公共文化服务平台

共 7 条记录，以下是 1-7

全选清除导出

排序方式：

诱骗受体:调节炎症细胞因子和趋化因子: 2003年; 诱骗受体 (decoyreceptor)是指那些胞膜外区与功能性的受体胞外区结构相似 ,具有结合配体 ,但胞浆区缺乏转导信号能力的受体。因此 ,诱骗受体可与功能性的受体竞争性结合相同的配体 ,从而在受体水平对免疫功能进行负向调控。从新的角度改变了对传统受体的认识 ,同时为感染 ,肿瘤的研究和治疗策略提供了新的资料、线索与思路。本文就近年来发现的有关诱骗受体及其功能作一综述。; 宋蔚; 关键词：诱骗受体信号转导趋化因子

增强型绿色荧光蛋白真核表达载体的构建和表达被引量：14: 2005年; 　目的　构建增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein, EGFP)编码基因的真核表达载体 pcDNA3.1(+) GFP,并观察其在Hep 2细胞中的表达情况。　方法　据已知的EGFP基因序列,设计合成 1 对引物,并引入Hind Ⅲ和EcoR Ⅴ酶切位点。应用PCR技术,从含有 EGFP的 pAdTrack CMV中扩增 EGFP编码基因。通过 TA连接将其克隆入pGEM T easy载体,经PCR及限制性内切酶鉴定后,插入真核表达质粒pcDNA3.1(+)中,转化Esche richia coli DH5α感受态细胞,于Amp+ LB平板上筛选阳性克隆。重组子经 Hind Ⅲ和EcoRⅤ双酶切、PCR鉴定,将该载体转染人喉癌细胞 Hep 2 后 48 h观察 EGFP表达情况。　结果　成功构建了含 EGFP 编码基因的真核表达载体pcDNA3.1(+) GFP,并成功转染Hep 2细胞,在倒置荧光显微镜下呈现绿色光。　结论　获得可产生绿色荧光的 EG FP,能方便地用作报告基因和筛选标记。; 李小月何金生沈继龙宋蔚汪学龙胡元生; 关键词：绿色荧光蛋白真核表达

人呼吸道合胞病毒G蛋白多肽重组腺病毒的构建、表达与鉴定: 本文采用非复制型腺病毒载体，利用同源重组方法，获得表达G蛋白多肽的非复制型重组腺病毒。本文设计并合成了带有突变核苷酸序列的寡聚核苷酸引物，以G基因RT-PCR产物为模板，采用高保真DNA聚合酶，PCR突变扩增...; 宋蔚; 关键词：合胞病毒呼吸道重组腺病毒; 文献传递

A亚型人呼吸道合胞病毒G基因的克隆、真核表达被引量：2: 2006年; 目的克隆A亚型人呼吸道合胞病毒(HRSV)G基因,构建G基因的真核表达载体,并进行表达和鉴定。方法自行设计引物,利用RTPCR技术,从感染HRSV的HEp2细胞中获得G基因片段,克隆到pGEMTeasy载体,经核酸序列分析,进一步亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+),酶切鉴定后,脂质体法转染COS7细胞,RTPCR和Westernblotting鉴定基因转录和蛋白表达。结果真核表达载体pcDNA3.1(+)G的限制性内切酶分析结果与预期一致,基因序列分析显示没有发生无义突变。转染COS7细胞后,RTPCR检测到G基因有转录,Westernblotting分析观察到G蛋白特异性的表达条带。结论成功克隆A亚型HRSVG基因,并在真核细胞中获得表达。; 李栋梁宋蔚汪红俊李群黄保军胡春松罗畅民何金生; 关键词：呼吸道合胞体病毒

人呼吸道合胞病毒F基因的克隆、真核表达与鉴定被引量：5: 2006年; 目的克隆人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,HRSV)F基因,构建F基因的真核表达载体pcDNA3.1(+)/F,并进行表达和鉴定。方法根据编码F蛋白的基因序列设计引物,通过RT-PCR从感染HRSV的HEp-2细胞中扩增获得F蛋白的基因,然后克隆到pGEM-3zf载体中,序列测定正确后,将其亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+),行酶切鉴定,脂质体法转染COS-7细胞,应用Western blotting方法分析F基因表达情况。结果测序证实得到HRSV F基因序列,序列分析显示没有发生无义突变。转染COS-7细胞后,利用Western blotting方法检测到了F蛋白的特异性条带。结论成功克隆HRSV F基因,并在真核细胞中获得表达。; 袁媛何金生张梅宋蔚李栋梁虞结梅杨兵; 关键词：人呼吸道合胞病毒 F基因真核表达

脂多糖诱导巨噬细胞自噬相关LC3B-GFP荧光聚集体的形成被引量：1: 2012年; 目的构建pEGFP-C1/LC3B重组质粒并转染小鼠巨噬细胞RAW264.7,观察脂多糖(LPS)诱导其自噬相关LC3B-GFP荧光聚集体形成的过程。方法根据编码小鼠微管相关蛋白1轻链3β(LC3B)的开放读码框(ORF)设计引物,RT-PCR扩增小鼠LC3B的ORF,构建pEGFP-C1/LC3B重组质粒;脂质体法转染并筛选稳定表达RAW264.7细胞株,荧光显微镜观察及Western blot鉴定LC3B-GFP融合蛋白表达;LPS刺激稳定转染的RAW264.7细胞株,激光共聚焦显微镜检测不同时间绿色荧光聚集体的分布。结果成功构建真核表达质粒pEGFP-C1/LC3B,并获得稳定表达LC3B-GFP融合蛋白的RAW264.7细胞株,荧光显微镜下可见细胞内有绿色荧光蛋白分布,Western blot鉴定表达LC3B-GFP融合蛋白,激光共聚焦结果显示LPS刺激前融合蛋白呈弥散性分布在胞浆中,而LPS刺激后细胞内有明显绿色荧光聚集体形成并呈时间依赖性逐渐增加。结论成功构建pEGFP-C1/LC3B,转染RAW264.7细胞可正确表达LC3B-GFP融合蛋白,LPS刺激后显示绿色荧光聚集体形成。; 张梅黄保军胡梅琮程艳伟宋蔚黄大可李群胡春松; 关键词：绿色荧光蛋白

真核表达人呼吸道合胞病毒F蛋白的纯化方法被引量：3: 2008年; 目的真核表达人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,RSV)融合蛋白(fusion protein,F),并完成蛋白纯化及纯度测定。方法根据编码F蛋白的基因序列设计引物,PCR方法扩增出3′端带His标签的F基因序列,克隆入pGEM-T-easy载体,经核酸序列分析后,进一步克隆到pcDNA3.1(+)真核表达载体,限制性内切酶鉴定,用脂质体Lipofectamine 2000转染COS-7细胞,72h后再用Western blot检测目的蛋白的表达。Ni柱亲和层析纯化COS-7细胞表达的F蛋白,高效毛细管电泳分析纯化后蛋白纯度。结果核酸序列分析证实获得带His标签的RSVF基因序列,没有发生无义突变。转染COS-7细胞后,利用Western blot方法检测到F蛋白的特异性条带,纯度达99%以上。结论初步建立了真核表达RSVF蛋白的纯化方法,为进一步优化RSVF蛋白制备条件及单克隆抗体及诊断试剂等研究奠定了基础。; 陆燕燕何金生张梅虞结梅谢灿袁媛薛绍礼宋蔚郑娴娴; 关键词：人呼吸道合胞病毒 F基因真核表达纯化

全选清除导出

共1页<1>

宋蔚