牛思博
- 作品数：3 被引量：14H指数：2
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：黑龙江省科技攻关计划国家科技支撑计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 携带非典型cpb2基因牛源A型产气荚膜梭菌重组α毒素的免疫保护性研究被引量：4
- 2012年
- 为验证重组α毒素对携带非典型cpb2基因的A型产气荚膜梭菌的免疫保护性,本研究应用PCR技术,从某牛场牛源A型产气荚膜梭菌G1分离株中扩增出1 194 bp的α毒素编码基因(cpa)和795 bp的β2毒素编码基因(cpb2)。经BLAST分析显示,G1分离株携带的cpb2基因与14个菌株的非典型cpb2基因的氨基酸序列同源性为95.1%～98.9%,与典型cpb2基因(L77695)的氨基酸序列同源性为61.7%。这表明,G1的cpb2基因为非典型cpb2基因。同时分别将cpa和cpb2基因扩增产物克隆于原核表达载体中,构建重组表达质粒pET-a和pET-b2,重组菌经IPTG诱导表达重组蛋白,将其纯化后单独及联合免疫小鼠进行免疫保护试验。结果显示,单独免疫重组α毒素蛋白组以及联合免疫重组β2毒素蛋白组的小鼠,均可以抵抗至少6倍最小致死量(MLD)的G1外毒素(包含α毒素和非典型β2毒素)的攻击,也可以完全抵抗至少6 MLD的G2外毒素(不包含β2毒素)的攻击。表明,重组α毒素蛋白对含有及不含有非典型β2毒素的A型产气荚膜梭菌均具有良好的免疫保护作用。
- 德艳艳姜志刚牛思博孙刚于力
- 关键词：A型产气荚膜梭菌
- 重组牛源荚膜A型多杀性巴氏杆菌脂蛋白E的免疫保护性研究被引量：9
- 2013年
- 为鉴定多杀性巴氏杆菌脂蛋白E的免疫保护性,本研究从牛源荚膜A型多杀性巴氏杆菌PM-HLJ株的基因组DNA中扩增出大小为1 011 bp的脂蛋白E编码基因(PlpE),经序列测定显示,其氨基酸序列与A型多杀性巴氏杆菌参考株PlpE序列一致性为95.83%。将PM-HLJ的PlpE基因克隆于表达质粒pET-30a(+)并诱导表达,将表达的重组脂蛋白E纯化后经腹腔免疫小鼠,间接ELISA检测结果显示各免疫组均产生了针对重组脂蛋白E的IgG抗体,免疫保护试验显示,当小鼠免疫剂量为20μg、30μg、40μg和60μg时,保护率分别达到20%、40%、80%和100%。结果表明,牛源荚膜A型多杀性巴氏杆菌重组脂蛋白E具有良好的免疫保护作用。
- 牛思博姜志刚德艳艳于力
- 关键词：免疫保护
- 全沟硬蜱Salp15蛋白家族成员基因的克隆与融合表达被引量：1
- 2013年
- 为明确全沟硬蜱涎腺Salp15蛋白家族的基因表达情况，本文根据已知的Salp15序列设计引物对全沟硬蜱幼蜱的总RNA进行RT—PCR，克隆到可与莱姆病螺旋体外膜蛋白OspC互作的涎腺蛋白Salp15CDS序列，命名为I．Plarva5。对该蛋白做生物信息学预测，其肽链在N端含有信号肽，在c端含有与CD4分子的结合位点。与其他蜱种Salp15蛋白的相似性分别为：62．3％（北美的肩突硬蜱Ixodesscapularis）、74．5％（欧洲的篦子硬蜱Lricinusiric3）、59．4％（西伯利亚全沟硬蜱Lpersulcatus）、67．6％（日本地区的全沟硬蜱iperl）。将该cDNA序列分别加上EcoRI，SalI酶切位点，插入pMAL．c4X表达载体上，经IPTG诱导。在Transetta（DE3）上融合蛋白成功表达。此工作为研究全沟硬蜱的Salp15与莱姆病螺旋体，以及与宿主动物的相互关系奠定了基础。
- 王欣孙毅牛思博蒋宝贵
- 关键词：全沟硬蜱宿主免疫克隆
