李海山
- 作品数：15 被引量：40H指数：4
- 供职机构：中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划中国综合性艾滋病研究项目国际科技合作与交流专项项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>
- 携带SV40增强子元件的DNA疫苗载体
- 本发明公开了一种提高DNA疫苗免疫原性的新型DNA疫苗质粒载体，该载体的特征在于含有一段长度为72bp的SV40病毒增强子元件，及其在基因免疫中的应用。本发明还涉及一种提高DNA疫苗免疫原性的方法。
- 邵一鸣李海山刘勇
- 文献传递
- SV40增强子样序列、抗原细胞定位和prime-boost策略对HIV Gag DNA疫苗免疫原性的影响
- 艾滋病是人类健康面临的最严重威胁之一.历史经验证明,疫苗是控制传染病的最有效最经济的手段.DNA疫苗既可以诱导细胞免疫反应又可以诱导体液免疫反应,还能够诱导长期的免疫记忆,是最有希望成功的新一代疫苗之一.能否大幅度提高D...
- 李海山
- 关键词：DNA疫苗细胞定位PRIME-BOOST免疫原性
- 文献传递
- 跨膜型和分泌型HIV Gag抗原编码基因及包含其的艾滋病疫苗
- 本发明涉及跨膜型和分泌型HIV Gag抗原编码基因，包含其的艾滋病疫苗及免疫试剂盒。本发明的DNA疫苗能够诱导高水平的抗人类免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus，HIV)的体液和细胞免疫...
- 邵一鸣李海山刘勇
- 文献传递
- 塞姆利基森林病毒翻译增强序列对HIV Gag DNA疫苗抗原表达和免疫原性的调节被引量：2
- 2005年
- 目的研究塞姆利基森林病毒(Semliki forest virus,SFV)衣壳蛋白5′翻译增强区对基于该病毒复制子的HIVGagDNA疫苗抗原表达水平和免疫原性的影响。方法将SFV衣壳蛋白(capsid,C蛋白)基因的5′端102bp翻译增强区插入到SFV复制子DNA疫苗载体pCMVRep的SFV亚基因启动子下游,得到DNA疫苗载体pCMVRepC。将删除ATG的HIV1gag基因插入pCMVRepC,使gag编码区与翻译增强区融合,得到DNA疫苗质粒pCMVRepCgag。同时,构建携带未融合翻译增强序列的DNA疫苗质粒pCMVRepgag。Westernblot检测翻译增强序列对Gag表达水平的影响。用上述两种DNA疫苗分别免疫BALBc雌性小鼠,ELISA检测Gag特异的抗体反应,ELISPOT和细胞内因子染色技术检测细胞免疫应答。结果衣壳蛋白5′翻译增强区增强了Gag表达水平,对体液免疫应答没有显著影响,但显著增强了特异性细胞免疫应答水平。结论SFVC蛋白翻译增强区能显著提高SFV复制子DNA疫苗的抗原表达和抗原特异性细胞免疫反应。
- 张玉伟周克民李鼎锋李海山范文玲徐建青孙茂盛刘勇邵一鸣
- 关键词：DNA疫苗抗原表达免疫原性GAG特异性细胞免疫应答翻译
- 体内电穿孔对报告基因表达和HIV Gag DNA疫苗诱导的免疫反应的影响被引量：6
- 2006年
- 目的研究体内电穿孔递送途径在小鼠模型中对于报告基因表达水平及HIV Gag DNA疫苗所诱导的免疫反应的影响。方法构建荧光素酶(luciferase)表达质粒p1．0-luc,将其通过直接肌肉注射、肌注后以双针电极进行电穿孔、肌注后以钳式电极进行电穿孔等3种不同方法注射小鼠,72h后取注射部位的肌肉测定luciferase的表达情况。同时构建携带密码子优化的HIV-1B′/C重组亚型CN54株gag基因的DNA疫苗质粒p1．0-gag,在10μg、100μg两个剂量水平上通过以上3种不同的方法免疫BALB/c雌性小鼠,ELISA方法检测Gag特异的抗体反应,ELISPOT方法和细胞内因子染色(jntracellular cytokine staining,ICS)技术检测细胞免疫应答。结果通过体内电穿孔可以使luciferase在小鼠肌肉中的表达水平显著提高,最大提高幅度达到66倍。Gag DNA疫苗免疫结果显示,电穿孔可以显著提高Gag特异的体液免疫应答,其中使用双针电极的效果要显著好于钳式电极,前者所诱导的抗体滴度比不使用电穿孔组提高可达28倍。但体内电穿孔对于Gag特异的细胞免疫应答并没有显著影响。结论体内电穿孔(尤其是使用双针电极)可以大幅度提高报告基因在体内的表达水平和DNA疫苗诱导的抗原特异性体液免疫应答。
- 李鼎锋张玉伟李海山范文玲孙茂盛刘勇邵一鸣
- 关键词：DNA疫苗基因表达
- HIV-1 CN54 Gag P55和P24蛋白的高效表达、纯化和鉴定被引量：7
- 2004年
- 目的 探讨HIV 1中国株CN5 4GagP5 5和P2 4重组蛋白的高效表达并纯化 ,为研究HIV疫苗和诊断试剂创造条件。方法 分别将CN5 4GagP5 5和P2 4基因克隆至 pBV2 2 0和 pThioHisC载体 ,构建非融合表达载体 ;将重组质粒转化大肠杆菌BL2 1codonplus RIL ,对工程菌进行诱导表达。Western Blot检测目的蛋白 ,用DEAE SeparoseFF阴离子交换层析柱纯化目的蛋白 ;纯化的P5 5和P2 4抗原蛋白分别包被酶标板作ELISA检测。结果 P5 5以包涵体的形式表达 ,表达量占菌体总蛋白的 30 % ,P2 4实现了可溶性表达 ,表达量占总菌体总蛋白的4 0 % ;纯化后P5 5纯度达到 80 % ,P2 4纯度超过 90 %。Western Blot和ELISA检测均显示了良好的的灵敏度和特异性。结论 HIV 1CN5 4GagP5 5和P2 4抗原蛋白可在大肠杆菌中高效表达 ,纯化的抗原蛋白具有良好抗原性 。
- 王道毅刘勇郝彦玲马民强傅晶晶李海山王贻杰陈静娴邵一鸣
- 酵母表达的HIV-1中国株CN54 Gag蛋白的免疫原性研究被引量：1
- 2004年
- 目的 评价毕赤酵母表达的HIV 1中国株CN5 4Gag蛋白在Balb c小鼠诱导体液和细胞免疫的能力。方法 利用重组Gag蛋白单独及与重组DNA或痘苗联合免疫Balb c小鼠 ,检测小鼠产生的特异性结合抗体和IgG1 IgG2a ,同时检测T淋巴细胞增殖反应和CTL反应。结果 3个蛋白单独免疫组均能诱导小鼠产生抗体和T淋巴细胞增殖反应 ,其中不加佐剂的免疫组诱导免疫反应低于其它两组。但 3组的CTL杀伤活性均不明显。重组蛋白和重组DNA及痘苗联合免疫均诱导产生了较好的体液和细胞免疫反应 ,而且重组痘苗初始免疫 蛋白加强免疫组还诱导产生了较强的CTL反应。结论 酵母表达的HIV 1Gag蛋白具有良好的免疫原性 ,在与重组DNA和痘苗疫苗联合使用时具有协同作用 ,能刺激动物产生更强的HIV 1特异性体液和细胞免疫反应。本研究为构建HIV 1蛋白疫苗和探讨各类疫苗的联合免疫方式提供了有价值的参考数据。
- 郝彦玲马民强李海山黄灿平周克民刘勇洪坤学邵一鸣
- 关键词：酵母HIV-1GAG免疫原性
- 携带SV40增强子元件的DNA疫苗载体
- 本发明公开了一种提高DNA疫苗免疫原性的新型DNA疫苗质粒载体，该载体的特征在于含有一段长度为72bp的SV40病毒增强子元件，及其在基因免疫中的应用。本发明还涉及一种提高DNA疫苗免疫原性的方法。
- 邵一鸣李海山刘勇
- 文献传递
- HIV-1中国株CN54 Gag蛋白在毕赤酵母中的表达纯化和鉴定被引量：1
- 2005年
- 目的 利用毕赤酵母表达系统高效表达HIV 1中国株CN5 4的Gag蛋白,初步确立发酵和纯化工艺。方法 PCR扩增CN5 4Gag基因,插入毕赤酵母表达载体pPS1 0 ,电转化毕赤酵母菌株GS115 ,G4 18筛选高表达工程菌,利用5L发酵罐进行高密发酵,通过SPSepharoseFF和DEAESeparoseFF柱层析,用HIV 1阳性血清和p2 4抗原检测试剂盒对纯化后的Gag蛋白进行免疫学性质的鉴定。结果 构建了高效表达CN5 4Gag蛋白的毕赤酵母工程菌株,发酵罐培养的菌体密度吸光度(A6 0 0 值)超过30 0 ,Gag蛋白表达量达到12 0mg L。纯化后的Gag蛋白纯度高于90 % ,p2 4检测强阳性并能够与HIV 1阳性血清发生特异的抗原抗体结合反应。结论 本研究在毕赤酵母中高效表达了HIV 1中国株CN5 4的Gag蛋白,并进行了纯化和鉴定,为针对我国新一代HIV蛋白亚单位疫苗的研制奠定了基础。
- 郝彦玲马民强傅晶晶李海山王贻杰刘颖吴岚刘勇邵一鸣
- 关键词：GAG蛋白HIV-1中国株SEPHAROSEGAG基因免疫学性质
- DNA疫苗及其优化策略被引量：10
- 2003年
- DNA疫苗既可以诱导细胞免疫又可以诱导体液免疫反应 ,是最有希望成功的新一代疫苗之一。但免疫原性相对较弱 ,限制了 DNA疫苗的广泛应用 ,需要进一步优化。本文对 DNA疫苗的历史 ,优缺点 ,免疫机制 ,尤其是优化策略进行了综述 ,并对 DNA疫苗的应用前景进行了展望。
- 李海山刘勇邵一鸣
- 关键词：DNA疫苗DNA免疫免疫机制安全性耐受力
