朱孔利
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
- 供职机构：西北农林科技大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：陕西省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- AcMNPV lef-10形成的难解离复合物特性的研究
- 苜蓿尺蠖核多角体病毒（Autographa californica multicapsid nucleopolyhedrovirus,AcMNPV）是杆状病毒科，多衣壳型核多角体病毒属的模式种。AcMNPV基因的表达分为...
- 朱孔利
- 关键词：ACMNPV原核表达真核表达纯化
- 文献传递
- AcMNPV LEF-10形成难解离复合物的特性研究
- 2014年
- 【目的】将已经成功构建的AcMNPVlef-10表达载体在原核和真核表达系统中表达,研究其形成高分子复合物的特性,为揭示其高分子复合物的形成机理奠定基础。【方法】将先前成功构建的pTriEx-lef-10、pTriExlef-10-1-52、pTriEx-lef-10-27-78重组质粒分别转化至大肠杆菌BL21(DE3)和Sf 9细胞中诱导表达,产物经纯化、浓缩后,进行SDS-PAGE和Western blot检测分析;利用SDD-AGE技术估测LEF-10蛋白的分子质量;用透射电子显微镜分别观察原核和真核系统表达的LEF-10蛋白的外部形态。【结果】Western blot分析显示,LEF-10蛋白能形成高分子复合物,而C末端、N末端缺失和C末端融合GFP都可以阻断或部分阻断LEF-10高分子复合物的形成;苯酚-氯仿-异戊醇能部分打开LEF-10蛋白高分子复合体;利用SDD-AGE技术初步估测LEF-10高分子复合体分子质量集中在520~3 250ku;透射电子显微镜观察原核和真核系统表达的LEF-10,可见蛋白复合体大小不均一,呈现球形或者近球形。【结论】LEF-10蛋白在原核和真核表达系统中,都会形成高分子复合体,该复合体在强变性剂作用下,也不能完全打开,推测该复合体可能以共价键形式结合。
- 朱孔利赵钰蒋向许晓东
- 关键词：ACMNPV原核表达真核表达
