李婷婷
- 作品数：3 被引量：10H指数：2
- 供职机构：江苏大学基础医学与医学技术学院更多>>
- 发文基金：国家科技基础条件平台建设计划国家科技重大专项国家公益性行业科研专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 采用实时PCR技术比较不同方法提纯隐孢子虫卵囊DNA效果被引量：2
- 2009年
- 目的比较不同方法提纯隐孢子虫卵囊DNA的效果。方法将分离纯化的隐孢子虫卵囊分别加入美国Promega公司(简称Promega)和上海捷瑞公司(简称捷瑞)基因组DNA纯化试剂盒的裂解液、2%TritonX-100和5%异硫氰酸胍,同时联合使用冻融法、蛋白酶K法和声裂法裂解卵囊,用试剂盒法或Chelex-100法提纯卵囊基因组DNA,用实时PCR测定隐孢子虫卵囊囊壁蛋白(COWP)基因拷贝数,以Promega试剂盒为参照比较不同纯化方法的提纯效果。结果Promega试剂盒的裂解液裂解隐孢子虫卵囊的效果最好,纯化所得卵囊COWP基因拷贝数可达(6.45～9.86)×106;其他依次为捷瑞试剂盒的裂解液[(2.38～3.69)×106]、5%异硫氰酸胍[(1.27～21.29)×105]和2%TritonX-100[(2.06～866.70)×103]。冻融法+蛋白酶K法+声裂法提纯隐孢子虫卵囊DNA效果最佳,其次为冻融法+声裂法和蛋白酶K法+声裂法,冻融法+蛋白酶K法效果最差。结论冻融法+蛋白酶K法+声裂法联合使用能使卵囊DNA的提纯效率达到最大,捷瑞基因组DNA纯化试剂盒和5%异硫氰酸胍裂解法提纯隐孢子虫卵囊DNA可获得与Promega试剂盒相近的效果。
- 陈盛霞吴亮沈玉娟章秋霞李婷婷姜旭淦徐馀信曹建平
- 关键词：隐孢子虫卵囊实时PCRDNA提纯
- 隐孢子虫卵囊DNA纯化方法的研究进展被引量：3
- 2009年
- PCR技术不仅可检测极微量的隐孢子虫,而且具有高度特异性,在隐孢子虫检测中发挥重要作用。PCR检测中,隐孢子虫卵囊模板DNA的制备尤为重要,需对卵囊进行分离纯化和裂解后才能提取纯化DNA。本文综述目前常用的卵囊分离纯化、裂解和DNA提取纯化的方法。
- 吴亮章秋霞李婷婷陈盛霞曹建平
- 关键词：隐孢子虫卵囊DNA纯化
- 人包皮成纤维细胞和人子宫颈癌细胞体外培养弓形虫速殖子被引量：5
- 2009年
- 目的比较弓形虫RH株速殖子在人包皮成纤维细胞(humanforeskinfibroblast,HFF)和人子宫颈癌(HeLa)细胞的感染和细胞内增殖情况。方法分别于含一盖玻片的细胞培养皿(35mm)内培养HFF细胞和HeLa细胞。待形成单细胞层后各加入经3μm滤膜纯化的弓形虫RH株速殖子共培养,分别于0.5、1、2、4、8、12、24、36、48、72和96h取出盖玻片,经吉氏染色镜下观察速殖子在两种细胞内的增殖情况。结果与HFF细胞共培养4h后,速殖子即可侵入HFF细胞,1个细胞内可见数十个速殖子;24h可见明显的假包囊,72h细胞被胀破。而与HeLa细胞共培养8h后速殖子才侵入细胞,每个细胞内可见3～5个速殖子,48h形成假包囊,96h大部分细胞被胀破。结论弓形虫RH株速殖子可在HFF细胞和HeLa细胞内增殖,在HFF细胞内的增殖速度快于HeLa细胞。
- 吴亮章秋霞李婷婷陈盛霞曹建平
- 关键词：刚地弓形虫速殖子体外培养HELA细胞
