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牛呼吸道合胞体病毒G蛋白的截短表达与鉴定被引量：11: 2008年; 将牛呼吸道合胞体病毒(bovine respiratory syncytial virus,BRSV)G基因截短成2个片段G1和G2,然后以人工合成的牛呼吸道合胞体病毒G基因为模板,利用PCR分别扩增G1和G2基因片段,其大小分别为570 bp和308 bp。将目的片段定向克隆到pET30a表达载体,酶切及测序鉴定均正确后,转化BL21表达菌,经IPTG诱导后G1和G2基因片段均获得了表达,且为可溶性表达。利用Ni柱亲和层析法在非变性条件下纯化重组蛋白,经免疫印迹试验鉴定证明纯化的重组蛋白G1具有良好的抗原性和特异性,而重组蛋白G2无反应性。应用纯化的重组蛋白G1进行的间接ELISA与免疫印迹试验在国内牛血清中检测到了BRSV血清抗体。对建立BRSVG蛋白的血清学诊断方法和为开展BRSVG蛋白生物学功能的研究奠定了基础。; 冯军科薛飞李娇祖立闯朱远茂任宪刚; 关键词：牛呼吸道合胞体病毒 G基因克隆

表达O型口蹄疫病毒VP1基因的重组病毒BHV-1的构建与鉴定被引量：4: 2009年; 【目的】为了构建表达口蹄疫病毒(O/China/99)VP1基因的牛疱疹病毒1型,将人工合成的口蹄疫病毒VP1基因插入到巨细胞病毒(CMV)启动子之下构建gE基因缺失转移载体。【方法】利用磷酸钙介导转染法将该转移载体与亲本病毒BHV-1/gE-/LacZ+的基因组DNA共转染牛鼻甲细胞后收获增殖的病毒。通过筛选白色病毒蚀斑,得到重组病毒BHV-1/gE-/VP1。【结果】PCR检测结果表明VP1基因已经插入到了重组病毒BHV-1/gE-的基因组中,间接免疫荧光试验和Western blot证实了BHV-1/gE-/VP1中的VP1基因在感染的细胞中获得了表达。【结论】本研究成功地构建了表达口蹄疫病毒VP1基因的重组病毒BHV-1/gE-/VP1,为研制口蹄疫及其他重要牛传染病的BHV-1病毒载体疫苗奠定了基础。; 任宪刚薛飞朱远茂童光志王延辉冯军科祖立闯李娇史鸿飞高欲燃; 关键词：口蹄疫病毒 VP1基因

牛病毒性腹泻病毒E2蛋白的截短表达与鉴定被引量：10: 2008年; 利用牛病毒性腹泻病毒(BVDV)BA株接种MDBK细胞,提取病毒RNA。参照已发表的BVDV基因组序列,利用Oligo 6生物学软件设计扩增E2基因的1对引物,引入酶切位点并去掉E2蛋白的跨膜区及疏水区。通过RT-PCR扩增了长约1 000 bp的E2基因片段,克隆到pMD18-T载体上,酶切并测序鉴定。然后将目的片段进一步定向克隆到pET30a表达载体,转化BL21表达菌。取转化菌培养,并用IPTG诱导,获得了以包涵体形式表达的重组蛋白。将重组蛋白变性、纯化和复性后,用免疫印迹与间接ELISA检测表明纯化的重组蛋白具有良好的免疫原性,为牛病毒性腹泻病毒诊断试剂的研制奠定了基础。; 李娇薛飞朱远茂祖立闯; 关键词：牛病毒性腹泻病毒 E2蛋白截短表达

牛病毒性腹泻病毒E2蛋白的多克隆抗体制备及鉴定被引量：6: 2011年; 为制备牛病毒性腹泻病毒(BVDV)重组E2蛋白的兔源多克隆抗体,本研究利用表达BVDV E2蛋白的重组质粒pET30a-E2转化E.coli BL21(DE3),经诱导表达获得重组E2蛋白。Western blot检测显示纯化蛋白能够与BVDV参考阳性血清反应。以纯化的重组E2蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,病毒中和试验测定其中和效价为1:2048,间接免疫荧光和western blot试验表明其具有良好的反应性和特异性。本研究制备的BVDV重组E2蛋白兔源多克隆抗体可应用于BVDV的检测,同时为进一步建立检测BVDV E2蛋白的ELISA方法奠定基础。; 高欲燃朱远茂康健史鸿飞李娇任宪刚冯军科于作薛飞; 关键词：牛病毒性腹泻病毒 E2蛋白多克隆抗体

牛病毒性腹泻病毒RNA 5'端非编码区的检测与遗传分析研究: 牛病毒性腹泻病毒(BVDV)可引起以牛发热、粘膜糜烂溃疡、白细胞减少、腹泻、咳嗽及怀孕母牛流产或产出畸形胎儿为主要特征的一种传染病,呈世界性分布。目前BVDV是我国养牛业面临的一个; 任宪刚薛飞李娇朱远茂祖立闯冯军科; 文献传递

牛传染性鼻气管炎病毒重组gD蛋白间接ELISA方法的建立及应用被引量：18: 2008年; 用大肠杆菌表达的牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)重组gD蛋白纯化后作为包被抗原,建立了检测牛传染性鼻气管炎病毒抗体的间接ELISA方法。交叉反应试验表明,该重组抗原与其它常见的5种牛病阳性血清不发生交叉反应;阻断反应试验表明,IBRV病毒悬液能在很大程度上阻断重组抗原与阳性血清的反应,而对阴性血清没有明显影响。在重复性试验中,批内重复的变异系数小于5%,批间重复的变异系数小于15%。与中和试验相比较,符合率、敏感性和特异性分别为84.1%、85.0%和83.4%。应用该诊断方法和本实验室已建立的以IBRV全病毒作为包被抗原的ELISA诊断方法,同时检测了采集于国内11个省份的2012份血清样本,IBRVgD-ELISA检测的平均阳性率为46.0%(926/2012),而且相对于IBRV全病毒ELISA诊断方法的符合率、敏感性和特异性分别为91.9%、94.2%和90.2%。本研究所建立的IBRVgD-ELISA具有良好的敏感性和特异性,为国内IBR流行病学调查提供了一种快速、简便的血清学诊断方法。; 祖立闯朱远茂王延辉辛九庆李娇任宪刚冯军科薛飞; 关键词：牛传染性鼻气管炎间接ELISA

表达牛呼吸道合胞体病毒G蛋白基因的重组Ⅰ型牛疱疹病毒的构建与鉴定被引量：8: 2010年; 为构建表达牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)G蛋白基因的牛疱疹病毒Ⅰ型(BHV-1)重组病毒,本研究将人工合成的BRSV全长G蛋白基因编码序列插入到巨细胞病毒(CMV)启动子之下构建TK基因缺失转移载体。利用磷酸钙-DNA沉淀法将该转移载体与亲本病毒BHV-1/TK-/LacZ+的基因组DNA共转染牛鼻甲细胞后收获增殖的病毒。通过反向蚀斑筛选,得到重组病毒BHV-1/TK-/G+。PCR检测结果证实G蛋白基因已经插入到了亲本病毒BHV-1/TK-/LacZ+的基因组中,间接免疫荧光试验和western blot证实BHV-1/TK-/G+中的G蛋白基因在感染的细胞中获得了表达。本研究为研制BRSV及其他重要牛传染病的BHV-1病毒活载体疫苗奠定了基础。; 冯军科朱远茂任宪刚祖立闯李娇史鸿飞高欲燃童光志薛飞; 关键词：牛呼吸道合胞体病毒

表达O型口蹄疫病毒VP1基因的牛疱疹病毒1型重组病毒的构建与鉴定: 口蹄疫(FMD)是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的偶蹄动物的一种高度接触性传染病。FMDV能感染包括猪、牛、羊等主要家畜及其它野生动物在内的80多种动物,并能形成全球大规模流行,造成巨大经; 任宪刚薛飞朱远茂童光志王延辉冯军科祖立闯李娇; 文献传递

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李娇