欧阳清
- 作品数：11 被引量：16H指数：2
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- 人源性抗前列腺特异性膜抗原单链抗体的表达及活性鉴定
- 2016年
- 目的构建人源性抗前列腺特异性膜抗原(PSMA)单链抗体(sc Fv)的原核表达载体,在大肠杆菌中诱导表达并纯化后,对其生物学活性进行鉴定。方法将人源性抗PSMA sc Fv的基因克隆入原核表达载体p ET302,将其转化入大肠杆菌BL21后用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达,摸索不同诱导条件使sc Fv呈可溶性表达,经SDS-PAGE和Western blot法确认表达后,利用Ni2+-NTA亲和层析柱纯化目的蛋白。利用流式细胞术检测sc Fv与PSMA阳性和阴性细胞的结合情况。结果成功构建人源性抗PSMA sc Fv的原核表达载体;在30℃、IPTG终浓度为0.05 mmol/L时,可实现目的蛋白的可溶性表达;经Ni2+-NTA亲和层析柱纯化后获得纯度较高的抗PSMA sc Fv蛋白;流式细胞术结果显示该sc Fv可与PSMA阳性的LNCa P前列腺癌细胞特异性结合,而不与PSMA阴性的PC-3细胞结合。结论在大肠杆菌成功表达了可溶性人源性抗PSMA sc Fv,获得的抗PSMA sc Fv能够特异性地与PSMA阳性前列腺癌细胞结合。
- 韩东晖吴介恒欧阳清魏铭席文锦杨安钢温伟红秦卫军
- 关键词：单链抗体原核表达
- 肿瘤疫苗的作用机制及研究进展
- 一直以来，对于肿瘤的治疗多采用手术，放疗和化疗三大常规方法。I肿瘤特异性免疫机制及肿瘤的免疫逃逸机制肿瘤在机体内能引发体液免疫应答和细胞免疫应答，而以后者为主。肿瘤抗原在细胞内加工成肽段后与细胞表面的主要组织相容性复合体...
- 欧阳清魏玉英金伯泉杨琨
- 关键词：肿瘤免疫肿瘤疫苗T淋巴细胞细胞免疫应答
- 文献传递
- 人源化抗HER2单链抗体基因的构建、表达及亲和活性鉴定
- 研究背景:单克隆抗体人源化(Monoclonal humanization)是指利用抗体工程技术将动物来源的单克隆抗体的抗原结合区与人源抗体进行不同程度的拼接,以降低这些单抗的免疫原性。本课题组构建的靶向HER2分子的免...
- 欧阳清闫博赵晶杨安钢
- 关键词：免疫原性
- 文献传递
- 单链抗体e23sFv的人源化抗体制备及其在HER2靶向肿瘤杀伤中的功能鉴定
- 研究背景及目的：抗体偶联药物是肿瘤靶向治疗的重要策略之一，但其鼠源单链抗体组分对人体具有潜在的免疫原性。本研究拟对鼠源单链抗体e23sFv进行人源化改造，并评价其应用于本组所建立靶向促凋亡策略的有效性。
- 欧阳清闫博赵晶杨安钢
- 关键词：人源化肿瘤靶向治疗
- 以肿瘤抗原BAP31为靶点的基因疫苗构建及其诱导小鼠免疫反应的研究被引量：3
- 2009年
- 目的:构建重组表达载体P-BAP31和P-L-BAP31基因疫苗并接种小鼠,评价其诱导的体液和细胞免疫应答。方法:利用分子克隆技术,构建重组质粒P-BAP31和P-L-BAP31,同时构建P-BAP31/EGFP和P-L-BAP31/EGFP重组质粒,并将其以脂质体瞬时转染HeLa细胞,通过荧光显微镜观察目的蛋白的表达;将重组质粒P-BAP31和P-L-BAP31免疫C57BL/6小鼠,采用间接ELISA检测免疫小鼠血清中特异性抗体效价;通过酶联免疫斑点实验(ELISPOT)检测免疫脾细胞在受到BAP31抗原刺激后产生IFN-γ和IL-4细胞因子的频率;通过乳酸脱氢酶(LDH释放)试验检测小鼠特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的应答。结果:酶切及测序结果表明,成功构建了针对BAP31肿瘤抗原的P-BAP31和P-L-BAP31基因疫苗。通过荧光显微镜观察重组质粒转染的HeLa细胞,可见EGFP报告基因表达的绿色荧光。ELISA检测免疫小鼠血清中特异性抗体效价发现,带LAMP组明显高于不带LAMP组(P<0.05),且两者均高于空质粒(P-LAMP)及正常对照(N)组(P<0.01)。ELISPOT检测脾细胞分泌细胞因子IFN-γ和IL-4的频率,带LAMP组与其他组相比显著提高(P<0.01)。LDH释放试验显示,带LAMP组的特异性CTL活性高于不带LAMP组,且均高于对照组(P<0.01)。结论:构建了针对肿瘤抗原BAP31的全长基因疫苗,以其免疫C57BL/6小鼠可诱导特异性体液和细胞免疫反应,其中,P-L-BAP31基因疫苗各项免疫反应均优于P-BAP31。
- 宋朝君孙元杰魏玉英张赟欧阳清陈琨金伯泉杨琨
- 关键词：基因疫苗ELISPOT
- 应用分子伴侣探索e23sFv/His融合蛋白的可溶性表达被引量：2
- 2015年
- 目的探讨利用分子伴侣实现e23sFv/His融合蛋白可溶性表达的可行性。方法将分子伴侣质粒pGro7、pKJE7与e23sFv原核表达载体共转化BL21(DE3)感受态细胞。16℃诱导融合蛋白可溶性表达,比较可溶性表达产物相对于常规包涵体不溶形式表达产物在产量和抗原结合活性方面的差异。结果可溶性表达的e23sFv/His产量较小,纯化得率低,其抗原结合活性没有明显优于包涵体表达纯化产物。结论应用pGro7、pKJE7有助于e23sFv/His融合蛋白的可溶性表达,但其表达和纯化得率较低。
- 常镜欧阳清杜晓杨安钢赵晶阎博
- 关键词：可溶性表达分子伴侣
- 肿瘤疫苗的作用机制及研究进展
- @@一直以来，对于肿瘤的治疗多采用手术.放疗和化疗三大常规方法.一百多年前，caley用细菌疫苗免疫机体时，观察到肿瘤缩小。此后人们认识到肿瘤可以诱发免疫反应，而机体免疫系统对肿瘤也具有监视作用。肿摘疫苗的产生正是基于这...
- 欧阳清魏玉英金伯泉杨琨
- 关键词：肿瘤肿瘤免疫
- 文献传递
- 人源化抗HER2单链抗体基因的构建、表达及亲和活性鉴定
- 研究背景:单克隆抗体人源化(Monoclonal humanization)是指利用抗体工程技术将动物来源的单克隆抗体的抗原结合区与人源抗体进行不同程度的拼接,以降低这些单抗的免疫原性。本课题组构建的靶向HER2分子的免...
- 欧阳清杨安钢
- 关键词：免疫原性
- 文献传递
- 实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠脾脏和肝脏中NKT细胞调变的研究被引量：1
- 2009年
- 目的:观察NKT细胞在实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠脾脏和肝脏中所占百分比的变化特点,探讨NKT细胞在EAE模型中的免疫调节作用。方法:以MOG35-5521肽诱导C57BL/6小鼠建立EAE模型并进行临床评分。于发病高峰期处死小鼠,分离脾脏和肝脏淋巴细胞,采用免疫荧光染色和流式细胞术(FCM)分析,观察EAE小鼠与正常小鼠脾脏和肝脏中NKT细胞在全部淋巴细胞中所占百分率的变化。结果:在EAE小鼠不同器官中,NKT细胞占淋巴细胞的百分率均较正常小鼠减少。脾脏NKT细胞百分率(%)从正常组2.22±0.14下降到EAE模型组1.94±0.07(P<0.05),肝脏NKT细胞百分率(%)从正常组5.52±2.17下降到2.67±1.41(P<0.05)。结论:NKT细胞在EAE模型C57BL/6小鼠脾脏和肝脏中增殖受抑,提示EAE发病可能通过对NKT细胞数量的调节进而影响其对免疫应答的调节。
- 欧阳清陈琨王曦张春梅郭俊魏玉英孙元杰徐竹蔚杨琨
- 关键词：NKT细胞EAE免疫调节
- 肿瘤疫苗的作用机制及研究进展被引量：8
- 2008年
- 欧阳清魏玉英金伯泉杨琨
- 关键词：肿瘤肿瘤免疫肿瘤疫苗
