宋鑫
- 作品数：10 被引量：8H指数：2
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- 基于E2蛋白BVDV-1病毒样颗粒的构建及对小鼠的免疫效力评估
- 2023年
- 本研究利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统构建牛病毒性腹泻病毒1型(BVDV-1)E2病毒样颗粒(VLPs),并测定其对小鼠的免疫效力。选用BVDV-1 SWU-Z6株的E 2基因序列为模板,针对昆虫细胞密码子偏嗜性优化合成E 2基因,利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统制备BVDV-1 E2 VLPs。采用间接免疫荧光试验(IFA)和Western blot验证E2蛋白在SF9细胞中的表达,通过电镜鉴定BVDV-1 E2 VLPs的组装。对获得的VLPs进行超离纯化,使用不同剂量的VLPs添加MF59佐剂和CpG-ODN免疫增强剂肌注免疫小鼠,同时设立BVDV商业灭活苗组和PBS空白对照组。二免4周后选用BVDV-1 SWU-Z6毒株以灌胃途径对小鼠进行攻毒,通过小鼠体重变化以及粪便中的病毒载量来评估BVDV-1 E2 VLPs的免疫保护效果。经酶切鉴定和测序验证表明,优化后的E 2基因已正确克隆至杆状病毒穿梭载体pFast Dual中,并获得重组质粒pFast Dual BVDV-1 E2,将重组质粒转化到DH10.Bac感受态细胞经过蓝白斑筛选获得重组杆粒Bacmid-BVDV-1 E2,将重组杆粒转染至SF9细胞,获得重组杆状病毒Baculo-BVDV-1 E2。电镜下观察可见大量直径在80~100 nm的BVDV病毒样颗粒,IFA和Western blot结果证实重组杆状病毒能够正确表达E2蛋白,并具有良好的生物学活性。BVDV-1 E2 VLPs 50μg组小鼠首免2周时ELSIA抗体效价约为1∶10000,加强免疫2周后抗体效价达到1∶100000。攻毒保护试验结果表明,免疫组小鼠在攻毒后第7天表现出体重下降,而后开始回升;在攻毒后第10天采集粪便没有检测到病毒拷贝。与非免疫组小鼠相对比,BVDV-1 E2 VLPs 50μg剂量两次免疫后阻止了因病毒感染而导致体重下降以及消化道内病毒的复制。研究中成功制备了BVDV-1 E2 VLPs,能诱导机体产生较强的体液免疫反应,可使小鼠获得抵抗BVDV-1 SWU-Z6毒株感染的免疫保护力。
- 张家祺贾浠宁周群宋鑫朱晨曦李格格张斌
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒E2蛋白杆状病毒病毒样颗粒免疫原性
- Ⅰ型猫冠状病毒病毒样颗粒、制备方法及应用
- 本发明公开了一种Ⅰ型猫冠状病毒病毒样颗粒、制备方法及应用，所述Ⅰ型猫冠状病毒病毒样颗粒由能够稳定分泌猫冠状病毒E、M、N和S蛋白的四种重组杆状病毒共感染后组装生成，包含完整的猫冠状病毒E、M、N和S蛋白，大小约70～12...
- 张斌周群宋鑫
- Ⅰ型猫冠状病毒病毒样颗粒、制备方法及应用
- 本发明公开了一种Ⅰ型猫冠状病毒病毒样颗粒、制备方法及应用，所述Ⅰ型猫冠状病毒病毒样颗粒由能够稳定分泌猫冠状病毒E、M、N和S蛋白的四种重组杆状病毒共感染后组装生成，包含完整的猫冠状病毒E、M、N和S蛋白，大小约70～12...
- 张斌周群宋鑫
- 杆状病毒表达系统表达BCoV纤突蛋白及其对小鼠的免疫原性
- 2024年
- 旨在为表达牛冠状病毒(bovine coronavirus,BCoV)的纤突蛋白(S蛋白),并评价其作为免疫原免疫小鼠后的免疫效果。本研究以BCoV/SWUN/HXD-4/2021株的全长S基因为模板,针对昆虫细胞进行密码子优化和合成,构建重组质粒pFastBac-Dual-S,与DH10Bac同源重组后转染昆虫细胞收获重组杆状病毒rpFastBac-S,利用基因组PCR、免疫印迹法(Western blot)和间接免疫荧光试验对其进行鉴定,测定杆状病毒滴度。优化和筛选感染剂量对蛋白表达的影响,超速离心纯化蛋白,免疫小鼠和评估其免疫效果。结果显示:优化后全长4108 bp的BCoV S基因CAI(密码子适应指数)从0.39调整为0.87,平均GC含量从35.8%调整为50.6%。经双酶切、PCR验证,重组质粒与重组杆粒均构建成功。用5μg重组杆粒Bacmid-S转染Sf9细胞并传代至第四代后细胞病变趋于稳定,感染杆状病毒约20 h后产生典型病变,收获重组杆状病毒进行鉴定。PCR电泳结果显示重组杆粒携带S目的蛋白基因;间接免疫荧光试验显示,试验组观察到特异性绿色荧光;Western blot结果显示重组杆状病毒rpFastBac-S所表达的蛋白为S目的蛋白,目的条带位于250 ku左右,感染剂量MOI=0.5时蛋白表达量最高。将50μg蛋白、20μg CpG免疫增强剂与等体积MF59佐剂充分混合乳化后,肌肉注射免疫小鼠,间接ELISA试验结果显示,小鼠免疫蛋白后产生了IgG特异性抗体,且抗体水平高于佐剂对照组(P<0.001),最高抗体效价达1∶12800;微量中和试验结果显示,小鼠血清中和效价最高达1∶224,试验组中和效价平均值高于灭活病毒组,但统计学差异不显著(P>0.05)。本研究利用杆状病毒表达系统表达了牛冠状病毒S蛋白,并对S蛋白免疫保护效果做了进一步评价,为后续牛冠状病毒疫苗研究提供了理论依据。
- 喻琦胜朱庆周群宋鑫张家祺陈涛云徐林张朝辉张斌
- 关键词：牛冠状病毒S蛋白杆状病毒表达系统免疫原性
- 抗震救灾彰显以人为本的理念被引量：1
- 2008年
- 中共十六届三中全会提出，“坚持以人为本，树立全面、协调、可持续的发展观，促进经济社会协调发展和人的全面发展。”党的十七大报告则指出科学发展观的第一要义是发展，核心是以人为本，必须坚持以人为本。以人为本，就是根本，就是一切工作的出发点和落脚点。坚持以人为本，就要牢记党的根本宗旨，
- 宋鑫宋玮
- 关键词：以人为本抗震救灾中共十六届三中全会经济社会协调发展科学发展观
- 一种以腺病毒为载体的流行性腹泻病毒疫苗及其制备方法
- 本发明涉及一种以腺病毒为载体的流行性腹泻病毒疫苗及其制备方法。本发明对S基因序列进行密码子优化得到新的S基因序列，使用腺病毒为载体，构建了表达PEDV G2b型S蛋白全长重组腺病毒载体疫苗，利用小鼠和猪进行疫苗的免疫原性...
- 张斌宋鑫岳华汤承任玉鹏陈曦
- 宏基因组学技术分析四川省集约化猪场中仔猪腹泻粪便的病毒种群被引量：1
- 2023年
- 旨在了解四川省集约化猪场腹泻仔猪粪便中病毒种群的变化。于2019年从四川省15个猪场采集腹泻仔猪粪便样本共156份,每个猪场挑取3份样本混合成1个pool样,提取其总RNA并进行高通量测序,利用SOAP denovo软件进行序列组装,并对病毒的种类和分子特征进行研究。分析结果显示,腹泻仔猪粪便样本中的病毒种群包括12个科的20种病毒,以冠状病毒科(Coronaviridae)成员为主,与腹泻相关的主要病原有猪流行性腹泻病毒(porcine pidemic diarrhea virus,PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(porcine infectious gastroenteritis virus,TGEV)和猪轮状病毒(porcine rotavirus,PoRV)。获得PEDV N基因的完整基因组和TGEV、猪星状病毒2型(porcine astrovirus,PAstV-2)、posavirus 1和猪细小病毒4型(porcine parvovirus,PPV-4)的部分基因组。系统发育结果显示,PEDV、TGEV、PAstV-2、posavirus 1和PPV-4均与参考毒株有较近的遗传进化关系。研究结果表明,2019年四川地区仔猪腹泻粪便中病毒种类复杂多样,冠状病毒丰度有所上升,为四川省仔猪腹泻的防控提供了一定的数据支撑。
- 张家祺甲呷格西周群宋鑫张斌
- 关键词：仔猪病毒性腹泻宏基因组学分子特征
- Loop6、Loop7和Loop8参与副猪嗜血杆菌OmpP2抗血清的杀菌作用研究被引量：2
- 2021年
- 为研究副猪嗜血杆菌(HPS)外膜蛋白P2(OmpP2)不同表面环状结构(Loop)在HPS抗血清杀菌过程中发挥的作用。本研究以pBAD18-Km质粒和HPS SC096为模板,PCR扩增卡那霉素抗性基因(Km)片段和含ompP2 TTA终止密码子下臂基因片段。通过重叠延伸PCR扩增融合基因片段Km-ompP2克隆至自杀性质粒pK18mobsacB中,获得重组自杀性质粒pZY01。以HPS SC096为模板经PCR分别扩增ompP2 Loop1~Loop8上臂片段和ompP2 Loop1~Loop 8下游片段,并经重叠延伸PCR扩增各loop基因融合片段(分别缺失Loop1~Loop8基因序列的ompP2片段)并克隆至pZY01,构建各Loop基因缺失的自杀性质粒pZY02~pZY08,所有的自杀性质粒均经PCR鉴定。将正确构建的自杀性质粒pZY01~pZY08通过自然转化法转化至ompP2基因缺失的HPS SC096(SC096ΔompP2)中,构建了HPS ompP2ΔLoop缺失菌株,并均经PCR鉴定后在TSA中传10代,通过PCR方法检测其遗传稳定性。结果显示,正确构建了8个自杀性质粒pZY01~pZY08及缺失各Loop基因的HPS ompP2ΔLoop2、ompP2ΔLoop5、ompP2ΔLoop6、ompP2ΔLoop7和ompP2ΔLoop8,共5个HPS ompP2ΔLoop缺失菌株,且各缺失菌株的Loop基因均能够稳定缺失,表明其均具有较好的遗传稳定性。未获得HPS ompP2ΔLoop1、ompP2ΔLoop3和ompP2ΔLoop4缺失菌株。制备新鲜兔血清并分别测定不同HPS ompP2ΔLoop缺失菌株在50%和90%兔血清中的存活率,分析不同缺失菌株的抗兔血清中补体介导的杀菌作用。结果显示,与HPSΔompP2菌株相比,HPS ompP2ΔLoop2菌株在50%和90%兔血清中的存活率分别增加了4×10^(5)倍和1×10^(6)倍;HPS ompP2ΔLoop5菌株在50%和90%兔血清中的存活率分别增加了3×10^(5)倍和1×10^(6)倍;HPS ompP2ΔLoop6、ompP2ΔLoop7和ompP2ΔLoop8的存活率无显著变化。与野生型SC096株相比,在50%兔血清中,HPS ompP2ΔLoop2、ompP2ΔLoop5、ompP2ΔLoop6、ompP2ΔLoop7和ompP2ΔLoop8缺失菌株的存活率分别降低了53.7%、60.1%、99.8%、99.6%和99.9%;在90%兔血清中,上述HPS om
- 何欣怡周叶周群曹慧宋鑫岳华张斌
- 关键词：副猪嗜血杆菌
- 科学发展观视域下的行政问责制
- 2009年
- 中共十六届三中全会提出＂坚持以人为本,树立全面、协调、可持续的发展观,促进经济社会协调发展和人的全面发展。＂党的十七大报告则指出科学发展观的第一要义是发展,核心是以人为本。以人为本是一切工作的出发点和落脚点。坚持以人为本,就要牢记党的根本宗旨,
- 宋鑫黄桂贞宋玮
- 关键词：科学发展观行政问责制中共十六届三中全会经济社会协调发展以人为本视域
- 2017—2021年成都市猫细小病毒的检测及其VP2基因的变异分析被引量：4
- 2022年
- 本研究旨在通过对成都地区家养猫细小病毒(feline parvovirus,FPV)的分子检测,了解FPV在成都地区的流行及遗传变异情况。2017-2021年分别从四川成都地区采集168份家养猫的腹泻粪便样本,用PCR方法对168份样本进行FPV检测,并选取13份阳性样本进行VP2基因全长的克隆和测序,用MegAlign软件分析FPV核苷酸和氨基酸序列的同源性及变异,通过MEGA 7.0软件用邻近法构建系统进化树分析成都地区FPV的遗传进化情况。结果表明,168份猫样本中检出FPV阳性样本118份,阳性率为70.2%。本研究获得的13株FPV VP2基因与参考毒株之间的同源性为97.1%~100%。VP2蛋白氨基酸分析表明,SMU-D18和SMU-D14毒株序列与new CPV-2a一致,为猫源犬细小毒株。有趣的是,本研究中SMU-D46毒株在第293和297位氨基酸均出现了独特的由Ser(S)到Phe(F)的替换。此外,系统进化分析显示,国内外FPV毒株在进化树中聚类为3个基因群(G1、G2和G3),本研究获得的毒株分别位于G1和G3群中,值得注意的是,商品化的FPV疫苗株位于G2群中,与我国流行的FPV毒株亲缘关系较远。本研究表明,成都市猫群中FPV的流行十分普遍,急需重新评估现有的商品化疫苗的保护效率。
- 周群杨苑宋鑫何欣怡曹慧张斌
- 关键词：猫细小病毒分子流行病学VP2基因变体
