼠购自河南省实验动物中心,随机分为3组(n=8):正常对照组(control)、盲肠结扎穿孔术组(CLP)、盲肠结扎穿孔术+睡眠剥夺组(CLP+SD),分别给予无处理,盲肠结扎穿孔术和盲肠结扎穿孔术后睡眠剥夺48 h处理。术后48 h小鼠心脏灌流处死全脑剥离,提取小鼠海马进行免疫荧光染色及共聚焦观察,并记录神经元Fluoro Jade B和离子钙接头分子1(Iba1)阳性细胞数。组间比较采用单因素方差分析(ANOVA),两两比较采用独立样本t检验。结果Control组、CLP组和CLP+SD组的海马齿状回Iba1阳性细胞数分别为(36.75±8.71)、(78.50±11.94)、(147.38±43.40)个,同control组比较,CLP组和CLP+SD组Iba1阳性细胞数均显著升高(F=41.75、110.60,P<0.05),且CLP+SD组的Iba1阳性细胞数比CLP组显著增加(F=68.88,P<0.05)。Control组、CLP组和CLP+SD组的海马CA区神经元Fluoro Jade B阳性细胞数分别为(106.75±19.62)、(167.25±16.18)、(211.13±54.40)个,同control组比较,CLP组和CLP+SD组海马神经元Fluoro Jade B平均阳性细胞数均显著升高(F=60.50、104.40,P<0.05)且CLP+SD组的Fluoro Jade B阳性细胞数比CLP组显著增加(F=43.88,P<0.05)。结论睡眠剥夺联合盲肠结扎穿孔术可导致小鼠术后48 h海马小胶质细胞激活和退变神经元数量增加。
- 邵华王海涛曹彬杨建军
- 关键词：睡眠剥夺脓毒症海马小胶质细胞
- 粗通道髓芯减压联合同种异体骨植入术对早期股骨头坏死的疗效
- 2019年
- 目的探讨粗通道髓芯减压术联合同种异体骨植入治疗早期股骨头坏死(ONFH)的临床效果。方法采用粗通道髓芯减压术联合同种异体骨材料植入治疗早期ONFH 28例(37髋),Ⅰ-A、Ⅰ-B、Ⅱ-A、Ⅱ-B期分别为10、15、3、9髋。术后定期行X线检查,术前、术后及随访时对髋关节进行Harris评分、视觉模拟评分(VAS)及X线评估,根据术后患者临床表现及X线结果评价术后疗效。结果所有患者术后髋关节症状均获得缓解,髋关节活动功能明显改善。与术前相比,各期患者术后1 a的Harris评分均提高(均P<0.05),疼痛评分均下降(均P<0.05)。根据术后X线片显示,减压通道内可见成骨现象(出现新生骨柱),截止末次随访,X线片显示股骨头外形均未出现塌陷。结论粗通道髓芯减压术联合同种异体骨植入治疗早期ONFH是一种有效的方法,早期效果优良。
- 李邓殷力王秀利王海涛张翼李弘帅
- 关键词：股骨头坏死同种异体骨
- 氨甲环酸不同二联用药方式对全膝关节置换手术失血的影响被引量：2
- 2020年
- 目的 探讨氨甲环酸(TXA)不同二联用药方式对全膝关节置换术(TKA)失血的影响.方法 前瞻性纳入2018-12—2019-11间郑大一附院骨科一病区行单侧TKA的患者,根据TXA不同二联用药方式分为装假体前静滴联合关节腔多点注射TXA组(联合注射组),装假体前静滴联合关节腔灌注TXA组(联合灌注组),装假体前静滴联合术后3 h静滴TXA组(联合静滴组),比较3组患者的基线资料和手术总失血量、引流量、隐性失血量、最大血红蛋白下降值、输血率、输血量,以及下肢深静脉血栓形成(DVT)、肺栓塞(PE)等并发症发生情况.结果 共纳入90例患者,每组30例.3组患者的基线资料差异无统计学意义(P>0.05).联合灌注组的总失血量、引流量、最大血红蛋白下降值明显低于联合注射组、联合静滴组,差异有统计学意义(P<0.05);联合灌注组、联合静滴组间的隐性失血量差异无统计学意义(P>0.05),但均小于联合注射组,差异有统计学意义(P<0.05).3组的输血率和输血量差异无统计学意义(P>0.05),且均未发生DVT、PE等并发症.结论 TKA术中TXA静滴联合关节腔灌注,可有效减少手术总失血量、引流量、隐性失血量,以及最大血红蛋白下降值,且不增加DVT、PE等并发症发生率.
- 刘金磊殷力张翼王海涛李庄严夏培格乔仁秋
- 关键词：全膝关节置换术氨甲环酸局部灌注失血量
