方娟
- 作品数：16 被引量：41H指数：3
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- 酵母双杂交技术筛选宫颈癌HeLa细胞cDNA文库中FAM92A1-289关联蛋白被引量：5
- 2016年
- 目的应用酵母双杂交技术从宫颈癌He La细胞c DNA文库中筛选FAM92A1-289关联蛋白。方法构建酵母双杂交p GBKT7-FAM92A1-289诱饵载体,转化至酵母AH109感受态细胞中。利用Clontech GAL4酵母双杂交系统筛选He La细胞c DNA文库中与FAM92A1-289相互作用的蛋白质,用营养缺陷型培养基和X-a-Gal双重筛选实验进行筛选,对筛选结果进行生物信息学分析,对克隆重复率较高的蛋白进行回转验证,将β-半乳糖苷酶活性阳性的克隆进行测序并分析。结果成功构建酵母双杂交p GBKT7-FAM92A1-289诱饵载体,可在酵母细胞中正常表达FAM92A1-289,且对酵母细胞无毒性,不存在自激活现象。筛选出在SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp四缺培养基及含X-a-Gal的SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp四缺培养基上均能生长且β-半乳糖苷酶活性阳性的克隆9个。经生物信息学分析发现4种蛋白重复率较高,即增殖细胞核抗原(PCNA)、半乳糖凝集素1(Galectin-1)、内质网高尔基体中间室标记物53(ERGIC-53)、重组人BCL2相关永生基因1(BAG1),并均与FAM92A1-289存在相互作用。结论利用酵母双杂交技术在Hela细胞c DNA文库中成功筛选出与FAM92A1-289相互作用的蛋白,为进一步研究FAM92A1-289的功能提供了新线索。
- 沈君豪方娟郭兴荣桂卉涂汉军阮绪芝
- 关键词：酵母双杂交技术COMPARTMENTGALECTIN-1
- 激光扫描共聚焦显微镜在细胞凋亡检测中的应用被引量：1
- 2014年
- 激光扫描共聚焦显微镜是先进的图像分析仪器之一。本文主要介绍几种应用激光扫描共聚焦显微镜进行细胞凋亡的常用方法。
- 王珺谢玉波方娟龚坚
- 关键词：激光扫描共聚焦显微镜细胞凋亡
- hFAM92A1在人宫颈癌细胞不同周期时相的表达被引量：1
- 2015年
- 目的:探讨h FAM92A1在人宫颈癌He La细胞不同周期时相的表达差异。方法:常规培养Hela细胞,应用血清饥饿法将He La细胞同步化于G1期,胸腺嘧啶核苷双阻断法同步化于S、G2期,秋水仙素阻断法同步化于M期,应用流式细胞术检测同步化效率,应用RT-PCR方法检测h FAM92A1在人宫颈癌He La细胞不同周期时相的表达水平。结果:流式细胞仪检测细胞同步化效率G1期为77.5%、S期为85.5%、G2期为61.9%、M期为44%;FAM92A1基因在各期均有表达,但存在差异,以S期表达最高。结论:FAM92A1基因在He La细胞不同周期时相的表达有较大差异。
- 方娟王珺龚坚王燕阮绪芝
- 关键词：基因子宫颈细胞周期
- 腰大池持续引流术后颅内感染临床分析被引量：3
- 2017年
- 目的探讨腰大池持续引流术后颅内感染原因及预防措施。方法选取2013年3月至2014年3月十堰市太和医院科收治的实施腰大池持续引流术患者200例,记录患者腰大池持续引流术后患者年龄、性别、GCS评分、置管后有无穿刺点处脑脊液漏、置管次数、置管时间、换药频率,计算颅内感染率并进行统计分析。结果腰大池持续引流术后男性患者颅内感染率为8.9%,女性为9.2%,差异无统计学意义(P>0.05);而腰大池持续引流术后颅内感染的发生与年龄、GCS评分、置管后有无穿刺点处脑脊液漏、置管次数、留置时间、换药频率有关,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论腰大池持续引流术后颅内感染并不少见,影响疗效,甚至危及生命,应积极采取预防措施。
- 张相华张力黄宽明鲁军体曹刚方娟
- 关键词：腰骶部引流术脑炎
- 人FAM92A1基因诱饵表达质粒的构建与鉴定被引量：2
- 2011年
- 目的 构建人FAM92A1基因（hFAM92A1）的诱饵表达质粒pGBKT7-hFAM92A1并检测其蛋白表达、毒性和自激活作用.方法 PCR扩增hFAM92A1的基因编码序列并克隆入诱饵表达载体pGBKT7中,酶切和测序鉴定后,转化到酵母AHl09细胞中,Western印迹检测诱饵蛋白表达情况,同时检测诱饵蛋白的毒性和自激活作用.结果 成功构建FAM92A1基因的诱饵表达质粒pGBKT7-hFAM92A1,测序结果正确.Western印迹实验证实酵母细胞高表达诱饵蛋白hFAM92A1,诱饵蛋白没有自激活作用.结论 构建的诱饵表达质粒pGBKT7-hFAM92A1可用于下一步酵母双杂交系统实验,为进一步研究hFAM92A1功能奠定了基础.
- 方娟李瑞明卢智勇孙晓东陈洁阮绪芝
- 关键词：诱饵蛋白
- siRNA-FAM92A1-289对HeLa细胞增殖的影响被引量：5
- 2011年
- 目的:研究RNA干扰(RNAi)沉默基因FAM92A1-289对HeLa细胞增殖和凋亡的影响。方法:化学合成法合成小干扰RNA(siRNA),阳离子脂质体转染FAM92A1-289 HeLa细胞;实时定量RT-PCR检测其mRNA表达,MTT法和流式细胞仪检测转染后HeLa细胞增殖、细胞周期和凋亡变化。结果:转染合成FAM92A1-289 siRNA后,HeLa细胞中FAM92A1-289 mRNA表达下降(P<0.01),细胞增殖均明显增强(P<0.01);细胞周期分布改变,S期细胞明显增多,而G2/M期细胞减少,凋亡率无变化。结论:FAM92A1-289基因调节细胞增殖活动。
- 陈洁陈洁李瑞明方娟阮绪芝
- 关键词：小RNA干扰HELA细胞
- 颅骨炎性肌纤维母细胞瘤1例被引量：1
- 2017年
- 女性，62岁，因发现额部包块1个月余入院。既往有甲状腺包块切除术病史（自诉病理检查为良性），有结核病史（自诉已治愈）。入院时体格检查：神志清楚；额部可及一大小约3cm×3cm质软包块，压痛阳性，不能移动；双侧瞳孔等大等圆，直径2.0mm，光反射存在；颈软，颈部见术后疤痕；四肢肌力、肌张力正常。外院颅脑MRI示额部包块。
- 张相华方娟黄宽明田晓娇
- 关键词：炎性肌纤维母细胞瘤颅骨手术
- 神经电生理监测在面肌痉挛微血管减压手术中的应用被引量：3
- 2017年
- ＂微血管减压术＂通俗地讲就是将相互压迫的神经、血管分离开来的手术方法,1967年由Jannatta PJ教授首次提出,目前已成为治疗面肌痉挛的标准方法^（[1-2]）。其优点是在解除局部血管压迫、消除症状的同时,保留面神经正常功能。但仍有10%~30%患者疗效不满意,术后颅神经并发症及死亡仍是患者和医生所面临的挑战^（[3]）。
- 张相华方娟涂汉军张力魏国耀王苗
- 关键词：神经电生理学面肌痉挛微血管减压
- 左旋丁苯酞对低灌注大鼠脑皮质Tau蛋白磷酸化的影响被引量：1
- 2013年
- 目的通过观察左旋丁苯酞(1-NBP)对脑低灌注大鼠学习记忆的改善作用,并研究其皮质β-淀粉样肽(Aβ1-42)水平以及Tau蛋白磷酸化变化,以探讨1-NBP改善认识功能的作用机制。方法大鼠双侧颈总动脉结扎90d,制备脑低灌注模型。实验分假手术组,溶剂对照组,1-NBP 30、120mg/kg组。1-NBP治疗组连续给予45d后,用Morris水迷宫检测大鼠的空间学习和记忆能力,后取大鼠脑皮质组织,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测Aβ1-42含量,用蛋白印迹法检测Tau蛋白的磷酸化水平。结果在水迷宫空间探索实验中1-NBP明显增加脑低灌注大鼠在目标象限活动时间的百分比。1-NBP明显减少了大鼠皮质Aβ1-42含量,降低低灌注大鼠皮质Tau蛋白的磷酸化水平。结论 1-NBP改善了脑低灌注大鼠的学习记忆缺陷,可能是通过减少皮质Aβ1-42的水平,从而减轻Tau蛋白的磷酸化,最终保护了神经元免受损伤。
- 罗超恭坚王珺方娟赵万红
- 关键词：淀粉样Β蛋白TAU蛋白质类
- FAM92A1-289在不同增殖能力组织及不同周期时相细胞中的表达和意义被引量：1
- 2015年
- 目的探讨基因FAM92A1-289在不同增殖能力的组织及不同周期时相细胞中的表达和意义。方法采用血清饥饿法同步化G1期He La细胞,采用胸腺嘧啶核苷双阻断法同步化S期和G2期He La细胞,采用秋水仙素阻断法同步化M期He La细胞;TRIzol一步法提取组织及细胞总RNA;实时荧光定量RT-PCR方法分别检测肝癌组织、癌旁组织、正常脑组织及He La细胞G1期、S期、G2期、M期中新基因FAM92A1-289的mRNA水平,以GAPDH为内参照。结果 FAM92A1-289基因在肝癌组织中有高表达,且肝癌组织比其癌旁组织表达升高,脑组织中表达最低;在He La细胞各周期时相中以S期表达最高,其他各期表达较低。结论 FAM92A1-289基因在增殖旺盛的肝癌组织中表达最高,且主要在细胞周期的DNA复制期表达,表明FAM92A1-289基因的表达水平与细胞增殖有关,此结果为分析FAM92A1-289功能提供了重要线索。
- 方娟阮绪芝张相华王贤玉
- 关键词：HELA细胞基因表达
