王临旭 作品数:64 被引量:199 H指数:7 供职机构: 第四军医大学唐都医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 陕西省自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 文化科学 更多>>
卡马西平对癫痫患儿甲状腺激素的影响 王临旭关键词:卡马西平 癫痫 甲状腺激素 中国株HIV-1外膜蛋白真核表达载体的构建与表达 被引量:3 2004年 To construct the eukaryotic expression vector of HIV-1 gp120 gene and observe its expression in vitro, the recombinant expression vector pVAX1GP120 was constructed by inserting the gp120 gene into the eukaryotic expression vector pVAX1. The pVAX1GP120 was transfected into Vero cells by lipofectamine and the expressed product was detected by indirect immunofluore- scence. Restriction enzymes digestion analysis and sequencing results revealed that the recombinant expression vector pVAX1GP120 has been constructed successfully. The indirect immunofluorescence result showed green fluorescence on the membrane of transfected cells. The constructed eukaryotic expression vector of HIV-1 gp120 can be expressed in vitro, which lay the foundation for the further study of HIV-1 DNA vaccine. 王福祥 孙永涛 王临旭 王久平 王平忠 白雪帆 黄长形关键词:外膜蛋白 真核表达载体 HIV-1 获得性免疫缺陷综合征 以溶血性贫血、血尿为首发症状的肝豆状核变性1例分析 被引量:3 2004年 王临旭 白宪光 冯志华关键词:肝豆状核变性 溶血性贫血 血尿 首发症状 HLD 铜代谢障碍性疾病 MAP30苦瓜抗HIV蛋白对细胞内HBeAg表达抑制作用的定量分析 被引量:18 2003年 目的 :研究Mr 为 30 0 0 0的苦瓜抗HIV蛋白 (MAP30 )对 2 .2 .15细胞内HBV基因表达的抑制作用。方法 :将HBVDNA转染的人肝癌细胞株 2 .2 .15 ,在MAP30存在的情况下培养后 ,进行间接免疫荧光染色 ,用共聚焦技术定量分析细胞内HBeAg的表达。结果 :与对照组相比较 ,MAP30培养的细胞内HBeAg荧光量明显减少。结论 :MAP30对 2 .2 .15细胞内HBeAg的表达有明显的抑制作用。 王九平 王临旭 孙永涛 白雪帆 李谨革 陈伟红 孙利 骆抗先关键词:乙型肝炎病毒 基因表达 共聚焦显微镜 中国株HIV-1外膜蛋白基因疫苗诱导免疫小鼠免疫应答的实验研究 2004年 目的 :构建中国流行株HIV 1外膜蛋白 (gp12 0 )基因疫苗并接种小鼠 ,评价其诱导的体液和细胞免疫应答。方法 :将HIV 1gp12 0基因插入到真核表达载体pVAX1中 ,构建重组真核表达质粒pVAX1 GP12 0 ,并经EcoRI和PstI双酶切以及测序鉴定。同时以pVAX1 GP12 0和空载体pVAX1分别免疫BALB/c小鼠 ,采用ELISA检测免疫小鼠的特异性抗体和IFN γ水平 ,用MTT比色法检测免疫小鼠脾淋巴细胞的增殖 ,用乳酸脱氢酶 (LDH)试验检测小鼠特异性细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)的应答。结果 :酶切及测序结果表明 ,成功地构建了HIV 1gp12 0基因疫苗。与空载体pVAX1组相比较 ,pVAX1 GP12 0免疫组小鼠血清抗HIV 1gp12 0抗体的滴度和IFN γ的水平均升高 ,两者差异显著 (P <0 .0 1)。pVAX1 GP12 0免疫组小鼠脾淋巴细胞增殖的刺激指数 (SI)及特异性CTL的杀伤活性 ,均高于空载体pVAX1组 (P <0 .0 1)。结论 :构建了针对我国HIV 1流行株的gp12 0基因疫苗。以其免疫BALB/c小鼠可诱导特异性体液和细胞免疫应答 ,为进一步将其用于我国的HIV的治疗奠定了基础。 王福祥 孙永涛 孙永年 徐哲 王临旭 白雪帆 黄长形关键词:HIV-1 外膜蛋白 核酸疫苗 免疫 慢性乙型肝炎病毒感染自然史中表面抗原水平的研究 被引量:7 2011年 目的研究陕西地区慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染自然史中乙型肝炎表面抗原(Hb-sAg)的变化情况。方法 153名患者分为免疫耐受期组(IT)、免疫清除期组(IC)、非/低水平复制期组(LR)、乙型肝炎e抗原(HbeAg)阴性肝炎组(ENH)、HBeAg阳性肝硬化组、HBeAg阴性肝硬化组。HBsAg滴度采用Abbott免疫化学发光检测仪(AXSYM)测定。分析每个阶段HBsAg滴度与HBVDNA、ALT的相关性。结果慢性HBV感染不同阶段HBsAg滴度的中位数不同,分别为IT131.67S/N,IC91.43S/N,LR70.92S/N,ENH82.61S/N,HBeAg阳性肝硬化组78.46S/N,HBeAg阴性肝硬化组65.93S/N。HBsAg滴度在IT组最高,HBeAg阴性肝硬化组最低。HBsAg滴度水平仅在IC组中与HBVDNA相关,不同阶段HBsAg滴度水平与ALT均无相关性。结论在慢性HBV感染自然史不同阶段HBsAg水平有明显差异。但仅在IC期HBsAg滴度水平与HBVDNA定量有相关性。HBsAg滴度是否能作为慢性乙型肝炎治疗反应的预测因子尚需更多的纵向研究加以证实。 王临旭 黄长形 李新红 王毕娟 尹晨关键词:肝硬化 苦瓜子抗人免疫缺陷病毒蛋白30的分离纯化及其切割超螺旋DNA的活性研究 被引量:4 2004年 目的 :分离纯化苦瓜子抗人免疫缺陷病毒 (HIV)蛋白 30 (MAP30 )并对其切割超螺旋DNA的活性作初步分析。 方法 :采用离子交换层析及凝胶过滤层析等方法从苦瓜子中分离纯化MAP30 ,并经SDS PAGE、Westernblots等鉴定 ,将质粒 pUC18与不同浓度MAP30孵育 ,进行琼脂糖电泳分析其切割DNA的活性。 结果 :得到相对分子质量为 30 0 0 0的目的蛋白MAP30 ,证实其具有使超螺旋DNA断裂为缺口环状及线状DNA的活性。 结论 :MAP30对DNA(RNA) 王临旭 孙永涛 杨为松 白雪帆 黄长形 王福祥关键词:植物蛋白 分离纯化 超螺旋DNA 人α防御素的稳定表达和活性鉴定 被引量:2 2005年 目的:制备有较高生物学活性的分泌型人α防御 素1与α防御素3,并初步鉴定其抗菌活性;方法:将真核表 达质粒pcDNA3.1/V5 His TOPO HNP1,3与含有dhfr基因的 质粒pDCH1P11共转染入CHO dhfr ,ELISA检测到培养上清 中重组蛋白的表达,对阳性表达的细胞进行G418筛选,对其 中9个表达量较高的阳性克隆进行氨甲喋呤(MTX)加压扩 增,ELISA法、RT PCR法及间接免疫荧光(IFA)分析蛋白表 达情况,并同步测定其体外抗菌活性.结果:α防御素1的表 达量是18.85~47.46mg/L·48h·106个细胞;α防御素3 的表达量是16.89~35.57mg/L·48h·106个细胞.用RT PCR从稳定表达的细胞株中扩增出全长约303bp的片段; IFA显示稳定转染的细胞胞质核周质中有强的绿色荧光;K B 纸片琼脂扩散法显示α防御素1,3在大肠埃希菌MH平板上 形成了明显的抑菌圈.结论:成功高效地表达了分泌型的α 防御素1,3,并具有良好的生物学活? 刘娟 翟嵩 杜德伟 王临旭 王少扬 汪定成 孙永涛关键词:细胞 甲氨喋呤 AIDS的高效抗反转录病毒治疗指南解读 被引量:5 2010年 本文对高效抗反转录病毒治疗的时机选择、抗HIV药物种类、治疗方案的选择及治疗失败的判定等问题进行综述,以期更好地应用于临床实践。 孙永涛 王临旭关键词:获得性免疫缺陷综合征 抗反转录病毒治疗 含人APOBEC3F启动子荧光素酶报告基因载体的构建 2010年 目的构建含人载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3F(apolipoprotein B mRNA editing enzyme,catalytic polypeptide-like3F,APOBEC3F)基因启动子的萤光素酶报告基因载体。方法应用5'cDNA末端快速扩增分析(5'rapid am-plification of cDNA ends,5'RACE)技术确定APOBEC3F转录起始位点,利用PCR技术扩增人APOBEC3F启动子序列,构建含人APOBEC3F启动子的萤光素酶报告基因载体,行双酶切及测序鉴定,并通过双萤光素酶报告基因系统检测启动子活性。结果 APOBEC3F基因转录起始位点位于GenBank已公布的APOBEC3F cDNA起始位置上游13个核苷酸处,测序结果表明克隆获得的APOBEC3F基因启动子序列与GenBank报道一致。重组载体pGL3-A3F-Prom组F/R值(0.342082±0.023516)与空载体pGL3-basic组(0.007871±0.002357)相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论成功构建了含人APOBEC3F基因启动子的萤光素酶报告基因载体,为更深入研究APOBEC3F基因转录调控机制奠定了基础。 赵柯 王临旭 庄严 黄德东 李媛 康文臻 孙永涛关键词:HIV-1 反转录