沈国顺
- 作品数：179 被引量：622H指数：12
- 供职机构：沈阳农业大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金吉林省科技发展计划基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生文化科学更多>>
- PRRSV感染对猪外周血来源的树突状细胞免疫表型及Th1/Th2偏转潜能的影响被引量：2
- 2016年
- 为了研究PRRSV感染对猪外周血来源的树突状细胞成熟及Thl及Th2型细胞因子分泌水平的影响,进一步探讨PRRSV调控树状细胞Th1和Th2型免疫应答的潜在机制,揭示PRRSV感染对机体免疫机能的影响。我们从猪外周血分离单核细胞,诱导培养为树突状细胞后接种PRRSV共培养,显微镜观察细胞的形态,流式细胞术分析细胞表面的共刺激分子,半定量RT-PCR法检测Thl型细胞因子IL-12和Th2型细胞因子IL-10的mRNA转录水平。结果显示:经鉴定证实获得形态及表型典型的树突状细胞;流式分析结果表明PRRSV接种组树突状细胞表面的SLA-II-DR类分子、CD40分子、CD80分子均明显低于未接种组,差异极显著(P<0.01);RT-PCR半定量结果表明PRRSV接种组的IL-12mRNA转录水平低于未接种组,差异显著(P<0.05),而IL-10mRNA转录水平高于未接种组,差异显著(P<0.05)。结果表明:PRRSV感染影响树突状细胞的成熟,并能通过高效表达Th2型细胞因子IL-10降低Th2型细胞因子Th1而影响Thl/Th2的平衡。
- 刘金玲魏澍沈国顺赵玉军潘树德刘丽霞
- 关键词：树突状细胞免疫表型TH1/TH2
- 牛分枝杆菌MPB83基因的原核表达及免疫活性分析被引量：1
- 2005年
- 利用PCR技术,以牛型分枝杆菌(M.bovis)Vallee菌株的全基因组DNA为模板,扩增出了一条600bp的MPB83基因片段,将其克隆至pMD18T载体中,经核苷酸序列测定确证后,KpnI/EcoRI双酶切,然后亚克隆到原核表达载体pET30a的相同酶切位点,构建表达质粒pETMPB83,将鉴定的重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导后SDSPAGE检测表达情况,重组质粒pETMPB83在30kDa处有一特异表达带,与预计大小相符。经Ni柱纯化后,Westernblot检测纯化蛋白具有免疫活性,用纯化的该蛋白进行动物(兔)接种制备抗血清,用Westernblot和ELISA检测该抗血清的效价和特异性,结果表明特异性较好。
- 张秀华刘思国王春来郭设平郭洋邵美丽宫强彭永刚沈国顺
- 关键词：牛分枝杆菌BLOT抗血清ELISA
- 甲型H1N1与季节性H1N1流感病毒检测基因芯片的制备与初步应用被引量：10
- 2010年
- 建立DNA微列阵技术检测甲型H1N1和季节性H1N1流感病毒的方法,进而探讨该方法用于检测临床标本的可行性。通过生物医学数据库甲型H1N1流感病毒及季节性H1N1亚型流感HA与NA基因进行检索和筛选,应用分子生物学软件,进行序列分析、引物及探针设计,并进行验证。试验所设计的探针可以对甲型H1N1流感与季节性H1N1流感病毒进行区分,用该方法检测了长春市CDC送检的6份疑似甲型H1N1流感病毒临床病例,4份阳性,检测结果同实时荧光定量PCR方法一致。结果表明,利用本研究建立的DNA微列阵技术检测甲型H1N1流感病毒方法,特异性和敏感性强,可作为甲型H1N1流感病毒临床标本检测方法。
- 孙珊珊沈国顺田明尧鲁会军李昌李霄颜雯谭磊李洋韩佳丽金宁一
- 关键词：甲型H1N1流感病毒核酸探针
- 辽宁地区猪圆环病毒2型全基因克隆与序列分析被引量：3
- 2015年
- 本试验旨在为辽宁地区猪圆环病毒2型（PCV2）的流行病学调查及选择同源性高的毒株进行灭活疫苗研制奠定基础。采集辽宁沈阳、朝阳、铁岭、大连等地疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）患病仔猪的病料,利用PCR方法进行PCV2特异性检测,对10份阳性病料进行全基因组克隆和测序分析。结果显示,10株PCV2辽宁株全为强毒株,9株全长1 767bp,1株1 768bp,差异是在1 039bp处多了1个T碱基。与GenBank中的两株疫苗株（HM038034、JQ692110）的核苷酸同源性为95.1%~98.5%,在遗传进化树上,JHZ2为PCV2a型,其余9株毒株为PCV2b型,并且DLS38、LYD32、SYX7在同一小分支,都是同年2~3月发病。10株PCV2ORF2的氨基酸同源性为89.6%~100.0%,变异度大,存在35个变异点,以突变为主,唯一的糖基化位点（NYS）保守。结果表明,10株辽宁株PCV2抗原性没有明显变化,说明近年来辽宁省猪群中PCV2相关疾病（PCVD）不是因PCV2出现变异株引起的,并且PCV2b型为主要流行型,怀疑PCV2的流行与季节性有关。
- 董烨郭士琪孙雪沈国顺刘丽霞
- 关键词：猪圆环病毒2型全基因组
- 口蹄疫病毒3ABC基因截短体在毕赤酵母中的表达及鉴定被引量：3
- 2008年
- 将长为525bp的口蹄疫病毒3ABC基因截短体克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9K中,构建了重组表达质粒pPIC9K-3ABCt.用BglⅡ线性化后,电转化毕赤酵母菌GS115,经表型筛选,PCR鉴定,获得阳性重组菌(GS115/pPIC9K-3ABCt).然后进行诱导表达,通过SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物.结果表明,重组菌株成功分泌表达了分子量为40000,具有免疫反应活性,且呈二聚体形式的目的蛋白.在96h时表达量达到最高峰,占分泌总蛋白的18%,达到23.4mg/L.为进一步研制口蹄疫免疫和感染动物鉴别诊断试剂奠定了基础.
- 郑敏金宁一李昌鲁会军马鸣潇沈国顺霍晓伟马海利陈晓月屈勇刚
- 关键词：3ABC基因毕赤酵母分泌表达诊断抗原
- 手术治疗犬慢性子宫内膜炎病例被引量：1
- 2002年
- 方永辉刘丽霞沈国顺吴长德
- 关键词：手术治疗慢性子宫内膜炎病例症状术后护理
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒M蛋白和SEA共表达核酸疫苗的构建及鉴定被引量：3
- 2008年
- 构建猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)M蛋白和金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)共表达的核酸疫苗,并研究其表达产物的抗原性。将采自长春患PRRS病猪的组织剪碎充分研磨,提取病毒RNA后,用RT-PCR的方法特异性扩增PRRSV长春株的ORF6基因(M蛋白)片段。将该片段定向插入到载体pKS-SEA上,双酶切获得片段SEA-ORF6,再将其克隆到真核表达载体pVAXI中,构建重组质粒pVAXI-SEA-ORF6,转化大肠杆菌。经酶切鉴定后,将构建的阳性重组质粒在BHK细胞中表达。通过间接免疫荧光方法初步检测所表达蛋白的抗原性,用Western blot分析表达蛋白的特异性。结果表明,所构建的重组质粒pVAXI-SEA-ORF6在BHK细胞中得到了表达,为进一步研究PRRSV基因工程疫苗奠定了基础。
- 韩贞珍金宁一沈国顺庄天中孙中锋李臻付延军李太元李红文郑敏
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征核酸疫苗
- 辽宁荷包猪α干扰素基因的克隆及序列分析被引量：1
- 2015年
- 为了研究辽宁荷包猪α干扰素的生物学特性,试验从辽宁荷包猪耳组织提取基因组DNA,采用PCR方法扩增出α干扰素基因序列,将PCR产物与克隆载体p MD18-T连接,进行序列测定和同源性分析。结果表明：辽宁荷包猪α干扰素基因与国内外其他品种猪α干扰素基因核苷酸序列同源性相比较高,在97.3%~99.2%之间。
- 荣柳刘丽霞隋昀原沈国顺
- 关键词：Α干扰素基因克隆同源性比较
- 鹅细小病毒野毒株分离鉴定及致病力试验被引量：2
- 2006年
- 从小鹅瘟疑似病料中分离出1株病毒，经电镜观察、血清保护试验鉴定为鹅细小病毒。动物回归试验表明，该病毒所致疾病的潜伏期为8d，病程为1～3d，病死率达100％，对雏鹅半数致死量（LD50）为0．2ml .10^-5稀释的病毒液。
- 陈晓月赵承辉刘丽霞刘明春潘树德于立辉赵玉军沈国顺
- 关键词：细小病毒
- 早期断奶仔猪腹泻发生原因及预防措施被引量：1
- 2001年
- 关于仔猪早期断奶技术,国内外已有大量报道,现代养猪生产中亦在逐步普及早期断奶(3周龄)技术,国外有的甚至提高到5～18日龄.实践证明,实施早期断奶能提高仔猪的生产性能,可缩短母猪的繁殖周期,提高母猪的年产仔窝数,同时还可减少母子垂直传播疾病的机会,降低仔猪发病率.但同时不容忽视,早期断奶的应激、饲料和营养突变等诸多因素可导致仔猪消化机能紊乱,从而引发消化不良和腹泻,严重影响仔猪对饲料的消化和吸收,造成仔猪增重缓慢,重者可造成死亡(死亡率高达10%～40%),养猪业带来极大危害.
- 刘丽霞沈国顺田艳玲
- 关键词：早期断奶仔猪腹泻病因
