李玉清
- 作品数：6 被引量：8H指数：2
- 供职机构：中国动物卫生与流行病学中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金霍英东教育基金公益性行业(农业)科研专项更多>>
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- 产单核细胞李斯特菌溶血素O单克隆抗体的制备与鉴定
- 2010年
- 【目的】制备抗产单核细胞李斯特菌溶血素O(LLO)的特异性单克隆抗体。【方法】用LLO重折叠的原核表达产物LLO-his免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞,与骨髓瘤细胞在PEG4000作用下融合,经间接ELISA法筛选、多克隆及单克隆分离出阳性细胞株后,再用体内诱生腹水法大量制备单克隆抗体。用辛酸-硫酸铵沉淀法纯化单克隆抗体,间接ELISA法测定其效价及相对亲和常数;用HBT单克隆抗体亚类鉴定试剂盒鉴定抗体亚型;常规方法制备染色体,观察细胞株染色体数目及标志染色体;Western blot检测抗体的特异性。【结果】获得了2株稳定分泌抗LLO单克隆抗体的杂交瘤细胞系,分别命名为3F5-G3和2B4-C8,其腹水效价分别为1∶(1×105)和1∶(1×107);染色体分别为97±5和93±8条,且观察到标志染色体;相对亲和常数分别为0.49和0.26μg/mL;抗体亚类均为IgG1,轻链均为κ链。特异性鉴定结果表明,2种单克隆抗体均可与LLO蛋白发生特异性反应,而与载体蛋白不发生反应。【结论】获得了抗LLO的特异性单克隆抗体。
- 孔德壮张衍海龚振华李葳郑增忍李玉清张彦明
- 关键词：产单核细胞李斯特菌单克隆抗体
- MSB1细胞上MATSA的分离鉴定及纯化
- 2006年
- 将培养收获的M SB 1细胞用磷酸盐缓冲液洗涤3次后,调整细胞浓度为2×106/mL,然后每毫升细胞悬液加2 IU木瓜蛋白酶和1 mm o l/L的L-胱氨酸溶液0.1 mL,混匀后37℃作用1 h以分离M SB 1细胞表面M AT-SA。对木瓜蛋白酶处理前后的M SB 1细胞进行间接荧光抗体染色以检测M ATSA的分离情况。获得的M ATSA粗提物经超滤浓缩和Sephadex G-75凝胶纯化后,用SDS-PAGE检测纯化的结果。试验结果表明,从M SB 1细胞表面分离到M ATSA,经电泳获得了纯化的M ATSA,其相对分子质量约为35 ku。结果为M ATSA单克隆抗体的制备及其相关的研究奠定了基础。
- 穆杨张彦明童德文王玉东李崴李玉清郑增忍
- 口蹄疫3ABC蛋白基因的克隆与序列分析的研究被引量：1
- 2003年
- 摘要:采用RT-PCR扩增FMDV的3ABC蛋白DNA,将其与pUCm-T载体连接,构建pUCm-3ABC重组质粒,序列分析表明,pUCm-3ABC重组质粒的插入DNA与多种血清型FMDV的相同DNA区段有较高的同源性,提示可进一步用pUCm-3ABC重组质粒研究FMDV3ABC蛋白的表达抗原。
- 龚振华郑增忍刘俊辉陆明哲郭福生蒋正军王玉东张衍海黄秀梅李葳李玉清
- 关键词：口蹄疫基因克隆传染病
- 马立克氏病肿瘤细胞表面抗原的提取与鉴定被引量：2
- 2005年
- 用MDVGA株感染1日龄SPF雏鸡,饲养至发病后获得MD肿瘤细胞,采用木瓜蛋白酶消化法从MD肿瘤细胞上提取马立克氏病肿瘤相关的表面抗原,经间接荧光抗体染色和间接ELISA鉴定,证明获得的粗提物中含有马立克氏病肿瘤相关的表面抗原,为进行马立克氏病肿瘤相关的表面抗原的进一步研究奠定了基础。
- 穆杨王玉东张彦明童德文李崴李玉清郑增忍
- 关键词：马立克氏病表面抗原间接ELISASPF雏鸡酶消化法
- 国内外常用新城疫活疫苗的毒力和血凝滴度测定试验报告被引量：2
- 2005年
- 本试验通过对国内外常用新城疫弱毒疫苗最小致死量(MLD)测定、鸡胚平均致死时间(MDT)测定,对疫苗的毒力强弱和致病型进行分析.对疫苗的血凝试验(HA)滴度进行测定,根据疫苗的抗原含量推断免疫效力.测定新城疫不同毒株的弱毒疫苗单苗和与传染性支气管炎H120等的二联苗或三联苗共14种,对其中9种疫苗进行了鸡胚最小致死量(MLD)测定和鸡胚平均致死时间(MDT)试验,对所有的疫苗都进行了HA试验.不管是进口疫苗还是国产疫苗其MDT有较大的差异,其毒力有强有弱,有的为中发型(中等毒力)疫苗,主要是温和型(低毒力)疫苗,最小致死量(MLD)范围为10-8～10-10/0.1ml.不同厂家生产的疫苗HA滴度有较大的区别.国产疫苗的质量与进口疫苗无明显的差异,有的比进口疫苗质量还好.对出口养禽企业选用低毒力、HA滴度高的疫苗具有较好的指导作用.
- 王玉东李葳王娟李玉清刘俊辉曲志娜龚振华孙淑芳郑增忍蒋正军
- 关键词：新城疫弱毒疫苗血凝滴度活疫苗毒力
- 马立克病肿瘤相关抗原间接ELISA检测方法的建立被引量：3
- 2006年
- 用自制并纯化的马立克病肿瘤相关表面抗原(MATSA)免疫SPF级BALB／c小鼠制备阳性对照抗体,以SPF级BALB／c小鼠血清为阴性对照抗体,筛选间接ELISA检测MATSA抗体的最佳反应条件。结果,包被液为0．1 mol／L pH 9．6的碳酸盐缓冲液,抗原包被浓度为4μg／mL,封闭液为含10 g／L BSA的PBST,抗血清稀释比例为1:800,酶标抗体稀释比例为1:1200,酶标抗体作用时间为37℃温育45 min,底物作用时间为37℃温育15 min,终止液为2 mol／L H2SO4,洗涤4次,每次1min为最佳反应条件。将建立的方法应用于MATSA单克隆抗体研制过程中阳性克隆的筛选,成功获得了MATSA的单克隆抗体,表明该优化条件为间接ELISA检测MATSA抗体的最佳反应条件。
- 穆杨王玉东张彦明李崴李玉清郑增忍高敬童德文
- 关键词：间接ELISA
