许晓东
- 作品数：18 被引量：29H指数：2
- 供职机构：西北农林科技大学更多>>
- 发文基金：陕西省自然科学基金陕西省科学技术研究发展计划项目国家重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学文化科学医药卫生更多>>
- 分子生物学实验教学改革的探索被引量：9
- 2018年
- 文章从改善教学条件、丰富教学内容、引入先进的教学理念等方面对分子生物学实验教学进行了改革,在提高学生的分析和解决问题的能力、培养学生创新能力上取得了较好的效果。
- 傅晶许晓东刘佳明
- 关键词：分子生物学实验教学改革教学内容
- AcMNPV LEF-10第21位突变对其活性的影响
- 2021年
- 【目的】对苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)晚期表达因子LEF-10的第21位保守氨基酸残基进行饱和点突变,研究该位点突变对AcMNPV活性的影响,为进一步研究LEF-10朊病毒特性及其在病毒复制中的作用奠定基础。【方法】同源序列比对发现,LEF-10第21位亮氨酸残基高度保守。对pTriEx质粒载体上LEF-10第21位的亮氨酸残基通过异位回补进行饱和突变,将构建好的重组质粒与线性化的BacmidΔlef-10共转染草地贪夜蛾Sf9细胞构建重组病毒,研究LEF-10第21位上不同氨基酸残基对病毒活性的影响。同时联用Red/ET基因敲除系统和rpsl反向筛选系统对AcMNPV Bacmid的LEF-10基因进行原位突变,突变后的线性化Bacmid与pTriEx-p(p10)-dsRed质粒共转染草地贪夜蛾Sf9细胞构建原位突变型病毒,研究点突变对重组病毒活性的影响,并通过流式细胞术检测突变型病毒对晚期基因表达的影响。【结果】异位回补点突变重组病毒和原位点突变重组病毒转染和感染Sf9细胞的结果均表明,当LEF-10第21位亮氨酸残基突变为异亮氨酸残基、丙氨酸残基、缬氨酸残基、脯氨酸残基、半胱氨酸残基和甲硫氨酸残基时,可以拯救LEF-10缺陷型病毒,并产生具有感染性的重组病毒,但其他突变型重组病毒均为致死突变。将7种原位突变重组病毒分别以高MOI(MOI=10)和低MOI(MOI=1)感染Sf9细胞,结果表明低MOI感染Sf9细胞时,7种重组病毒外源蛋白的表达水平相当;高MOI感染Sf9细胞时,7种重组病毒外源蛋白的表达水平差异明显,其中突变为丙氨酸残基的重组病毒将外源蛋白的表达维持在较高水平。【结论】LEF-10第21位氨基酸残基对其功能起着至关重要的作用,该位点氨基酸残基的性质影响AcMNPV的活性。
- 王鑫许晓东
- 关键词：苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒基因敲除
- 一种识别HIV-1受体结合表位的可溶性单链抗体的制备方法
- 本发明公开了一种识别HIV-1受体结合表位的可溶性单链抗体的制备方法，采用化学合成的方法获得b12抗体重链和轻链的可变区，用重叠PCR方法拼接得到scFv基因，利用原核表达系统，在室温和IPTG终浓度为0.5mM的条件下...
- 陈红英许晓东杨雄
- 文献传递
- 一种在Sf和Tn细胞中抗凋亡的杆状病毒表达载体
- 本发明公开了一种在草地贪夜蛾（Spodoptera frugiperda,Sf）和粉纹夜蛾（Trichoplusia ni,Tn）细胞中都能抗凋亡的杆状病毒表达载体。根据siRNA引导链与靶RNA识别时能容忍G‑U配对的...
- 许晓东张瑞瑞南昊兰兰
- HIV-1可溶性单链抗体b12-scFv的表达与活性分析被引量：2
- 2014年
- 【目的】合成并克隆HIV-1单克隆抗体b12的单链抗体基因,在大肠杆菌中诱导表达,并分析表达产物的活性。【方法】以单抗b12的重链和轻链全基因为模板,分别扩增其可变区基因片段后,用重叠PCR的方法将二者拼接起来,形成scFv-VL-Linker-VH结构,并将其插入pET28a载体,构建原核表达载体pETb12-scFv。将pETb12-scFv转入大肠杆菌BL21StarTM(DE3),经IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE分析;用Ni-NTA金属螯合层析柱对表达产物进行分离纯化,用酶联免疫吸附试验(ELISA)、荧光显微镜和流式细胞仪(FCM)检测纯化蛋白与HIV-1gp120的结合活性。【结果】得到了b12的单链抗体基因b12-scFv,长度为768bp;SDS-PAGE电泳结果显示,b12-scFv表达量较高,蛋白质分子质量约为29ku,主要以可溶性蛋白的形式存在,但也有部分形成不溶的包涵体;纯化后蛋白的产量约为2mg/L;活性检测结果表明,b12-scFv对分泌表达和锚定在细胞膜表面的HIV-1gp120都具有良好的特异性结合活性。【结论】单链抗体b12-scFv可以用于HIV-1受体结合位点的表位检测。
- 杨雄刘秀侠南昊许晓东陈红英
- 关键词：HIV-1单链抗体B12
- 一种抗宿主凋亡的重组杆状病毒载体
- 本发明公开了一种抗宿主凋亡的重组杆状病毒载体，通过载体表达靶向昆虫细胞caspase‑1的siRNA，从而实现抗细胞凋亡的杆状病毒表达载体；该杆状病毒载体上含有一段特定的DNA序列，这段DNA序列包括U6启动子及其下游2...
- 许晓东陈红英欧艳梅徐可言
- 文献传递
- 一种展示CyHV-2膜蛋白的重组杆状病毒及其制备方法和应用
- 本发明公开了一种展示CyHV‑2膜蛋白的重组杆状病毒及其制备方法和应用，ORF25在杆状病毒表面的展示通过将ORF25的胞外区与杆状病毒AcMNPV gp64的信号肽和跨膜区进行融合表达来实现，重组杆状病毒为载体表达的O...
- 陈红英曹志伟南昊许晓东
- 文献传递
- 一种识别HIV-1受体结合表位的可溶性单链抗体的制备方法
- 本发明公开了一种识别HIV-1受体结合表位的可溶性单链抗体的制备方法，采用化学合成的方法获得b12抗体重链和轻链的可变区，用重叠PCR方法拼接得到scFv基因，利用原核表达系统，在室温和IPTG终浓度为0.5mM的条件下...
- 陈红英许晓东杨雄
- 文献传递
- 杆状病毒的超感染及其在抗体表达中的应用
- 杆状病毒表达系统作为一种广泛使用的真核表达系统，可以将表达的重组蛋白展示在细胞或病毒颗粒的表面.在基因文库的表达中，虽然杆状病毒能有效地将文库中的基因产物表达并展示在昆虫细胞表面，但是因为昆虫细胞往往被多个病毒同时感染，...
- 许晓东刘冰清吴芳赵钰陈红英
- AcMNPV lef-10在Sf9细胞中的表达与定位研究
- 2014年
- 【目的】研究苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)晚期表达因子lef-10在宿主细胞Sf9中的时空表达及定位,为进一步研究lef-10的功能提供理论基础。【方法】利用不同的特异引物,通过PCR方法扩增lef-10及innateP-lef-10目的片段,将目的片段分别克隆到载体pTriEx-SP-GFP上,得到重组质粒pTriEx-lef10-GFP和pTriEx-innateP-lef10-GFP,经过双酶切检测构建载体。将重组质粒分别与Bacmid共转染Sf9细胞,用得到的重组病毒分别于4,8,16,24,36h再次感染宿主细胞;用激光共聚焦显微镜观察lef-10的表达及亚细胞定位情况。【结果】在感染早期,lef-10就已开始表达;随感染时间的推移,lef-10逐渐移动至细胞核,且在晚期和极晚期时相,lef-10主要集中于细胞核中。【结论】在天然条件下,lef-10是作为晩期表达因子发挥功能的,并且对其他基因的转录可能起一定的调控作用。
- 刘田田蒋向许晓东
- 关键词：ACMNPV绿色荧光蛋白亚细胞定位
